Рецепторы, связанные с гетеротримерными G-белками (или система вторичных посредников)

Рецепторы, связанные с G-белками, представляют собой трансмембранные белки. Сайт связывания с лигандом находится вне клетки, домен белка внутриклеточный находится в связи с другим белком - G-белком. А рядом с этим комплексом «рецептор+G-белок» находится другой мембранный белок-фермент, называемый аденилатциклазой.

Схема реализации эффекта при этом следующая:

1. Соединяется рецептор и лиганд на внешней части мембраны.

2. Рецептор меняет свою конформацию (форму), что его активирует.

3. Активация рецептора приводит к тому, что G-белок диссоциирует (разделяется) на субъединицы: α и βγ.

4. βγ-субъединица в свою очередь активирует рядом расположенную аденилатциклазу.

5. Аденилатциклаза начинает превращать аденозинтрифосфат (который находится в гиалоплазме клетки) в циклический аденозинмонофосфат.

6. Циклический аденозинмонофосфат (цАМФ) в свою очередь активирует протеинкиназы, которые фосфорилируют (присоединяют фосфатную группу).

7. Протеинкиназы в свою очередь изменяют активность белков внутри клетки.

8. Информация, с помощью фосфорилированных (активированных) внутриклеточных белков (пострецепторный передатчик), доставляется в генетический аппарат или ключевым ферментам и структурным белкам цитоплазмы. В результате этого и вызывается (возникает) тот конечный эффект (ответ), который «требовал» от клетки лиганд:

¡ изменяется активность соответствующих ферментов или структурных белков цитоплазмы;

¡ изменяется активность соответствующих генов и скорость синтеза ферментов или структурных белков.

Внутри клетки циклический АМФ разрушается фосфодиэстеразой.

Нами на лекции и выше рассмотрен пример с аденилатциклазой, однако в качестве вторичного посредника может выступать гуанилатциклаза. Принцип тот же, отличие в том, что образуется не циклический аденозинмонофосфат, а циклический гуанозинмонофосфат.

Кроме того, G белок в выше описанном примере является Gs белком(s-стимулирующий), однако бывает еще Gi (ингибирующий) белок, блокирующий аденилатциклазу.

Рецепторы, связанные с тирозинкиназной активностью

По структуре это — трансмембранные белки, субъединицы которых связаны дисульфидными мостиками. Сайт связывания с лигандом находится вне клетки. Соединение лиганда приводит, как правило, к объединению нескольких рецепторов вокруг одного лиганда: один лиганд и два рецептора - димеризация рецептора; один лиганд и три рецептора – тримеризация рецептора и т.д.

Дальнейшая схема реализации эффекта при этом следующая:

1. Лиганд соединяется с 2,3 и т.д. рецепторами.

2. Происходит изменение конформации рецептора, его внутриклеточной части.

3. Рецепторы с тирозинкиназной активностью фосфорилируют последующие внутриклеточные белки, часто тоже являющиеся протеинкиназами, и таким образом передают сигнал внутрь клетки.

4. Информация, с помощью фосфорилированных (активированных) внутриклеточных белков (пострецепторный передатчик), доставляется в генетический аппарат или ключевым ферментам и структурным белкам цитоплазмы. В результате этого и вызывается (возникает) тот конечный эффект (ответ), который «требовал» от клетки лиганд:

¡ изменяется активность соответствующих ферментов или структурных белков цитоплазмы;

¡ изменяется активность соответствующих генов и скорость синтеза ферментов или структурных белков.

То есть, соответствующая адаптационная программа на действие сигнальной молекулы включается, и клетка может нормально функционировать в изменившихся условиях.

Виды трансмембранного переноса.

Пассивный транспорт(путем простой диффузии) - вид транспорта, в основе которого лежит перенос веществ через плазмолемму по концентрацион­ному градиенту без использования специальных молекул и затрат энергии. Примером простой диффузии является транспорт газов (ки­слород, СО₂) через бислойлипидов.

Однако перенос через плазмолемму большинства веществ опреде­ляется наличием специализированных белковых комплексов — перенос­чиков, каналов, насосов, рецепторов.

Катализируемый транспорт.Осуществляется с помощью белков-переносчиков (полуинтегральные белки-мембраны). Белок-переносчик с третичной структурой (Х) имеет акцепторную зону, с помощью которой он присоединяет (акцептирует крупные молекулы – глюкозу, аминокислоты). Меняя третичную структуру (на У) белок-переносчик может проходить гидрофобную серцевину липидного бислоя и переносить крупные молекулы в клетку. Вернувшись после открепления крупной молекулы белок, опять принимает структуру (Х) с акцепторной зоной.

Пассивный транспорт

Пассивный перенос веществ через клеточные мембраны не тре­бует затраты энергии метаболизма. Активный транспорт осуществля­ется транспортными аденозинтрифосфатазами (АТФазами) и проис­ходит за счет энергии гидролиза АТФ.

Схематически основные виды транспорта веществ через мембрану клеток представлены на рис.

Виды пассивного и активного транспорта веществ через мембрану.
	1,2 — простая диффузия через бислой и ионный канал, 3 — облегченная диффузия, 4 — первично-активный транспорт, 5 — вторично-активный транспорт.

Простая диффузия

Диффузия представляет собой процесс, при помощи которого газ или растворенные вещества распространяются и заполняют весь доступный объем.

Молекулы и ионы, растворенные в жидкости, находятся в хаоти­ческом движении, сталкиваясь друг с другом, молекулами раствори­теля и клеточной мембраной. Столкновение молекулы или иона с мембраной может иметь двоякий исход: молекула либо «отскочит» от мембраны, либо пройдет через нее. Когда вероятность последнего события высока, то говорят, что мембрана проницаема для данного вещества.

Если концентрация вещества по обе стороны мембраны различна, возникает поток частиц, направленный из более концентрированно­го раствора в разбавленный. Диффузия происходит до тех пор, пока концентрация вещества по обе стороны мембраны не выравнивается. Через клеточную мембрану проходят как хорошо растворимые в воде {гидрофильные) вещества, так и гидрофобные, плохо или совсем в ней нерастворимые.

Гидрофобные, хорошо растворимые в жирах вещества, диффунди­руют благодаря растворению в липидах мембраны. Вода и вещества хорошо в ней растворимые проникают через временные дефекты углеводородной области мембраны, т.н. кинки, а также через поры, постоянно существующие гидрофильные участки мембраны.

В случае, когда клеточная мембрана непроницаема или плохо про­ницаема для растворенного вещества, но проницаема для воды, она подвергается действию осмотических сил. При более низкой кон­центрации вещества в клетке, чем в окружающей среде, клетка сжи­мается; если концентрация растворенного вещества в клетке выше, вода устремляется внутрь клетки.

Осмос

Осмос — движение молекул воды (растворителя) через мембрану из области меньшей в область большей концентрации растворенного вещества. Осмотическим давлением называется то наименьшее дав­ление, которое необходимо приложить к раствору для того, чтобы предотвратить перетекание растворителя через мембрану в раствор с большей концентрацией вещества.

Молекулы растворителя, как и молекулы любого другого вещества, приводятся в движение силой, возникающей вследствие разности химических потенциалов. Когда какое-либо вещество растворяется, химический потенциал растворителя уменьшается. Поэтому в облас­ти, где концентрация растворенного вещества выше, химический по­тенциал растворителя ниже. Таким образом, молекулы растворителя, перемещаясь из раствора с меньшей в раствор с большей концент­рацией, движутся в термодинамическом смысле «вниз», «по гради­енту».

Объем клеток в значительной степени регулируется количеством содержащейся в них воды. Клетка никогда не находится в состо­янии полного равновесия с окружающей средой. Непрерывное дви­жение молекул и ионов через плазматическую мембрану изменяет концентрацию веществ в клетке и, соответственно, осмотическое давление ее содержимого. Если клетка секретирует какое-либо ве­щество, то для поддержания неизменной величины осмотического давления она должна либо выделять соответствующее количество воды, либо поглощать эквивалентное количество иного вещества. Поскольку среда, окружающая большинство клеток гипотонична, для клеток важно предотвратить поступление в них больших количеств воды. Поддержание же постоянства объема даже в изотонической среде требует расхода энергии, поэтому в клетке концентрация ве­ществ неспособных к диффузии (белков, нуклеиновых кислот и т.д.) выше, чем в околоклеточной среде. Кроме того, в клетке постоянно накапливаются метаболиты, что нарушает осмотическое равновесие. Необходимость расходования энергии для поддержания постоянства объема легко доказывается в экспериментах с охлаждением или ингибиторами метаболизма. В таких условиях клетки быстро набу­хают. Для решения «осмотической проблемы» клетки используют два способа: они откачивают в интерстиций компоненты своего содер­жимого или поступающую в них воду. В большинстве случаев клет­ки используют первую возможность — откачку веществ, чаше ионов, используя для этого натриевый насос.

В целом объем клеток, не имеющих жестких стенок, определяется тремя факторами:

а) количеством содержащихся в них и неспособ­ных к проникновению через мембрану веществ;

б) концентрацией в интерстиций соединений, способных проходить через мембрану;

в) соотношением скоростей проникновения и откачки веществ из клетки.

Большую роль в регуляции водного баланса между клеткой и окружающей средой играет эластичность плазматической мембраны, создающей гидростатическое давление, препятствующее поступлению воды в клетку. При наличии разности гидростатических давлений в двух областях среды вода может фильтроваться через поры барьера, разделяющего эти области.

Диффузия ионов

Диффузия ионов происходит, в основном, через специализированные белковые структуры мембраны — ионные ка­налы, когда они находятся в открытом состоянии. В зависимости от вида ткани клетки могут иметь различный набор ионных каналов. Различают натриевые, калиевые, кальциевые, натрий-кальциевые и хлорные каналы. Перенос ионов по каналам имеет ряд особеннос­тей, отличающих его от простой диффузии. В наибольшей степени это касается кальциевых каналов.

Ионные каналы могут находиться в открытом, закрытом и инактивированном состояниях. Переход канала из одного состояния в другое управляется или изменением электрической разности потен­циалов на мембране, или взаимодействием физиологически активных веществ с рецепторами. Соответственно, ионные каналы подразде­ляют на потенциал-зависимые и рецептор-управляемые. Избирательная проницаемость ионного канала для конкретного иона опре­деляется наличием специальных селективных фильтров в его устье.

Облегченная диффузия

Через биологические мембраны кроме воды и ионов путем простой диффузии проникают многие вещества (от этанола до сложных лекарственных препаратов). В то же время даже сравнительно небольшие полярные молекулы, например, гликоли, мо­носахариды и аминокислоты практически не проникают через мем­брану большинства клеток за счет простой диффузии. Их перенос осуществляется путем облегченной диффузии. Облегченной называется диффузия вещества по градиенту его концентрации, которая осущест­вляется при участии особых белковых молекул-переносчиков.

Транспорт Na⁺, K⁺, Сl^-, Li⁺, Ca²⁺, НСО₃^- и Н⁺ могут также осуществлять специфические переносчики. Характерными чертами этого вида мембранного транспорта являются высокая по сравнению с простой диффузией скорость переноса вещества, зависимость от строения его молекул, насыщаемость, конкуренция и чувствитель­ность к специфическим ингибиторам — соединениям, угнетающим облегченную диффузию.

Все перечисленные черты облегченной диффузии являются резуль­татом специфичности белков-переносчиков и ограниченным их ко­личеством в мембране. При достижении определенной концентрации переносимого вещества, когда все переносчики заняты транспорти­руемыми молекулами или ионами, дальнейшее ее увеличение не при­ведет к возрастанию числа переносимых частиц — явление насыщения. Вещества, сходные по строению молекул и транспортируемые одним и тем же переносчиком, будут конкурировать за переносчик — явление конкуренции.

Различают несколько видов транспорта веществ посредством облегченной диффузии

Классификация способов переноса через мембрану.

Унипорт,когда молекулы или ионы переносятся через мебрану независимо от наличия или переноса других соединений (тран­спорт глюкозы, амино­кислот через базальную мембрану эпителиоцитов);

Симпорт,при котором их перенос осуществляется одновременно и однонаправленно с другими со­единениями (натрий- за­висимый транспорт Сахаров и аминокислот Na⁺ K⁺, 2Cl^- и котран-спорт);

Антипорт— (транспорт вещества обусловлен одновремен­ным и противоложно направленным транспортом другого соедине­ния или иона (Na⁺/Ca²⁺, Na⁺/H⁺ Сl^-/НСО₃^- — обмены).

Симпорт и антипорт — это виды котранспорта,при которых скорость пере­носа контролируется всеми участниками транспортного процесса.

Природа белков-переносчиков неизвестна. По принципу действия они делятся на два типа. Переносчики первого типа совершают челночные движения через мембрану, а второго — встраиваются в мембрану, образуя канал. Промоделировать их действие можно с помощью антибиотиков-ионофоров, переносчиком щелочных метал­лов. Так, один из них — (валиномицин) — действует как истинный переносчик, переправляющий калий через мембрану. Молекулы же грамицидина А, другого ионофора, встаиваются в мембрану друг за другом, формируя «канал» для ионов натрия.

Большинство клеток обладают системой облегченной диффузии. Однако перечень метаболитов, переносимых с помощью такого ме­ханизма, довольно ограничен. В основном, это сахара, аминокисло­ты и некоторые ионы. Соединения, являющиеся промежуточными продуктами обмена (фосфорилированные сахара, продукты метабо­лизма аминокислот, макроэрги), не транспортируются с помощью этой системы. Таким образом, облегченная диффузия служит для переноса тех молекул, которые клетка получает из окружающей среды. Исключением является транспорт органических молекул через эпителий, который будет рассмотрен отдельно.
3. Понятие о рецепторах

Мембранные рецепторы

Большинство мембранных рецепторов — это трансмембранные (интегральные) белки, т.е. проходят сквозь всю толщу мембраны. Многие из мембранных белков-рецепторов связаны с углеводными цепями, то есть представляют собой гликопротеиды. На их свободных поверхностях находятся олигосахаридные цепи (гликозильные группы), похожие на антенны. В целом у рецептора, представляющего собой трансмембранный белок можно выделить внешнюю часть, обращенную наружу, внутримембранную часть – находящаяся в толще фосфолипидного бислоя и внутреннюю – обращенную во внутрь и в ряде случаев (о чем будет сказано ниже) связанную с целом рядом других белков – белков вторичных посредников.

Мембранные рецепторы делят на 2 больших класса, которые отличаются своими физиологическими механизмами работы: метаботропные рецепторы и ионотропные рецепторы.