Цитохимическая характеристика клеток крови и костного мозга в норме

Цитохимическая характеристика элементов гемопоэза может быть проведена начиная со стадии морфологически распознаваемых пролиферирующих клеток (эритробласта, миелоб-ласта, монобласта, лимфобласта). При этом, при описании химических и энзимо-химичес-ких особенностей этого и других классов кроветворных клеток, предпочтение должно быть отдано реакциям, которые могут иметь диагностическое или дифференциально-диагности­ческое значение.

Уже в первой морфологически распознаваемой клетке гранулопоэза — миелобласте об­наруживаются все цитохимические признаки, свойственные этому ряду. В цитоплазме мие-лобластов выявляется положительная реакция при определении активности пероксидазы и хлорацетатэстеразы. При проведении PAS-реакции наблюдается диффузное окрашивание цитоплазмы, а при окраске Суданом черным В — умеренная суданофилия. В этих же клетках отмечается активность кислой фосфатазы, при выявлении которой интенсивность диффуз­ной окраски цитоплазмы колеблется от слабой до умеренной. Как и во всех пролиферирую­щих клетках гранулоцитарного ряда, в миелобластах не выявляется активность щелочной фосфатазы. Реакция при определении активности неспецифической эстеразы — слабо поло­жительная, не ингибируется фторидом натрия.

Как правило, активность разных ферментных систем, содержание гликогена и липидов увеличиваются по мере созревания клеточных элементов гранулоцитопоэза.

Нейтрофильные, эозинофильные и базофильные гранулоциты отличаются по ряду ци­тохимических признаков. В нейтрофильных палочко- и сегментоядерных лейкоцитах глико­ген выявляется в виде отдельных гранул вишневого цвета, выполняющих цитоплазму, или диффузной интенсивной окраски. В эозинофильных лейкоцитах гликоген располагается между специфическими гранулами, которые остаются неокрашенными. В базофильных гра-нулоцитах положительная PAS-реакция после предварительной обработки мазков амилазой сохраняется. Гранулы нейтрофильных лейкоцитов окрашиваются Суданом черным В в темно-серый или черный цвет. В зрелых эозинофильных гранулоцитах центральная часть су-данотрицательная, она окрашивается в желто-коричневый цвет, а периферия — суданополо-жительная. В эозинофильных миелоцитах, метамиелоцитах, палочко- и сегментоядерных лейкоцитах активность пероксидазы и кислой фосфатазы выше, чем в соответствующих ней­трофильных клетках, но зато совершенно не выявляется активность хлорацетатэстеразы и щелочной фосфатазы, которая в норме обнаруживается в 18—54 % зрелых нейтрофильных лейкоцитов периферической крови и костного мозга. В базофильных лейкоцитах также не выявляется активность этих ферментов и пероксидазы. Нейтрофильные, эозинофильные и

базофильные гранулоциты проявляют слабую или умеренную эстеразную активность при ис­пользовании в качестве субстрата а-нафтилацетата и нафтол-АБ-ацетата.

В клетках мегакариоцитарного ряда с помощью PAS-реакции выявляются многочислен­ные гранулы, окрашенные в вишнево-фиолетовый цвет. Столь же выраженную реакцию дают и тромбоциты. Контрольный тест с амилазой указывает на то, что определяемое веще­ство является гликогеном. При окраске Суданом черным В липиды в мегакариоцитах не об­наруживаются. Реакции на пероксидазу, хлорацетатэстеразу и щелочную фосфатазу дают от­рицательные результаты. Активность кислой фосфатазы, определяемая методом одновремен­ного азосочетания, в клетках мегакариоцитарного ряда и тромбоцитах умеренная; она пол­ностью подавляется при добавлении в инкубационную среду 0,05 М виннокислого калия-на­трия. Приблизительно такой же уровень активности в мегакариоцитах неспецифической эс-теразы, чувствительной к действию натрия фторида.

Наиболее характерным признаком моноцитов, как и всех клеток системы мононуклеар-ных фагоцитов, отличающим их от клеток остальных ростков кроветворения, является высо­кая активность неспецифической эстеразы, которая эффективно ингибируется при добавле­нии в инкубационную среду натрия фторида в концентрации 1,5 мг/мл (0,03М). В то же время этот ингибитор не оказывает влияния на более слабую активность этого фермента в других кроветворных клетках. В моноцитах крови умеренная и выраженная активность кис­лой фосфатазы, которая ингибируется ионами тартрата (виннокислого калия-натрия). По своей значимости в идентификации клеток системы мононуклеарных фагоцитов методика определения активности кислой фосфатазы приближается к маркерной реакции на неспеци­фическую эстеразу. В большей части моноцитов периферической крови выявляют актив­ность пероксидазы, уровень которой значительно ниже, чем в наиболее молодых клетках гранулоцитарного ряда. Для большей надежности можно использовать реакцию на выявле­ние нафтол-АБ-О-хлорацетатэстеразы. При этом в молодых и незрелых клетках нейтрофиль-ного ряда всегда фиксируют окрашивание цитоплазмы разной степени, а в моноцитах реак­ция всегда отрицательная [Глузман Д.Ф., 1978]. В моноцитах также незначительное количе­ство липидов и гликогена. По степени суданофилии моноциты значительно уступают клет­кам гранулоцитарного ряда. При PAS-реакции в цитоплазме моноцитов наблюдают диффуз­ное окрашивание или отложение мелких гранул по периферии клетки. Интенсивность ок­раски ниже, чем в зрелых гранулоцитах. Многие авторы указывают на выраженную цитохи­мическую гетерогенность этой группы клеток периферической крови [Глузман Д.Ф., 1978; Jansa, Papousek, 1971; Kaplow, 1975].

Лимфоциты — самые «бедные» в цитохимическом отношении клетки. Небольшая часть этих клеток содержит лишь выявляемые цитохимически гликоген (2—30 %), кислую фосфа­тазу и кислую а-нафтилацетатэстеразу. В них никогда не определяется активность перокси­дазы и нет липидов. Вместе с тем положительная реакция на кислую фосфатазу и кислую а-нафтилацетатэстеразу и тип реакции на эти ферменты позволяют разграничить различные виды лимфоцитов.

При цитохимическом исследовании чаще пользуются полуколичественной оценкой ре­зультатов, используя принцип Астальди, основанный на выявлении различной степени ин­тенсивности специфической окраски. В зависимости от нее исследуемые клетки делят на 4 группы: с отрицательной реакцией (-), слабоположительной (+), положительной (++) и резко положительной (+++). Для количественного выражения результатов подсчитывают 100 клеток определенного вида, дифференцируя их по степени интенсивности окраски, затем число клеток с одинаковой интенсивностью окраски суммируют и вычитают количест­во клеток без окраски, результат выражают в процентах. Например, при исследовании актив­ности миелопероксидазы в нейтрофилах из 100 просмотренных клеток: в 2 — активность фермента не выявлена (—); в 3 — специфическая окраска была слабой (+); в 20 — более ин­тенсивной (++) и в 75 — резко положительной (+++). Результат определения активности миелопероксидазы в нейтрофилах в таком случае составит: (3 + 20 + 75) — 2 = 98 %.

Результат можно выразить в виде среднего цитохимического коэффициента (СЦК) по L. Kaplow (1955). Для количественного выражения результатов подсчитывают 100 клеток оп­ределенного вида, дифференцируя их по степени интенсивности окраски, затем число кле­ток с одинаковой интенсивностью окраски умножают на соответствующее данной группе число плюсов, сумму этих произведений делят на 100, что и составляет СЦК. Например, при исследовании активности миелопероксидазы в нейтрофилах из 100 просмотренных клеток: в 2 активность фермента не выявлена (-); в 3 специфическая окраска была слабой (+); в 20 более интенсивной (++) и в 75 резко положительной (+++). СЦК для одной клетки в таком случае составит:

(2 ■ 0) + (3 • 1) + (20 • 2) + (75 • 3) : 100 = 2,68.

Нормы для всех цитохимических показателей клеток необходимо разрабатывать каждой ла­боратории отдельно. Это обусловлено наличием различных реактивов и степенью их чистоты.