Тема 15.2. ВОЗБУДИТЕЛИ ГОНОРЕИ, УРОГЕНИТАЛЬНОГО ХЛАМИДИОЗА, МИКОПЛАЗМОЗА И УРЕАПЛАЗМОЗА

План

Программа

Биологические свойства возбудителей гонореи, урогенитального хламидиоза и уреаплазмоза; их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемио­логия вызываемых заболеваний.

Лабораторная диагностика.

Диагностические и лечебные препараты.

Демонстрация

Neisseria gonorrhoeae — в мазках из чистой культуры и уретрального гноя, окраска по методу Грама.

Chlamydia trachomatis — в мазках со слизистой оболоч­ки мочеиспускательного канала (иммунофлюоресцентный метод или окраска по методу Романовского-Гимзы).

"Пестрый" ряд для определения биохимических свойств N. gonorrhoeae.

Колонии Mycoplasma hominis на питательной среде (или фотографии этих колоний).

ИФА для серодиагностики урогенитальных инфекций, вызванных хламидиями и микоплазмами.

Диагностические и лечебные препараты.

а Задание студентам

Указать материал для исследования.

Микроскопировать и зарисовать мазок из уретрально­го гноя, окрашенный по методу Грама, сделать заклю­чение.

Зарисовать демонстрируемый мазок со слизистой обо­лочки мочеиспускательного канала. Сделать заключе­ние.

Оценить результаты ИФА при урогенитальных инфек­циях, вызванных хламидиями и микоплазмами. Сде­лать заключение.

Дать краткую характеристику демонстрируемым диа­гностическим и лечебным препаратам.

а Методические указания

• Микробиологическая диагностика гонореи

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гнойное отделяемое, мазки со слизистых оболочек мочеполовых органов и прямой кишки, суставной и перитонеальный экссудат, отделяемое конъюнктивы глаза при бленнорее.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Материал для исследова­ния должен быть максимально быстро доставлен в лаборато­рию во избежание аутолиза гонококков, которые очень чувст­вительны к изменению температуры и охлаждению. Из мате­риала готовят мазки, окрашивают их по методу Грама, а также метиленовым синим (схема 15.2.1). При положительном ре­зультате в мазках обнаруживают грамотрицательные диплокок­ки бобовидной формы, находящиеся внутри лейкоцитов (рис. 15.2.1; на вклейке). Положительный бактериоскопический диа­гноз ставится в основном при острой форме гонореи до при­менения антибиотиков. При хронической гонорее бактерио-скопическое исследование часто дает отрицательный результат, так как в этих случаях возбудители могут иметь атипичную форму в виде шаров или, наоборот, очень мелких образований. Кроме того, в препарате обнаруживают разнообразную посто­роннюю микрофлору, лейкоциты, эпителиальные и другие кле­точные элементы.

Бактериологическое исследование. Материал засевают на чашки Петри со специальными питательными средами — КДС, сывороточным агаром и др. Среда КДС содержит питательный агар с добавлением казеина, дрожжевого экстракта и сыворот­ки крови. Посевы инкубируют при 37 "С в атмосфере с повы­шенным содержанием СО₂ (не менее 3 %) в течение 24—72 ч. Гонококки образуют круглые прозрачные колонии, напоми­нающие капли росы в отличие от более мутных колоний стреп-

тококков или пигментированных колоний стафилококков, ко­торые также могут расти на этих средах. Подозрительные ко­лонии пересевают в пробирки на соответствующие среды для получения чистых культур, которые идентифицируют по саха-ролитическим свойствам на средах "пестрого" ряда (полужид­кий агар с сывороткой и углеводом) или с помощью микро­тест-систем. Гонококки ферментируют только глюкозу с обра­зованием кислоты.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Антигены возбудителя могут быть обнаружены в исследуемом материале с помощью чувствительных иммунологических методов (иммуноблотинг и ДР-).

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз. ДНК возбуди­теля в материале может быть обнаружена также методом гиб­ридизации со специфическим ДНК-зондом.

• Микробиологическая диагностика урогенитального хлами-диоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: мазки со слизистой оболочки мочеиспускательного канала, выделения из шейки матки, соскобы, отпечатки и др.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Препараты, содержащие клет­ки, окрашивают по методу Романовского—Гимзы. В положи­тельном случае в клетках эпителия обнаруживают цитоплазма-тические включения — микроколонии возбудителя, которые могут содержать как ретикулярные (сетчатые) тельца, так и элементарные тельца. Внеклеточные элементарные тельца таким способом не выявляются. Микроскопия окрашенных препаратов имеет ориентировочное значение.

Бактериологическое исследование. Чистую культуру хлами-дий из исследуемого материала выделяют путем заражения культур клеток McCoy, HeLa и других линий. После инкубации в течение 48 ч определяют включения возбудителя в клетках иммунофлюоресцентным методом. Выделение хламидий в культуре клеток имеет важное диагностическое значение, по­зволяет выявить жизнеспособные хламидий и определить их чувствительность к антимикробным препаратам.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Метод ИФ позволяет обна-ружить антигены хламидий в зараженных клетках. Препараты 'из исследуемого материала обрабатывают мечеными МКАТ. В люминесцентном микроскопе хорошо видны ярко-зеленые скопления элементарных и ретикулярных телец (внутриклеточ­ные микроколонии), контрастно выделяющиеся на краснова­то-коричневом фоне эпителиальных клеток.

Антигены возбудителя в исследуемом материале могут быть выявлены с помощью чувствительных серологических реакций (ИФА и др.).

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Основана на определении антител к хла-мидиям в сыворотке крови методами ИФА, РСК, РИГА. В ка­честве антигенов используют родоспецифические антигены (ЛПС), полученные из хламидий, диагностический титр 1:64. ИФА применяют так же, как дополнительный серологический метод при дифференциальной диагностике урогенитальных ин­фекций, вызванных хламидиями и микоплазмами.

• Микробиологическая диагностика микоплазмоза и уреаплазмоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: выделения и мазки со слизистой оболочки мочеиспускательного канала, сперма, выделения из шейки матки, осадок мочи.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование. Проводят путем посева исследуемого материала на богатые элективные питательные среды сложного состава, содержащие нативные добавки (экстракт из плаценты, триптический перевар бычьего сердца, сыворотку и т.д.). Для посева исследуемого материала исполь­зуют плотные, полужидкие и жидкие среды. В последнем слу­чае в среду добавляют индикатор для контроля роста, посколь­ку накопление микоплазм не сопровождается выраженным по­мутнением. С целью подавления роста других бактерий добав­ляют антибиотики группы пенициллина (пенициллин 100 ЕД/мл и др.), не активные в отношении микоплазм. Посевы инкуби­руют при 37 "С в течение 48 ч. На плотных средах микоплазмы образуют микроколонии в виде яичницы-глазуньи с врастаю­щим в среду центром и полупрозрачной периферией, которые обнаруживают путем микроскопии посевов при малом увели­чении (объектив 8х). Идентификацию выделенной культуры возбудителя проводят по биохимическим (ферментация угле­водов, разложение аргинина) и антигенным свойствам в реакции ингибирования роста культуры специфической сыворот­кой и нейтрализации метаболизма аргинина той же сыворот­кой. M.hominis в отличие от других видов микоплазм не фер­ментирует углеводы и разлагает аргинин. Уреаплазмы вызыва­ют гидролиз мочевины.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Антигены возбудителя могут быть обнаружены непосредственно в материале от больного в реакциях ИФА.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Основана на определении антител к ми-коплазмам и уреаплазмам в сыворотке крови методами ИФА. Используется также как дополнительный серологический ме­тод при дифференциальной диагностике урогенитальных ин­фекций, вызванных хламидиями и микоплазмами.

• Диагностические и лечебные препараты

Гонококковая вакцина. Взвесь N. gonorrhoeae, убитых нагре­ванием. Используют для вакцинотерапии хронической гоно­реи, а также для "провокации" при диагностике этого заболе­вания.

Флюоресцирующие антитела для диагностики урогениталь-ного хламидиоза методом ИФ.

Тест-системы для серодиагностики негонококковых уретри­тов методом ИФА.

Антибиотики: пенициллины, цефалоспорины (цефтриаксон), спектиномицин, тетрациклины, макролиды природные и полу­синтетические, фторхинолоны.

Глава 16