Этапы приготовления мазков-препаратов

Приготовление состоит из нескольких последовательных операций:

1. Подготовка мазка

2. Высушивание

3. Фиксация

4. Окраска

Техника приготовления мазка из бактериальной культуры:

- исследуемый материал наносят на чистое обезжиренное предметное стекло, очертив предварительно с обратной стороны стекла восковым карандашом границы препарата.

- если препарат готовят из бактериальной культуры, выращенной на плотной среде, то на предметное стекло предварительно наносят каплю стерильного физиологического раствора;

- нагревают до покраснения бактериальную петлю в пламени горелки;

- берут пробирку с исследуемой культурой в левую руку так, чтобы видеть поверхность среды; вращательным движением вынимают пробку из пробирки, прижимая ее мизинцем и безымянным пальцами правой руки к ладони;

- обжигают край пробирки, осторожно вводят петлю (петлю остужают о внутреннюю стенку пробирки) и берут исследуемый материал;

- вынимают петлю, обжигают край пробирки и закрывают пробкой;

- микробиологический материал осторожно распределяют по предметному стеклу тонким слоем, после чего бактериальную петлю стерилизуют в пламени спиртовки.

Высушивание и фиксация мазков препаратов.

Изготовленные мазки высушивают при комнатной температуре или в термостате. Тонкие мазки быстро высыхают на воздухе, более толстые можно высушивать над пламенем горелки или спиртовки. Предметное стекло при этом держат пинцетом (или за ребра 1-м и 2-м пальцами правой руки) мазком кверху. Чтобы не допустить денатурации белков бактерий и нарушения их внутренней структуры степень нагревания контролируют, прикасаясь к тыльной стороне ладони – должно ощущаться легкое чувство жжения.

Высушенные препараты необходимо фиксировать к поверхности стекла. Для того, чтобы убить и закрепить бактерий на стекле, предотвратив их смывание в процессе окраски. К тому же убитые микроорганизмы значительно лучше окрашиваются, а также не представляют опасности для работающих.

В лабораторной практике самым распространенным методом фиксации мазков является фламбирование - то есть фиксация в пламени газовой горелки или спиртовки. При этом мазок держат так же, как при высушивании и трижды проводят его через пламя. Весь процесс фиксации длится 5-6 с, а действие температуры - 2 с. Более длительная фиксация уменьшает качества препарата, а недофиксированный мазок при следующей обработке смывается и таит в себе опасность заражения.

При изучении некоторых структур микробных клеток, а также мазков крови, отпечатков органов, которые деформируются при высокой температуре фиксируют химическим способом, при помощи одной из фиксирующих жидкостей: этанолом (на протяжении 10-15 мин), метанолом (5 мин), ацетоном (5 мин), смесью Никифорова (10-15 мин), парами формалина или осмиевой кислоты (несколько секунд). При такой осторожной фиксации значительно лучше сохраняются и просмотриваются все структуры клеток и бактерий.

Окраска препаратов

Существуют простые и сложные методы окраски. При окраске простым методом используется только один краситель, позволяющий отличить клетки от неокрашенного фона, Простой метод окрашивания дает возможность исследовать общую морфологию микробов, их размеры, форму, количество, локализацию, взаимное расположение клеток и т. п.. Но с его помощью невозможно изучать внутреннюю структуру бактерий и их разное отношение к нескольким красителям.

Простым окрашиванием называют такое, при котором применяют лишь один краситель. Чаще всего используют основной разведенный фуксин Пфейффера и щелочную метиленовую синьку Леффлера. Фуксином красят 1-2 мин, а синькой 3-5 мин. Препараты, которые содержат, кроме бактерий, тканевые и клеточные элементы макроорганизма, лучше окрашивать метиленовой синькой, которая красит фон препарата сравнительно слабо, а бактерии значительно интенсивнее. После истечения времени окрашивания препарат промывают дистиллированной водой до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной. Затем мазки высушивают на воздухе или между листами фильтровальной бумаги и микроскопируют с использованием иммерсионного объектива.

При окраске сложным методом используют несколько последовательно наносимых красителей, фиксатор и проявитель (окраска по методу Грама и др.).

«Морфология микроорганизмов»

таблицу 1.1

Название /род м/о	Рисунок	Краткая характеристика
Кокки
Микрококки
Пневмококки
Менингококки
Гонококки
Тетракокки
Стрептококки
Сарцины
Стафилококки
Палочковидные - без спор
Правильной формы (энтеробактерии и др.)
Веретенообразные (фузобактерии)
Булавовидные (коринобактерии)
-споровые
Клостридии
Бациллы
Извитые
Вибрионы
Хеликобактерии
Бифидобактерии
Спириллы
Спирохеты:
Боррелии
Трепонемы
Лептоспиры
Актиномицеты
Полиморфные
Риккетсии
Хламидии
Микоплазмы