Возбудители вирусных инфекций нервной системы и прионы


Нейротропные вирусы — возбудители нейровирусных ин­фекций представляют собой группу неродственных вирусов, обладающих способностью проникать и репродуцироваться в клетках нервной системы — нейротропизмом. Они относятся к различным семействам ДНК- и РНК-содержащих вирусов, патогенных для человека (табл. 19.1), существенно различа­ются по механизмам и путям передачи, способам проникно­вения и особенностям взаимодействия с организмом в ходе инфекционного процесса. Нейротропные вирусы могут пора­жать как центральные (головной и спинной мозг), так и периферические отделы нервной системы. Многие вирусы избирательно поражают мозговые оболочки, вызывая "асеп­тические" (небактериальные) менингиты. Ряд вирусов, не об­ладающих нейротропизмом, способен вызывать аутоиммун­ные заболевания нервной системы за счет антигенной ми­микрии — наличия антигенов, имеющих структурное сходст­во с антигенами нервных волокон, в первую очередь основ-

Название возбудителя Вызываемые заболевания СЕМЕЙСТВО Picomaviridae РОД Enterovirus полиовирусы серотипы I, II, III Полиомиелит вирусы Коксаки — серотипы Асептический менингит, энце-А-9, В-2, В-3, В-4 и др. фалит (см. также главы 18, 21) вирусы ECHO — серотипы 4, Энцефалит, асептический ме-6, 9, 11, 16, 30 и др. нингит (см. также главы 18, 21) СЕМЕЙСТВО Ftovmridae* РОД Flavivirus вирус клещевого энцефалита Клещевой энцефалит (TBEV) вирус японского энцефалита Японский энцефалит (JEV) вирус энцефалита Сент-Луи Энцефалит Сент-Луи СЕМЕЙСТВО Togaviridae* РОД Alfavirus вирус омской геморрагической Геморрагическая лихорадка с лихорадки поражением ЦНС вирус восточного энцефало- Восточно-американский энце-миелита лошадей фаломиелит вирус западного энцефаломие- Западно-американский энце-лита лошадей фаломиелит вирус венесуэльского энцефа- Венесуэльский энцефаломиелит ломиелита лошадей СЕМЕЙСТВО Bunyaviridae* РОД Bunyavirus вирус калифорнийского энце- Калифорнийский энцефалит фалита РОД Nairovirus вирус крымской геморрагичес- Геморрагическая лихорадка с кой лихорадки поражением ЦНС СЕМЕЙСТВО Arenaviridae вирус лимфоцитарного хорио- Лимфоцитарный хориоменин-менингита гит

Название вируса Вызываемые заболевания вирус Ласса Лихорадка Ласса вирус Мачупо Боливийская геморрагическая лихорадка вирус Хунин Аргентинская геморрагическая лихорадка СЕМЕЙСТВО Rhabdoviridae вирус бешенства Бешенство СЕМЕЙСТВО Paramyxoviridae РОД Rubulavirus вирус паротита Асептический менингит, энце­фалит (см. также главу 21) РОД Morbillivirus вирус кори Коревой энцефалит, аутоим­мунный постинфекционный энцефаломиелит, подострый склерозирующий панэнцефалит (см. также главу 21) СЕМЕЙСТВО Togaviridae РОД Rubivirus вирус краснухи Краснушный энцефалит (см. также главу 21) СЕМЕЙСТВО Retroviridae ПОДСЕМЕЙСТВО Lentivirius вирусы иммунодефицита ВИЧ-ассоциированная энцефа-человека (HIV-1, HIV-2) лопатия (см. также главу 22) ПОДСЕМЕЙСТВО Deltaretrovirus Т-лимфотропный вирус чело- Тропический спастический па-века 1 (HTLV-Y) ралич, миелопатия (см. также главу 22) СЕМЕЙСТВО Herpesviridae ПОДСЕМЕЙСТВО Alphaherpesvirinae вирус простого герпеса 1-го и Асептический менингит, герпе-2-го типа (HSV-i, HSV-2) тический энцефалит, ретинит, неврит лицевого нерва и др. (см. также главу 21) вирус ветряной оспы/опоясы- Радикулопатия, невриты. Асеп-вающего лишая ( VZV) тический менингит, энцефалит, параличи и другие заболевания у новорожденных (см. также главу 21) ПОДСЕМЕЙСТВО Betaherpesvirinae цитомегаловирус человека Ретинит, энцефалит — при им-(HCMV) мунодефиците (см. также гла-ву21) ПОДСЕМЕЙСТВО Gammaherpesvirinae вирус Эпштейна— Барр (ЕВУ) Энцефалит (см. также главу 21)  

Название вируса Вызываемые заболевания СЕМЕЙСТВО Papovaviridae РОД Polyomavirus вирус JC Прогрессирующая мультифо-кальная лейкоэнцефалопатия (см. также главу 22) ПРИОНЫ (белковые инфекцион- Спонгилоформная энцефало-ные частицы) патия (болезнь Куру, болезнь Крейтцфельдта— Якоба)

Учесть результаты РСК с парными сыворотками боль­
ного энцефалитом и обосновать диагноз заболевания.

Учесть результаты РСК с парными сыворотками боль­
ного для серодиагностики полиомиелита.

Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профилак­
тическими препаратами, указать механизм действия.

а Методические указания

• Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных энтеровирусами (полиовирусы, вирусы Коксаки и ECHO)

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: смывы из зева (пер­вые дни болезни), фекалии; спинномозговая жидкость (при менингите).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Вирусологическое исследование. Является ведущим методом диагностики энтеровирусных инфекций. Выделение энтерови-русов (за исключением вирусов Коксаки типа А) из исследуе­мого материала осуществляют путем заражения клеточных культур. Для уничтожения сопутствующей бактериальной мик­рофлоры нестерильный материал (испражнения, глоточные смывы) предварительно обрабатывают антибиотиками (смесь пенициллина со стрептомицином, содержащая по 1000 ЕД/мл каждого антибиотика в растворе Хенкса) в течение суток при 4 "С, после чего проводят контрольный посев на стерильность. При сохранении бактериальной флоры материал повторно об­рабатывают теми же антибиотиками. Затем одновременно за­ражают по 2—3 пробирки с первичной (эмбриональные фиб-робласты человека или клетки почек обезьян) и перевиваемой культурой клеток (HeLa, амниона человека или др.), поскольку одни серотипы энтеровирусов лучше репродуцируются в пер­вичных, другие — в перевиваемых клетках.

Индикацию вирусов проводят по ЦПД: на 2—3-й день ин­кубации при 35 °С наблюдается полная или частичная дегене­рация клеток. При этом интенсивность ЦПД зависит от дозы вируса, типа культуры клеток и других причин. В случае от­сутствия ЦПД проводят дополнительно 2—3 пассажа. Основ­ным методом идентификации выделенного вируса является серотипирование в реакции нейтрализации (табл. 19.1.1; 19.1.2; 19.1.3). С этой целью материал из чистой культуры выделен­ного вируса обрабатывают смесью диагностических монова­лентных сывороток к различным серотипам энтеровирусов. При нейтрализации вируса в последующих пересевах ЦПД исчезает. Затем проводят реакцию нейтрализации с монова­лентными сыворотками. При этом в начале определяют тип вируса (полиовирус, Коксаки или ECHO), а затем его принад­лежность к определенному серотипу.

Сыворотка Наличие ЦПД Тип выде- к вирусам 1 ленного полиомие- исследуемый материал конт- вируса лита . . . . роль полио- 2-й 3-й 4-й 5-й 6-й 7-й сыво- миелита день день день день день день ротки j j II — — + +++ ++++ ++++ — III — — ++ +++ ++++ ++++ — Контроль — + ++ +++ ++++ ++++ вируса
Сыворот- Наличие ЦПД Тип ка к виру- 1 выделенно- сам Кок- исследуемый материал конт- го вируса саки 1 1 1 1 1 роль Коксаки 2-й 3-й 4-й 5-й 6-й 7-й сыво- день день день день день день ротки В-1 — + + +++ ++++ ++++ — В-2 — ++ +++ +++ ++++ ++++ — В-3 — — — — — — — Коксаки В-3 В-4 — + ++ +++ ++++ ++++ — В-5 — ++ ++ +++ ++++ ++++ — В-6 — + ++ +++ ++++ ++++ — Контроль — ++ +++ +++ ++++ ++++ — вируса

Необходимо помнить, что положительный результат виру­сологического исследования имеет абсолютную диагностичес­кую ценность только в случае выделения вируса из стерильного материала (спинномозговая жидкость, кровь, биоптаты орга­нов), поскольку бессимптомное носительство широко распро­странено (до 50 % здорового населения). При обнаружении вируса в испражнениях или глоточных смывах необходимо серологическое подтверждение диагноза.

Биопроба. Для выделения вирусов Коксаки А, которые пло­хо репродуцируются в культурах клеток, применяют биопробу — исследуемым материалом заражают новорожденных белых мы­шей. В положительном случае у зараженных животных на 3—5-й день развиваются вялые параличи. Идентификацию этих вирусов проводят в РН на новорожденных мышах с мо­новалентными диагностическими сыворотками против различ­ных серотипов вирусов Коксаки А.

Экспресс-методы диагностики. Молекулярно-биологи-ческие исследования. РНК вирусов в исследуемом мате­риале обнаруживают методом гибридизации НК (ДНК-зондов).

Серодиагностика. С диагностической целью в крови больных определяют наличие специфических противовирусных имму­ноглобулинов класса М (IgM) с помощью ИФА. Для ретроспек­тивного подтверждения диагноза применяют также метод парных сывороток. С этой целью кровь у больного берут дважды: в первые дни болезни и через 3—4 нед. Раннюю сыворотку сохра­няют в холодильнике и реакцию ставят одновременно с обеими сыворотками. Антитела определяют в реакции нейтрализации в культуре клеток с эталонными штаммами энтеровирусов, при­надлежащих к тем серотипам, которые чаще всего выделяют от больных (табл. 19.1.4). Для серодиагностики заболеваний, вы­званных гемагтлютинирующими вирусами Коксаки, используют РТГА. Диагностическое значение имеет нарастание титра антител в поздней сыворотке не менее чем в 4 раза. При обнаружении антител, соответствующих серотипу выделенного вируса, диагноз считается подтвержденным.

• Микробиологическая диагностика весенне-летнего клещево­го энцефалита

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Серодиагностика. Обнаружение противовирусных антител в крови больного является основным методом диагностики кле­щевого энцефалита, поскольку к моменту появления симптомов заболевания период вирусемии заканчивается. Выделение вируса из спинномозговой жидкости редко бывает успешным. Для се­родиагностики применяют метод парных сывороток. Используют РН, РСК, РТГА, реакцию латекс-агглютинации, ИФА и другие

возбудители вирусных инфекций нервной системы и прионы - student2.ru

реакции со стандартными вирусными антигенами. Диагности­ческое значение имеет нарастание титра специфических анти­тел не менее чем в 4 раза. Оценку результатов производят с учетом анамнестических данных: вакцинация, пассивная им­мунизация (введение противоэнцефалитной сыворотки или иммуноглобулина).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические ис­следования. С целью экспресс-диагностики клещевого энце­фалита применяют методы определения зараженности клеща, извлеченного из места укуса. Основным методом является ИФ. Готовят мазки-отпечатки и обрабатывают флюоресцирующими антителами к антигенам вируса клещевого энцефалита. В по­ложительном случае наблюдается специфическое свечение скоплений вирусных антигенов внутри клеток, присутствую­щих в материале. Наличие антигенов вируса в организме клеща можно определить и с помощью других иммунологических методов (РИГА со взвесью исследуемого материала и эритро­цитами, нагруженными антителами к вирусу клещевого энце­фалита, ИФА и др.). Предварительный ответ получают спустя 2-3 ч.

• Микробиологическая диагностика энцефалитов, вызывае­мых другими арбовирусами и аренавирусами

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Лабораторная диагностика энцефалитов, вызываемых арбо­вирусами и аренавирусами, осуществляется аналогично диа­гностике весенне-летнего клещевого энцефалита. Необходимо помнить, что наличие сходных групповых антигенов у арбови-русов во многих случаях не позволяет установить, какой имен­но возбудитель из группы родственных вирусов явился причи­ной заболевания.

• Микробиологическая диагностика бешенства

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: слюна животного, явившегося источником заражения; соскобы с роговицы глаза, биоптаты кожи (затылочной области), кровь, спинномозговая жидкость (при необходимости подтверждения клинического диагноза); биоптаты мозга (для постмортальной диагностики).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Гистологическое исследование. При постмортальной диаг­ностике бешенства проводят морфологическое исследование сре­зов головного мозга (области гиппокампа и мозжечка), окрашен­ных метиленовым синим и эозином. В 70—90 % случаев в зара­женных нейронах удается обнаружить признаки характерного ЦПД вируса бешенства — присутствие внутрицитоплазматичес-ких включений — телец Бабеша—Негри (рис. 19.1.1; на вклейке). Тельца окрашиваются в фиолетово-красный цвет, имеют ок­руглую или овальную, реже неправильную форму, диаметр 4—10 мкм.

Вирусологическое исследование и биопроба. Слюну подозри­тельного животного вводят интрацеребрально новорожденным белым мышам. Реже для выделения вируса из слюны применяют клеточные культуры (линии VERO, диплоидные клетки человека и др.). Присутствие вируса в биоптатах мозга зараженных мышат или клетках культуры определяют по наличию его антигенов с помощью метода ИФ. Для этого срезы мозга или клетки зара­женной культуры обрабатывают флюоресцирующими противо­вирусными антителами. В положительном случае при люми­несцентной микроскопии препаратов наблюдается специфи­ческое свечение в цитоплазме зараженных клеток.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Присутствие антигенов виру­са в соскобах с роговицы глаза, биоптатах кожи или биоптатах мозга (при постмортальной диагностике) выявляют методом ИФ (см. выше). Необходимо помнить, что тесты становятся положительными только на поздних стадиях заболевания и применяются исключительно с целью подтверждения клини­ческого диагноза.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные НК в исследуемом материале обнаруживают с помо­щью ПЦР или метода зондов.

Серодиагностика. Наличие противовирусных антител в кро­ви и спинномозговой жидкости пациента определяют методом непрямой ИФ и в РН (в культуре клеток или на белых мышах). Серодиагностика, как и другие существующие методы лабора­торной диагностики бешенства, не позволяет своевременно установить диагноз, поскольку антитела в организме больного появляются только на поздних стадиях заболевания.

• Микробиологическая диагностика поражений ЦНС при ви­русном паротите

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: спинномозговая жидкость (собирают в стерильный контейнер и сохраняют при +4 "С не более 48 ч). При необходимости более длительного хранения материал замораживают и хранят при —70 "С.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Вирусологическое исследование. Выделение чистой культуры вируса из спинномозговой жидкости является ведущим мето­дом диагностики поражений ЦНС при вирусном паротите (см. главу 21).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммунохи­мические исследования. Методы обнаружения антигенов возбудителя в исследуемом материале — см. главу 21.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

• Микробиологическая диагностика поражений ЦНС, вызван­ных вирусом кори

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: спинномозговая жид­кость, биоптат тканей ЦНС.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Спинномозговую жидкость центрифугируют, из осадка, содержащего слущенные клетки, готовят мазки. Мазки или препараты тканей головного мозга окрашивают по методу Романовского—Гимзы. В положитель­ном случае удается обнаружить признаки ЦПД — гигантские многоядерные клетки, часто содержащие внутрицитоплазмати-ческие включения. В поздних стадиях заболевания, а также при хронических формах инфекции (в частности, под остром скле-розирующем панэнцефалите — ПСПЭ) типично появление внутриядерных включений. Метод обладает низкой чувстви­тельностью и специфичностью.

Вирусологическое исследование. Вирус кори с трудом удается культивировать in vitro, поэтому выделение чистой культуры возбудителя из исследуемого материала редко применяют с диагностической целью (см. главу 21). Другой причиной явля­ется низкое содержание вируса в спинномозговой жидкости. Необходимо помнить, что при ПСПЭ в организме персисти-рует дефектный вирус, который не удается культивировать с помощью стандартных методов. В этом случае применяют ме­тод совместного культивирования клеток ткани мозга или пе­риферической крови пациента с культурой клеток, чувстви­тельных к вирусу. Исследование занимает не менее 1 мес. Присутствие вируса определяют по ЦПД и путем выявления его антигенов методом ИФ.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку­лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках био-птата мозга и слущенных клетках спинномозговой жидкости выявляют методом ИФ (см. главу 21). Необходимо иметь в виду, что отрицательный результат исследования не исключает заболевания, что объясняется малым содержанием вируса в клетках спинномозговой жидкости и сравнительно низкой чув­ствительностью метода. Присутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом материале может быть выявлено с помо­щью чувствительных серологических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные НК в исследуемом материале обнаруживают с помо­щью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Обнаружение специфических противови­русных антител в спинномозговой жидкости является ведущим методом диагностики поражений ЦНС, вызываемых вирусом кори. Повышенное содержание противокоревых антител в спинномозговой жидкости является характерным для всех форм патологии ЦНС, обусловленных этим вирусом. Наличие противокоревых антител в спинномозговой жидкости опреде­ляют с помощью различных серологических реакций (см. главу 21). Методы ИФА и непрямой ИФ являются наиболее чувст­вительными и дают положительный результат в большинстве случаев.

• Микробиологическая диагностика поражений ЦНС, вызван­ных вирусом краснухи

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: спинномозговая жидкость.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Серодиагностика. Обнаружение специфических противови­русных антител в спинномозговой жидкости является ведущим методом диагностики поражений ЦНС, вызываемых вирусом краснухи (см. главу 21).

• Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных HTLV-1

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Серодиагностика. Обнаружение противовирусных антител в крови пациента с помощью ИФА применяют в качестве ос­новного метода лабораторной диагностики тропического спас­тического паралича. В случае положительного результата с целью верификации осуществляют поиск антител к индивиду­альным вирусным белкам методом иммуноблоттинга.

• Микробиологическая диагностика инфекций ЦНС, вызван­ных герпесвирусами (вирусы простого герпеса 1 и 2-го типа (HSV-\, HSV-2), вирус ветряной оспы/опоясывающего
лишая (VZV), цитомегаловирус человека (CMV), вирус Эпштейна-Барр (EBV).

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: спинномозговая жидкость.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ: см. главу 21.

Необходимо помнить, что при герпетическом энцефалите выделение вируса из спинномозговой жидкости не всегда бы­вает успешным. В этом случае диагноз ставят на основании обнаружения вирусных антигенов, нуклеиновых кислот и фер­ментов, а также высоких титров противовирусных антител в спинномозговой жидкости.

• Микробиологическая диагностика инфекций ЦНС, вызванных JCV

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптат из поражен­ного участка головного мозга.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Основано на обнаружении из­мененных клеток с признаками ЦПД (увеличение клеток, на­личие одиночных базофильных внутриядерных включений) в биоптатах головного мозга.

Вирусоскопическое исследование. Метод электронной мик­роскопии позволяет обнаружить зрелые вирусные частицы в клетках пораженных участков головного мозга.

Экспресс-методы диагностики: иммунохнмические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические ис­следования. Обнаружение вирусных антигенов в клетках пора­женных участков головного мозга осуществляют методом ИФ.

Молекулярно-биологические исследования. Обнару­жение вирусных ДНК в зараженных клетках осуществляют методом ДНК-зондов (ДНК-гибридизация in situ), ПЦР.

Серодиагностика — обнаружение антител к вирусным бел­кам — не информативна, поскольку антитела присутствуют также у здоровых вирусоносителей.

• Микробиологическая диагностика инфекций ЦНС, вызванных прионами

Общепринятые методы лабораторной диагностики отсутст­вуют. Диагноз устанавливают преимущественно на основании клинической картины заболевания и подтверждают гистологи­ческим исследованием тканей пораженных участков головного мозга. Наблюдается дегенерация нейронов и аксонов серого вещества головного мозга, накопление амилоидоподобного ве­щества, образующего бляшки и фибриллярные скопления внутри и вне нейронов, гипертрофия глиальных клеток и дру­гие изменения, характерные для спонгилоформной энцефало­патии. В последние годы разработаны методы иммунохимичес-кого обнаружения аномальной формы приона (РгР^с) в клетках головного мозга методом ИФ. Метод также позволяет проде­монстрировать накопление PrPSc в клетках роговицы глаза на ранних стадиях болезни.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Диагностические поливалентная и типоспецифические полио-миелитные сыворотки. Применяют для идентификации и типи-рования вирусов полиомиелита.

Диагностические поливалентные и типоспецифические (моно-валентные) сыворотки к вирусам Коксаки и ECHO. Применяют для идентификации и типирования соответствующих вирусов.

Пероральная живая вакцина против полиомиелита (трехва­лентная). Содержит ослабленные штаммы вирусов полиомие­лита I—III типов. Вакцина выпускается в жидком виде и в форме драже. Применяют для профилактики полиомиелита (создание активного иммунитета).

Парентеральная инактивированная вакцина против полиомие­лита (трехвалентная). Содержит инактивированные вирусы по­лиомиелита I—III типов. Применяют для профилактики полио­миелита (создание активного иммунитета).

Диагностикум из вируса клещевого энцефалита. Используют для серодиагностики клещевого энцефалита.

Инактивированная культуральная вакцина против клещевого энцефалита. Стерильный специфический антиген вируса кле­щевого энцефалита, инактивированного формалином. Приме­няют для профилактики клещевого энцефалита по эпидеми­ческим показаниям (создание активного иммунитета).

Иммуноглобулин против клещевого энцефалита. Содержит противовирусные специфические антитела, получаемые из сы­воротки крови лошадей, гипериммунизированных вирусом клещевого энцефалита. Применяют для лечения и экстренной профилактики клещевого энцефалита (пассивный иммунитет).

Живая антирабическая вакцина Ферми. Изготавливают из мозга молодых овец, зараженных фиксированным (аттенуиро-ванный штамм) вирусом бешенства. Вирус в суспензии мозга обрабатывают 1 % раствором фенола и лиофилизируют. При­меняется для создания активного иммунитета с целью профи­лактики бешенства. Вакцину вводят лицам, укушенным подо­зрительными на бешенство животными. Поствакцинальный им­мунитет развивается через 2 нед и сохраняется в течение 6 мес.

Культуральная убитая антирабическая вакцина. Получают пу­тем химической инактивации вируса бешенства, выращенного в культуре клеток. Применяют для профилактики бешенства (создание активного иммунитета).

Антирабический иммуноглобулин. Получают путем гиперим­мунизации лошадей фиксированным вирусом бешенства. При­меняют для создания пассивного иммунитета с целью профилак­тики бешенства. Препарат вводят не позднее 72 ч после укуса животного в сочетании с антирабической вакциной. Препарат обезвреживает вирус бешенства и предупреждает развитие пост­вакцинальных энцефалитов.

Название вируса Вызываемые заболевания РНК-вирусы СЕМЕЙСТВО Reoviridae РОД Rotavirus ротавирусы человека Вспышки и спорадические случаи энтерита и гастроэнте­рита у детей и взрослых РОД Orthoreovirus реовирусы человека Спорадические случаи энтерита СЕМЕЙСТВО Caliciviridae кишечные калицивирусы че- Вспышки энтерита у детей ловека, вирус Норфолк младшего возраста и споради­ческие случаи энтерита у де­тей и взрослых СЕМЕЙСТВО Picornaviridae РОД Enterovirus вирусы ECHO To же СЕМЕЙСТВО Astroviridae кишечные астровирусы чело- Вспышки и спорадические века случаи энтерита у детей СЕМЕЙСТВО Coronaviridae коронавирусы человека Спорадические случаи энтери­та и гастроэнтерита у детей ДНК-вирусы СЕМЕЙСТВО Adenoviridae аденовирусы серотипов 40, Вспышки и спорадические 41, 42 случаи энтерита и гастроэнте­рита у детей и взрослых  
  Название вируса Вызываемые заболевания РНК-вирусы СЕМЕЙСТВО Picornaviridae РОД Hepatavirus вирус гепатита А (НА V) Вирусный гепатит А (болезнь Боткина, инфекционный гепа­тит) СЕМЕЙСТВО Flaviviridae РОД Hepacivirus вирус гепатита С (HCV) Вирусный гепатит С (постгранс-фузионный гепатит "ни А ни В") вирус гепатита G (HGV) Вирусный гепатит G (гепатит "ни А ни Е") РОД Flavivirus вирус желтой лихорадки Лихорадка с поражением печени вирус гепатита Е (HAV) (ка- Вирусный гепатит Е (кишеч-лициподобный вирус) ный гепатит "ни А ни В") Дельта-вирус (вироидоподобный Вирусный гепатит D (гепатит вирус) дельта) ДНК-вирусы СЕМЕЙСТВО Hepadnaviridae вирус гепатита В (HBV) Вирусный гепатит В (сыворо­точный гепатит) СЕМЕЙСТВО Herpesviridae цитомегаловирус человека Поражения печени при гене-(HCMV), вирусы простого рализованной форме инфек-герпеса (HSV-\, HSV-2) ции (см. главу 21)

жительный инкубационный период, а также способность к персистенции, что является причиной развития хронической инфекции. Обязательной мерой профилактики заражения ви­русным гепатитом при переливании крови является контроль доноров крови на носительство вирусов гепатита. Заболевания, протекающие с поражением печени — гепатитом — в качестве одного из проявлений генерализованной инфекции, способны вызывать также другие вирусы. Наиболее часто гепатит возни­кает при инфекциях, вызванных вирусом желтой лихорадки, герпесвирусами (CMV, HSV-l, HSV-2, EBV). Гепатит также может развиваться при тяжелых формах кори, паротита, крас­нухи, вирусных системных лихорадок. Лабораторная диагнос­тика этих инфекций описана в соответствующих главах.

Тема 20.1. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА КИШЕЧНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ И ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ

А План

а Программа

Биологические свойства возбудителей кишечных ви­русных инфекций и вирусных гепатитов, их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемио­логия вызываемых заболеваний.

Микробиологическая диагностика.

Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

а Демонстрация

Реакция преципитации в агаре (встречная диффузия в геле по Оухтерлони) для обнаружения HBs-антигена в сыворотке крови больного вирусным гепатитом В.

Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

а Задание студентам

Указать материал для исследования,

Учесть результаты выявления специфических HBs-антигенов в сыворотке крови больного с помощью РИГА.

Учесть результаты выявления специфических HBs-антигенов в сыворотке крови донора с помощью иммуноферментного метода.

Учесть результаты выявления анти-НВз-антител в сы­воротке крови больного с помощью РИГА. Оценить нарастание титра анти-НВз-антител в динамике забо­левания.

Учесть результаты выявления в сыворотке больного IgM против вируса гепатита А.

6. Дать краткую характеристику демонстрируемым диа­гностическим, профилактическим и лечебным пре­паратам.

а Методические указания

• Микробиологическая диагностика кишечных вирусных ин­фекций

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Вирусоскопическое исследование. Является одним из веду­щих методов диагностики кишечных вирусных инфекций. Зре­лые вирионы в испражнениях можно обнаружить с помощью метода электронной микроскопии.

Вирусологическое исследование. Применяют исключительно с целью диагностики эпидемий и вспышек кишечных вирус­ных инфекций. Для выделения реовирусов и ротавирусов из испражнений используют различные типы клеточных культур (HeLa, первичные культуры клеток почек обезьян и др.). Ин­дикацию осуществляют по ЦПД, которое развивается в течение 3 нед и характеризуется появлением внутрицитоплазматичес-ких включений и неспецифической дегенерацией клеток. Ве­дущим методом идентификации и типирования является ана­лиз фрагментов вирусной РНК методом электрофореза. Выде­ление чистой культуры вирусов ECHO — см. главу 9. Кишеч­ные коронавирусы, калицивирусы, астровирусы и аденовирусы не удается культивировать in vitro.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические ис­следования. Присутствие антигенов вирусов в испражнениях можно определить с помощью метода ИЭМ (антигены цельных вирионов) и чувствительных серологических реакций (латекс-агглютинации, ИФА, РИФ и др.).

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные НК в испражнениях можно обнаружить с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Серодиагностика при кишечных вирусных инфекциях малоинформативна и применяется преимуществен­но с целью ретроспективной диагностики и для оценки эпи­демиологической ситуации. Для определения противовирусных антител в крови пациента применяют различные серологичес­кие реакции (РИГА, ИФА, РИА и др.). Ретроспективную диа­гностику осуществляют методом парных сывороток. Диагнос­тическое значение имеет нарастание титра антител в поздней сыворотке не менее чем в 4 раза. Выявление (методом ИФА) специфических противовирусных иммуноглобулинов класса М (IgM) свидетельствует об активной инфекции.

• Микробиологическая диагностика вирусного гепатита А

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, испражнения.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Вирусоскопическое исследование. Зрелые вирионы в испраж­нениях можно обнаружить с помощью метода электронной микроскопии.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в испражне­ниях можно определить с помощью метода ИЭМ (антигены цельных вирионов) и чувствительных серологических реакций ИФА, РИА и др. В типичных случаях вирус гепатита А удается обнаружить в фекалиях за 10—14 дней до появления клини­ческих признаков заболевания. Вирус продолжает выделяться с испражнениями в течение 2—3 нед после начала желтухи.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные нуклеиновые кислоты в крови пациента на ранних сроках болезни обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зон­дов.

Серодиагностика. Является ведущим методом диагностики вирусного гепатита А. Для определения противовирусных ан­тител в крови пациента применяют различные серологические реакции (РИГА, ИФА, РИА и др.). Серодиагностику осущест­вляют методом парных сывороток (диагностическое значение имеет нарастание титра антител в поздней сыворотке не менее чем в 4 раза) или на основании выявления (методом ИФА) специфических противовирусных иммуноглобулинов класса М (IgM), свидетельствующих об активной инфекции. Последние присутствуют в сыворотке крови с первых дней заболевания и исчезают не ранее чем через 3—4 мес.

Для выявления IgM против вируса гепатита А используют различные варианты ИФА. Противовирусные IgM можно вы­явить следующим способом: на первом этапе на стенках лунок пластиковых планшетов адсорбируют антитела против челове­ческих IgM, на втором этапе в лунки вносят испытуемую сыворотку в различных разведениях. Фиксированные анти-IgM-антитела связывают все IgM сыворотки, в том числе и противовирусные антитела. Далее вносят стандартный антиген вируса гепатита А и меченые антитела против этого антигена. После инкубации и тщательного промывания буферным рас­твором с детергентами в лунки добавляют субстрат и хромоген. В положительном случае через несколько минут наблюдается появление окраски.

• Микробиологическая диагностика вирусного гепатита В

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, биоптат печени.

Период болезни HBs HBc HBe Аг at at at at Инкубационный период + — — + — Продромальный период + — ± (IgM) + — Острый период + — + (IgM) + — Реконвалесценция: ранняя — — + — ± поздняя — + + (IgG) — + Хроническая активная форма + ± + (IgG) + ± Хроническая бессимптомная + — — — ± форма (носительство)

чально на поверхности твердой фазы (полимера) адсорбируют ати-HBs-антитела из стандартной сыворотки. Обычно исполь­зуют лунки микротитрационных панелей. На втором этапе в отмытые лунки вносят исследуемую сыворотку крови больного. При наличии ДДу-антигена он связывается фиксированными на твердой фазе антителами. На третьем этапе добавляют анти-ЯЯ5-антитела, несущие ферментную метку. В качестве метки используют фермент пероксидазу. Для выявления связанных антигеном меченых антител в отмытые лунки добавляют суб­страт — пероксид водорода и хролюген — ортофенилендиамин, который окисляется в присутствии кислорода, вьщеляющегося при разложении пероксида водорода под воздействием фер­мента с образованием продуктов желто-коричневого цвета. Степень окраски отражает интенсивность связывания меченых антител, которая пропорциональна количеству HBs-антигена в исследуемой сыворотке.

Реакции РИГА, ИФА, РИА и другие могут быть использованы и для выявления Д#е-антигена в исследуемой сыворотке.

В биоптатах печени при активной форме инфекции можно выявить наличие НВс-антигена, ассоциированного с гепатоци-тами, методом ИФ.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные ДНК в крови пациента обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. На разных стадиях заболевания и при раз­ных формах инфекции (острой, хронической, вирусоноситель-стве) в крови присутствуют антитела к разным антигенам ви­руса гепатита В (HBs, HBc, НВё), что используют с целью диагностики (см. табл. 20.1.1). Для определения антител при­меняют различные серологические реакции: РИГА, ИФА, РИА и др. (см. выше).

Так, для выявления анти-Я5е-антител в исследуемой сыво­ротке необходим соответствующий эритроцитный диагности-кум — эритроциты, нагруженные стандартным Я#е-антигеном. Реакцию, как правило, ставят с парными сыворотками. В тесте ИФА на поверхности твердой фазы адсорбируют стандартный НВе-антиген, на втором этапе вносят исследуемую сыворотку в десятикратных разведениях, инкубируют, отмывают и добав­ляют меченую антиглобулиновую сыворотку.

Выявление антител к Ш?с-антигену свидетельствует об ак­тивной инфекции и является одним из методов контроля крови доноров. Определение анти-Я#с IgM является ведущим мето­дом дифференциальной диагностики острого и хронического активного вирусного гепатита В.

• Микробиологическая диагностика вирусного гепатита С МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь. 316

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Экспресс-методы диагностики. Молекулярно-биологи-ческие исследования. Вирусную РНК в крови пациента обнаруживают с помощью ПЦР или методом ДНК-зондов.

Серодиагностика. Является ведущим методом диагностики хронического вирусного гепатита С и контроля крови доноров. Противовирусные антитела в крови пациентов определяют с помощью чувствительных серологических реакций (ИФА, РИА и др.) с рекомбинантным вирусным антигеном. Необходимо иметь в виду, что в остром периоде заболевания антитела в крови присутствуют в низком титре и часто в комплексе с антигеном, поэтому их выявление не всегда удается.

• Микробиологическая диагностика вирусного гепатита D

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические ис­следования. Присутствие дельта-антигена в крови можно определить с помощью чувствительных серологических реак­ций ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ную НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Является ведущим методом диагностики вирусного гепатита D и контроля крови доноров. Антитела к дельта-антигену в крови пациентов определяют с помощью чувствительных серологических реакций (ИФА, РИА и др.).

• Микробиологическая диагностика вирусного гепатита G
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.

МЕТО

Наши рекомендации