Работа №23 Количественное определение аскорбиновой кислоты (витамина С) в моче

Содержание аскорбиновой кислоты в моче характеризует обеспеченность организма этим витамином. Однако при гиповитаминозе содержание его в моче не всегда уменьшается. Аскорбиновая кислота обесцвечивает окрашенный раствор 2,6 – дихлорфиноиндофинола путем его востановления в кислой среде, предохраняющий витамин от разрушения.

Реактивы:1)моча 2) дистиллированная вода; 3) уксусная кислота, концентрированная; 4) 2,6-дихлорфенолиндофенол,0,001н.расвор.

Ход работы:В коническую колбу приливают 10мл мочи и такое же количество дистиллированной воды, перемешивают, подкисляют 1мл уксусной кислоы и титруют раствором 2,6 – дихлорфенолиндофенола до розовой окраски. Расчет производят по формуле:

Х = ^{0,088 *А * Б}

В

где: Х – количество витамина, мг/су; 0,088 - количество витамина С, эквивалентное 1мл 0, 001 н. раствора 2,6 – дихлорфенолиндофенола, мг; А-количество 0,001н. раствора 2,6 – дихлорфенолиндофенола, израсходованное на титрование, мл; Б- количество млчи, выделенной за сутки; В- количество мочи, взятой для исследования (10мл).

У здоровых людей в моче содержится 0,02- 0,06 г/л витамина С, а за сутки его выделяется 24-75 мг.

Задания для контроля

1. Что называют витаминами? Как их классифицируют?
2. Каково значение витаминов в метаболизме в организме человека?
3. Каково химическое строение, суточная потребность и биологическая роль витаминов, растворимость в жирах, - А, Д, Е, F?
4. Каково химическое строение, суочная поребность и биологическая роль витаминов, растворимых в воде – В₁, В_2, В₆, В₁₂, РР, Н, С, Р, панотеновой кислоты?

Раздел VI

СВОЙСТВА ФЕРМЕНТОВ, ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА СКОРОСТЬ ХИМИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

Работа №24 Ферментный гидролиз крахмала.

Принцип. Фермент слюны амилаза при определенных условиях производит гидролиз крахмала до мальтозы и глюкозы.

H2O H2O H2O

(C6H10O5) n ———→(C6H10O5) x ———→ y C12H22O11 ———→ n C6H12O6

амилаза амилаза амилаза

Обнаружение продуктов гидролиза проводят с помощью реакций с раствором йода и реакции Троммера. Негидролизованный крахмал дает с йодом синее окрашивание (положительная реакция), глюкоза такого окрашивания не дает. Положительную реакцию Троммера (кирпично-красное окрашивание) дает глюкоза, тогда как крахмал такой реакции не дает.

Реактивы:

1) Крахмал, 1% раствор;

2) Слюна, водный раствор (ополоснуть рот водой, снова набрать в рот немного

воды, подержать 2 минуты, выпустить на приготовленный фильтр, фильтрат

использовать для работы);

3) Раствор йода 1%, в 2% растворе йодида калия;

4) Сульфат меди, 5% раствор;

5) Гидроокись натрия, 10% раствор.

Ход работы. В две пробирки наливают по 10 капель раствора крахмала. В 1-го вносят 5 капель воды (контроль), а во 2-ю - 5 капель раствора слюны. Перемешивают и ставят в термостат на 15 минут при 37° С.

В две чистые пробирки отбирают по 4 капли содержимого первой пробирки (контроль). В одну из них прибавляют 1 каплю раствора йода. Наблюдают и записывают результат. В другую добавляют 1 каплю сульфата меди и 4 капли гидроокиси натрия, нагревают до кипения. Отмечают результат.

Аналогичные реакции проделывают с содержимым 2-й пробирки.

Результаты оформляют в тетради для протоколов в виде таблицы.

Гидролиз крахмала амилазовой слюны.

№ пробирки	Субстрат	Фермент	Температура	Реакции
с йодом	Троммера
	Крахмал	Амилаза	37 °С	-	+
	Крахмал	Амилаза (прокипячённая)	100°С	+	-

Работа №25 Кинетика ферментов. Специфичность действия ферментов.

Принцип. Ряд ферментов осуществляет расщепление строго определенных веществ, т.е. обладает абсолютной специфичностью. Однако большинство ферментов имеет относительную специфичность - расщепляет группу веществ, имеющих одинаковые связи в молекуле (пептидные, эфирные и др.). Специфическим субстратом для фермента амилазы является крахмал, для фермента сахаразы — сахароза.

Реактивы:

1) Крахмал, 1% раствор;

2) Сахароза, 2% раствор;

3) Слюна, раствор;

4) Сахараза из дрожжей, раствор (1г дрожжей растирают в ступке с 2г стеклянного песка, приливают 97 мл дистиллированной воды и 2 мл толуола, раствор фильтруют).

А) Специфичность амилазы.

Ход работы.В одну пробирку вносят 10 капель раствора крахмала, в другую - такой же количество сахарозы. В обе пробирки добавляют по 4 капли раствора слюны, помещают в термостата на 15 минут при температуре 37° С.

С содержимым пробирок выполняют реакцию с раствором йода и реакцию Троммера. Результаты записывают.

Б) Специфичность сахаразы.

Ход работы.В одну пробирку вносят 10 капель раствора крахмала, в другую - такое же количество раствора сахарозы. В обе пробирки добавляют по 4 капли раствора сахаразы, помещают в термостат на 15 минут при температуре 37° С. С содержимым каждой пробирки выполняют реакцию с раствором йода и реакцию Троммера. Результаты записывают. Делают общий вывод о расщеплении субстратов только специфическими ферментами.

Результаты работы оформляют в тетради для протоколов в виде таблицы.

Определение специфичности действия ферментов

№ пробирки	Субстрат	Фермент	Реакции
с йодом	Троммера
	Крахмал	Амилаза	-
	Крахмал	Сахароза		-
	Сахараза	Амилаза	-	-
	Сахараза	Сахароза	-