Преимущества иммерсионной системы

1. Большее увеличение (увеличивает в 90 раз вместо 40 в сухой системе микроскопии)

2. Лучшая освещенность за счет создания однородной среды для прохождения лучей света с помощью иммерсионного масла

- Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом микроскопе. Фазово-контрастная микроскопия основана на явлении интерференции света, прошедшего и не прошедшего через объект, и позволяет наблюдать прозрачные объекты, отличающие­ся от окружающей среды (или других структур клетки) по показателю преломления или по толщине и вызывающие изменение фазы прошедшего через них света. Благодаря специ­альному приспособлению в объективе (фазовая пластинка) и в конденсоре (кольцевая диафрагма) эти объекты выглядят более темными (позитивный фазовый контраст) или более светлыми (негативный фазовый контраст) по сравнению с окружающей средой. Фазово-контрастная микроскопия применяется также для изучения клеток культуры ткани, наблюдения действия различных вирусов на клетки и т.п.

- Темнопольная микроскопия (ультрамикроскопия) основана на явлении светорас­сеивания. При темнопольной микроскопии в объектив попадают только лучи, рассеянные объектом, и не попадают прямые лучи от осветителя. Поэтому наблюдаемые микроорга­низмы кажутся ярко светящимися на темном фоне. Темнопольную микроскопию применяют для прижизненного изучения лептоспир, спиро­хет, а также микроорганизмов слишком мелких, чтобы их можно было различить при обычном светлопольном освещении. С помощью этого типа микроскопии изучают препараты типа «раздавленная капля». Для темнопольной микроскопии используют обыч­ные объективы и специальные темнопольные конденсоры.

- Люминесцентная микроскопия основана на использовании явления флюоресцен­ции. Применяют специальные люминесцентные микроскопы или приспособления к обыч­ным микроскопам. Так как большинство микроорганизмов не обладает собственной люминесценцией, то их предварительно окрашивают (флюорохромируют) сильно разве­денными растворами специальных красителей (флюорохромы), которые связываются с определенными структурами клетки. Люминесцентная микроскопия применяется также для цитохимического изучения живых и фиксированных микроорганизмов, включений в клетках, образуемых вирусами. Флюорохромы избирательно связываются с полимерами клеток (акридиновый оранжевый, связываясь с ДНК, флюоресцирует зеленым, а с РНК – красным цветом).

Люминесцентную микроскопию применяют также для выявления антигенов и антител. С этой целью используют метод иммунофлюоресценции (люминесцентно-серологический метод). Этот метод позволяет выявить в препарате микробы, содержащие определенные антигены. Для их обнаружения необходимо иметь антисыворотки, содержащие антитела к этим антигенам (к антисывороткам химическим путем присоединены молекулы флюорохромов - люминесцирующие сыворотки). На фиксированный препарат во влажной камере наносят люминесцирующую сыворотку, инкубируют, промывают раствором хлорида натрия, высушивают и рассматривают в люминесцентном микроскопе. Если в препарате есть микробы, содержащие антиген, антитела к которому были в люминесцирующей сыворотке, они ярко светятся. Остальные микробы не люминесцируют.

- Электронная микроскопия. Изображение в электронном микроскопе образуется не с помощью световых лучей и стеклянных линз, а с помощью потока электронов, который фокусируется электрическим или магнитным полем. Разрешающая способность примерно в 2000 раз больше, чем светового (и составляет 0,15 нм), и с его помощью можно увидеть даже крупные молеку­лы. Объекты при электронной микроскопии находятся в глубоком вакууме, поэтому подвергаются фиксации и специальной обработке. Кроме того, они должны быть очень тонкими, т.к. поток электронов сильно поглощается объектом (используют ультратонкие срезы толщиной 20-50 нм, помещенные на тончайшие пленки). Применение электронного микроскопа значительно расширило знания о вирусах, фагах и других микроорганизмах. Наиболее широко применяется просвечивающая и сканирующая электронная микроскопия. Просвечивающая применяется для изучения ультратонких срезов микробов, тканей, строения мелких объектов (вирусов, жгутиков, мембран). Сканирующая применяется для изучения поверхности объектов.

К работе № 3