Морфология и физиология грибов

Введение. Грибы представляют собой многочисленную груп­пу микроорганизмов, относящихся к доминиону Eukarya, цар­ству Mycota. Классификация внутри царства основана на мор­фологии, характере и способах размножения, физиологических особенностях и других признаках. Клетка гриба имеет ультра­структуру, типичную для эукариот. Все грибы способны к бесполому размножению, совершенные грибы могут также раз­множаться половым путем. Представители одного вида в по­ловой (телеоморфной) и бесполой (анаморфной) фазах разви­тия могут существенно различаться по морфологии, экологии и в случае патогенных видов способности вызывать заболева­ния. Грибы подразделяются на две основные морфологические группы: плесени (нитевидные грибы) и дрожжи.

Морфология плесневых грибов. Вегетативное тело плесневого гриба — гифа — имеет нитевидную форму. Толщина гиф обыч­но превышает 2 мкм, что позволяет отличить их от актиноми-цетов, толщина клеток которых не превышает 1 мкм. Длина гиф у свободно живущих видов может достигать нескольких метров. У высших грибов гифа разделена мембранными пере­городками — септами, у низших септы отсутствуют. Гифы в процессе развития ветвятся и образуют анастомозы, за счет чего формируется переплетенная структура — мицелий. Разли­чают субстратные гифы (мицелий), погруженные в питатель­ный субстрат, и воздушные, растущие над его поверхностью.

Плесневые грибы размножаются преимущественно путем образования вегетативных (бесполых) спор, которые у предста-Род Мицелий Вегетативные споры вегетатив- репродук- тип расположение ный тивный Мисог Несепти- Несепти- Эндо- В спорангии рованный рованный споры споран-гиеносец Asper- Септиро- Несепти- Экзо- Свободное на В виде gillus ванный рованный споры концах ответ- "лейки" конидие- (кони- влений репро-носец дии) дуктивных гиф Penicil- To же Септиро- То же В виде Пит ванный "кисто-конидие- чек" носец

параты раздавленная" капля из чистых культур гри­бов родов Penicillium, Aspergillus, Mucor.

Питательные среды для культивирования грибов.

Рост и типы филаментации дрожжеподобных грибов рода Candida на картофельном агаре.

Изучение биохимических признаков чистой культуры грибов рода Candida ("пестрый ряд").

Задание студентам

Микроскопировать и зарисовать мазки, предложен­ные для демонстрации.

Ознакомиться с таблицами.

Описать характер роста грибов рода Candida на глюкозокартофельном агаре. Указать тип филаментации (по данным таблицы "Бластоспоры и филаментация дрожжеподобных грибов").

Проанализировать "пестрый ряд" чистой культуры грибов рода Candida, сверяя полученные результаты с данными таблицы "Таксономические признаки дрож­жеподобных грибов рода Candida", и сделать заклю­чение о видовой принадлежности.

а Методические указания

Морфологию грибов изучают в нативных и фиксированных препаратах. Для приготовления нативного препарата "раздав­ленная капля" для изучения морфологии плесневых грибов отделяют препаровальными иглами небольшой участок мице­лия с плодоносящими гифами и прилегающим к нему тонким слоем питательной среды. Материал помещают в каплю воды на предметном стекле, иглой расправляют мицелий, придавли­вают покровным стеклом и микроскопируют при опущенном конденсоре. Препарат просматривают с объективом 8х, а затем — 40х. Предварительно колонии или культуры грибов микроскопируют непосредственно на чашках или в пробирках под малым увеличением.

Методы культивирования грибов аналогичны бактериологи­ческим. Грибы выращивают на специальных сложных пита­тельных средах (среда Сабуро, сусло-агар, картофельные, мор­ковные среды и др.), включающих углеводы в качестве источ­ника энергии и углерода и различные факторы роста. Для приготовления таких сред обычно используют натуральные добавки: дрожжевой экстракт, пивное сусло, овощные экстра­кты и др. Для задержки роста бактерий добавляют антибиотики и/или молочную кислоту.

Среда Сабуро состоит из дрожжевой воды с добавлением 1 % пептона, 2 % агара и 4 % мальтозы (или глюкозы). Питатель­ную среду разливают в пробирки и стерилизуют при 0,5 атм в течение 20 мин. В жидкие среды агар не добавляют.

Этапы выделения чистых культур грибов (из организма больного или объектов внешней среды) те же, что и при выделении бактерий. Исследуемый материал засевают на спе­циальные жидкие обогатительные (для накопления в случае малой концентрации микроорганизмов) или плотные питатель­ные среды для получения изолированных колоний и инкуби­руют в термостате при температуре 37^е и 28—30 'С в течение нескольких дней. Рост грибов наблюдается на 3—5-е сутки. На плотных средах формируются разнообразные колонии: плос­кие, выпуклые, гладкие, морщинистые, мучнистые, слизистые, пушистые и др., часто пигментированные. Так, дрожжеподоб-ные грибы рода Candida на 2—3-й день после посева образуют мелкие выпуклые пигментированные колонии с гладкой блес­тящей поверхностью, которые нередко сливаются и врастают в питательную среду. Делают пересев колоний, выделяют чис­тую культуру и проводят идентификацию с определением ро­довой и видовой принадлежности на основании морфологи­ческих, культуральных, биохимических и других признаков. Методы идентификации грибов аналогичны методам иденти­фикации бактерий. Особое значение для определения видовой принадлежности чистой культуры плесневых грибов имеет изу­чение их морфологии. Для определения культуральных призна­ков колонии грибов микроскопируют непосредственно на чаш­ках или в пробирках под малым увеличением. Биохимические свойства можно определить с помощью "пестрого ряда" или другими методами (см. тему 3.2).

Глава 5