Определение микробиологических показателей исследуемой пробы почвы
Определение общих колиформных бактерий (ОКБ) в исследуемой пробе почвы
Приготовили ряд десятикратных разведений. Для этого налили в 3 стерильные пробирки по 4,5 мл 0,9% физиологического раствора хлорида натрия. Из первого разведения, находящегося во флаконе (концентрация 10-1) отобрали стерильной градуированной пипеткой 0,5 мл и перенесли в первую пробирку (концентрация 10-2), затем из нее перенесли 0,5 мл во вторую (концентрация 10-3). Для приготовления каждого разведения использовали стерильные пипетки.
Рисунок 33 – Схема приготовления разведений для определения ОКБ
Посеяли в чашки Петри на среду Эндо из разведений 10-2, 10-3, 10-4 по 0,1 мл суспензий. Чашки подписали, поставили в термостат при температуре 37°С на 24 часа. Учитывали отдельно выросшие колонии красного и малинового цвета. Колонии описали, сделали мазки и окрасили их по Граму.
Определение термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ) в исследуемой пробе почвы
Произвели пересев колоний, выросших на среде Эндо при температуре 37°С методом штриха также на среду Эндо. Чашку подписали, поставили в термостат при температуре 44°С на 24 часа. Учитывали колонии красного и малинового цвета.
Определение общего микробного числа (ОМЧ) в исследуемой пробе почвы
Приготовили по тому же принципу еще 3 разведения: 10-2, 10-3, 10-4. Для приготовления каждого разведения использовали стерильные пипетки.
Рисунок 34 – Схема приготовления разведений для определения ОМЧ
В одну чашку Петри внесли 1 мл из разведения с концентрацией 10-3, во вторую 1 мл из разведения с концентрацией 10-5 и в третью чашку из разведения с концентрацией 10-7. Таким образом, произвели две повторности. Затем во все чашки залили расплавленный МПА, перемешали, дали застыть. Чашки подписали и поставили в термостат часть чашек при температуре 60°С на 24 часа, другую часть при температуре 37°С на 24 часа. После инкубации колонии описали, сделали мазки и окрасили их по Граму.
Для получения сравнимых и более полных результатов произвели пересчет количества обнаруженных микроорганизмов на 1 г абсолютно сухой почвы. Для этого навеску почвы массой 10 г поместили в заранее взвешенную чашку Петри и высушивали в сухожаровом шкафу при температуре 105°С. Первое контрольное взвешивание высушенной почвы произвели через 1 час, затем высушили почву еще раз до постоянного веса.
Результаты
Определение микробиологических показателей исследуемой пробы почвы
Определение общих колиформных бактерий (ОКБ) в исследуемой пробе почвы
Таблица 10 – Число колоний на среде Эндо при температуре 37°С
| № чашки | Концентрация | Количество колоний |
| 10-2 | ||
| 10-3 | ||
| 10-4 |
Для расчета концентрации ОКБ используется формула 1.
X (ОКБ) = 
= 1801,8 КОЕ/мл
Для пересчета концентрации ОКБ на 1 г сырой почвы:
, (3)
где Nc – количество клеток бактерий в 1 г абсолютно сухой почвы, [КОЕ/г];
Nc (ОКБ) = 
= 18018 КОЕ/г
Для пересчета концентрации ОКБ на 1 г сухой почвы:
, (4)
где:
N – количество клеток бактерий в 1 г абсолютно сухой почвы, [КОЕ/г];
Nc – количество клеток бактерий в г сырой почвы, [КОЕ/г];
C – влажность исследуемой почвы, [%].
Навеска влажной почвы имела массу 10 г, после высушивания масса составила 8,2 г, следовательно, влажность исследуемой почвы 18%.
Коли индекс – количество КОЕ/л или КОЕ/г кишечной палочки
Коли индекс = 
[КОЕ/г] (5)
Коли индекс = 
= 3,9 
КОЕ/г
Коли титр – наименьший объем, в котором содержится единица кишечной палочки.
Коли титр = 
[КОЕ/г] (6)
Коли титр = 
= 0,26 
КОЕ/г
Рисунок 35 – Концентрация 10-2 Рисунок 36 – Концентрация 10-3
Рисунок 37 – Концентрация 10-4
При температуре 37°С на чашках со средой Эндо выросли колонии двух типов:
1 тип: средние колонии; форма колоний – круглая; профиль колоний – выпуклый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – жидкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – непрозрачные; цвет колоний – розовый. Окраска по Граму выявила мелкие грамотрицательные палочки.
2 тип: крупные колонии; форма колоний – неправильная; профиль колоний – выпуклый; край колоний – волнистый; структура колоний – неоднородная; консистенция колоний – густая, вязкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – непрозрачные; цвет колоний – розовый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные кокки.
|
Рисунок 38 – препарат 1 типа
колоний
Определение термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ) в исследуемой пробе почвы
При температуре 44°С на среде Эндо колоний не выросло. Это говорит о том, что в образце почвы нет термотолерантных колибактерий. Показатель ТКБ = 0.