Тема 10.4. МЕТОДЫ ОЦЕНКИ КЛЕТОЧНОГО И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА. ВАКЦИНЫ. ИММУННЫЕ СЫВОРОТКИ И ИММУНОГЛОБУЛИНЫ

Иммунный ответ на инфекцию или иммунизацию вакцин­ными препаратами позволяет оценить функциональную актив­ность иммунной системы в целом. Выявление в организме продуктов иммунного ответа свидетельствует о том, что чело­век был инфицирован соответствующим возбудителем, что имеет большое эпидемиологическое значение. Нередко выяв­ление той или иной формы специфического иммунного ответа на конкретный антиген позволяет уточнить диагностику забо­левания.

Оценка гуморального иммунного ответа базируется на вы­явлении специфических антител в сыворотке крови и других биологических жидкостях. Как правило, речь идет об опреде­лении количества антител (титра). Наиболее информативным считается определение количества антител в динамике инфек­ционного заболевания, так как именно нарастание титра анти­тел свидетельствует о текущей инфекции. Нарастание титра антител можно использовать и для оценки эффективности проведенной вакцинации. Диагностическую значимость имеет определение принадлежности специфических антител к тому или иному изотипу иммуноглобулинов: для первичной инфек­ции наиболее характерно накопление антител изотипа IgM, a рецидив инфекции сопровождается преобладанием антител изотипа IgG.

Клеточно-опосредованный иммунный ответ оценивается чаще всего с помощью кожных проб. При внутрикожном вве­дении небольшой дозы экстракта из микроорганизма, содер­жащего его антигены, в положительном случае наблюдается покраснение, припухание и уплотнение (инфильтрат) на месте введения через 24—48 ч. Положительная реакция свидетельст­вует об инфицировании человека соответствующим микроор­ганизмом, которое привело к формированию в организме кло­на Т-лимфоцитов, способных распознать его антигены и акти­вироваться. Положительная кожная проба может быть резуль­татом эффективной вакцинации против соответствующей ин­фекции.

План

Программа

Возможности методов серодиагностики при оценке гуморального иммунного ответа.

Методы выявления иммунных комплексов.

Кожно-аллергические пробы для оценки клеточного

иммунитета и реакции гиперчувствительности замед­ленного типа.

Методы выявления специфической сенсибилизации Т-лимфоцитов.

Получение и применение вакцин, анатоксинов.

Получение и применение иммунных сывороток и им­муноглобулинов.

Демонстрация

Результаты теста торможения миграции лейкоцитов крови в присутствии причинного антигена.

Набор ампулированных препаратов инфекционных аллергенов, вакцин, сывороток, иммуноглобулинов, диагностикумов.

Задание студентам

Протоколировать и оценить результаты развернутых ре­акций агглютинации, поставленных с парными сыво­ротками крови человека, иммунизированного бактериальной вакциной. Оценить эффективность вакцинации.

Протоколировать и оценить результаты РСК, постав­ленных с парными сыворотками крови человека, им­мунизированного вирусной вакциной. Оценить эф­фективность вакцинации.

Протоколировать и оценить результаты РСК, постав­ленной с сывороткой крови больного с бактериальной инфекцией для дифференциации первичной инфек­ции и рецидива.

Методические указания

1. Реакция торможения миграции лейкоцитов. В основе дан­ного метода лежит способность лимфоцитов после повтор­ного контакта с антигеном, к которому они были ранее
сенсибилизированы, продуцировать различные лимфокины, в том числе влияющие на миграцию индикаторных клеток (гранулоциты, моноциты, макрофаги). Реакция торможе­ния миграции лейкоцитов (РТМЛ) периферической крови в присутствии причинного антигена позволяет выявить специфическую сенсибилизацию Т-лимфоцитов. РТМЛ ставят в ка­пиллярах или под слоем агарозы. Проводят инкубацию лейко­цитов крови в присутствии и в отсутствие причинного мик­робного антигена, после чего измеряют зоны миграции (в про­центах) в присутствии антигена по сравнению с контролем, принятым за 100 %.

В случае выявления сенсибилизации к антигену на­блюдается торможение миграции лейкоцитов (индекс ниже 100 %).

2. Постановка и оценка кожно-аллергической пробы. Для вы­явления специфической сенсибилизации (при туберкулезе, бруцеллезе и других инфекционных заболеваниях) ставят кожно-аллергические пробы. Например, при постановке про­бы Манту внутрикожно вводят раствор туберкулина опреде­ленной концентрации. Реакцию учитывают через 24—48 ч, оценивая степень выраженности гиперемии и инфильтрат вокруг места введения (рис. 10.4.1; на вклейке). В основе положительной кожной пробы лежит клеточная реакция гиперчувствительности замедленного типа, которая отражает специфическую сенсибилизацию организма к данно­му инфекционному аллергену. Она возникает в результате те­кущего, перенесенного заболевания, вакцинации или инфици­рования организма.

3. Выявление нарастания титра антител в серологических ре­акциях с парными сыворотками больного или вакцинированного. Показателем развития гуморального иммунного ответа являет­ся нарастание титра специфических антител в сыво­ротке крови в течение 3—4 нед после инфицирования или вакцинирования. Это устанавливается в реакции с парными сыворотками, т.е. сыворотками, полученными от одного и того же человека в динамике инфекционного или вакцинального про­цесса (например, на 1-й и 3—4-й неделе). Появление антител в сыворотке человека, у которого ранее этих антител не было, называется сероконверсией. Диагностическое значение прида­ется, как правило, 4-кратному и более увеличению титра анти­тел.

При бактериальных инфекциях или вакцинации бактери­альными вакцинами с парными сыворотками ставят реакции агглютинации, РИГА или РСК (табл. 10.4.1).

Таблица 10.4.1. Результаты развернутой реакции агглютинации с бак­териальным диагностикумом и парными сыворотками человека, вакци­нированного бактериальной вакциной

Сроки взятия крови	Разведения сыворотки	Конт­роль сы­воротки	Конт­роль диа-гности-кума
1:50	1:100	1:200	1:400	1:800

До вакцинации ++

Через 3 нед после +++ вакцинации

При вирусных инфекциях или вакцинации вирусными вак­цинами с парными сыворотками ставят РСК, РТГА и реакцию нейтрализации вирусов (табл. 10.4.2).

Нарастание титра антитоксических антител контролируют с помощью реакции флоккуляции или нейтрализации токсина.

Сроки взятия Разведения сыворотки Конт- Конт- крови 1 1 1 1 роль сы- роль диа- 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 воротки гности- кума В самом начале + + — — — — — эпидемии Через месяц после + + + + — — — начала эпидемии

Исследуе- Разведения сыворотки мая сыво- 1 1 1 1 1 1 1 ротка 1:юо 1:200 1:300 1:400 1:500 1:600 1:700 1:800 1:1000 После об- + + + ______ работки 2МЕ Без обра- + + + + + + + + + ботки 2 ME

воротке в результате обработки 2-меркаптоэтанолом свидетель­ствует в пользу первичной инфекции.

Для определения принадлежности специфических антител к определенному классу (изотипу) иммуноглобулинов исполь­зуют также твердофазный иммуноферментный метод. Специ­фический антиген фиксируется на поверхности лунок планше­тов из полистирола и инкубируется с исследуемой сывороткой. После отмывания от несвязанных иммобилизованным антиге­ном белков сыворотки связанные антитела-иммуноглобулины идентифицируются с помощью антиизотипической антиглобу-линовой сыворотки или соответствующих МКАТ. Их связыва­ние в свою очередь устанавливается с помощью антииммуно-глобулиновой сыворотки с ковалентно прикрепленным фер­ментом.

Часть II