На группу принести 3-4 вида кисломолочных продуктов для приготовления из них мазков-препаратов для микроскопии.

По возможности иметь печатный вариант «Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии» А. С. Быков, А. А. Воробьев, В. В. Зверев. М. : МИА, 2008 (электронный вариант доступен в сети интернет!!!)

Оформление протокола (сделать дома) к занятию 1

1. Подготовить протокол лабораторных занятий:

- наклеить титульный лист (см. образец на сайте), пронумеровать страницы;

-на первый лист (1-2 страница протокола) переписать «Правила работы в микробиологической лаборатории» и ВЫУЧИТЬ см. ниже раздел «Дополнительный материал»;

- на 3-4 страницу протокола переписать «Методы микробиологической диагностики».

2. Оформить пункт 1 раздела «Оформление протокола лабораторных занятий» (см. ниже).

ЗАНЯТИЕ 1

Тема: МИКРОБИОЛОГИЯ И ЕЕ ЗНАЧЕНИЕ ДЛЯ МЕДИЦИНЫ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. МОРФОЛОГИЯ МИКРОБОВ

Цель занятия:ознакомиться с правилами работы в микробиологической лаборатории, с методами изучения микроорганизмов; освоить технику иммерсионной микроскопии; технику приготовления простых методов окраски мазков-препаратов

План занятия

1. Медицинская микробиология, её цели и задачи, отношение к другим медицинским наукам.

2. Возникновение и развитие микробиологии. Роль отечественных ученых-микробиологов в развитии мировой науки.

3. Микробиологическая лаборатория. Оборудование, правила работы, организация рабочего места.

4. Методы изучения микроорганизмов (микроскопический, бактериологический, экспериментально-биологический, серологический, кожно-аллергический, молекулярно-генетический).

5. Микроскопический метод исследования. Виды современных микроскопов. Иммерсионная микроскопия.

6. Принципы классификации микробов. Классификация бактерий по Берджи. Современные подходы к систематике микроорганизмов. Таксономические категории: царство, отдел, семейство, род, вид. Популяция, культура, штамм, клон. Определение, применение в теоретической и прикладной микробиологии.

7. Морфология бактерий. Классификация бактерий по морфологии (кокковидные, палочковидные, извитые, ветвящиеся), размер и взаимное расположение бактерий.

8. Тинкториальные свойства бактерий. Этапы приготовления мазков-препаратов.

9. Простые (метиленовой синькой и фуксином) методы окраски

Оформление протокола лабораторных занятий (выполнить дома)

1. Записать номер занятия, тему и цель занятия.

2. Заполнить таблицу 1.1 «Морфология микроорганизмов» .

3. Зарисовать самостоятельно приготовленные и демонстрационные микропрепараты с различной морфологией микробов (после работы на занятии).

Задания для выполнения лабораторной работы

1. Для допуска к выполнению лабораторной работы индивидуально под подпись ответить «Правил работы в микробиологической лаборатории».

2. Ознакомиться с оборудованием микробиологической лаборатории кафедры МВИ.

3. Приготовить мазок из кисломолочного продукта, окрасить метиленовым синим или фуксином Пфейффера, изучить под микроскопом.

Дополнительный материал

СП 1.3.2322-08. Требования к помещениям и оборудованию микробиологические лаборатории, где проводят работы с ПБА III - IV групп (некоторые пункты).

1. Микробиологические лаборатории, где проводят работы с ПБА III - IV групп, должны размещаться в отдельно стоящем здании или в изолированной части здания. На входной двери лаборатории должны быть обозначены название (номер) лаборатории и международный знак "Биологическая опасность". Размещение лабораторий в жилых зданиях не допускается.

2. Производственные лаборатории, проводящие работу с ПБА III группы, должны располагаться в отдельно стоящих зданиях или изолированном блоке здания, имеющем отдельный вход, а производственные лаборатории, работающие с ПБА IV группы, могут располагаться в изолированном блоке производственного корпуса.

3. Лаборатория должна быть обеспечена холодным и горячим водоснабжением, канализацией, электричеством, отоплением и вентиляцией. Все помещения лаборатории должны иметь естественное и искусственное освещение в соответствии с требованиями действующих нормативных документов.

4. Объемно-планировочные решения и размещение оборудования должны обеспечивать поточность движения ПБА III - IV групп, персонала и выполнение требований санитарных правил (СП1.3.2322-08).

5. Помещения лабораторий разделяют на "заразную" зону, где осуществляются манипуляции с ПБА III - IV групп и их хранение, и "чистую" зону, где не проводят работы с микроорганизмами и их хранение.

В "чистой" зоне лабораторий должны располагаться следующие помещения:

- гардероб для верхней одежды;

- помещения для проведения подготовительных работ (препараторская, моечная, приготовление и разлив питательных сред и др.);

- помещение для стерилизации питательных сред и лабораторной посуды (стерилизационная);

- помещение с холодильной камерой или холодильниками для хранения питательных сред и диагностических препаратов;

- помещение для работы с документами и литературой;

- помещение отдыха и приема пищи;

- кабинет заведующего;

- помещение для хранения и одевания рабочей одежды;

- подсобные помещения;

- туалет.

Для работы с ПБА III - IV групп в "заразной" зоне должны размещаться:

- помещение для приема и регистрации материала (проб);

- боксированные помещения с предбоксами или помещения, оснащенные боксами биологической безопасности:

для проведения бактериологических (вирусологичеких) исследований;

для проведения иммунологических исследований;

- помещение для люминесцентной микроскопии;

- помещение для проведения зооэнтомологических работ;

- помещение для гельминтологических исследований;

- помещение для работы с лабораторными животными (заражение, вскрытие);

- помещение для содержания инфицированных лабораторных животных;

- помещения для ПЦР-диагностики;

- термостатная комната;

- помещение для обеззараживания (автоклавная).

6. На границе "чистой" и "заразной" зон должен располагаться санитарный пропускник.

7. При расположении в одном блоке нескольких микробиологических лабораторий общими для них могут быть: блок для работы с инфицированными животными, автоклавные для обеззараживания, моечные, комнаты для приготовления питательных сред и другие вспомогательные помещения.

8. Внутренняя отделка помещений должна быть выполнена в соответствии с их функциональным назначением и гигиеническими нормативами. Поверхность пола, стен, потолка в лабораторных помещениях "заразной" зоны должна быть гладкой, без щелей, устойчивой к многократному действию моющих и дезинфицирующих средств. Полы должны быть не скользкими, иметь гидроизоляцию.

9. Окна и двери помещений "заразной" зоны лаборатории должны быть герметичными. Допускается заполнение оконных проемов стеклоблоками. Окна цокольного и первого этажей независимо от наличия охранной сигнализации должны быть оснащены металлическими решетками, не нарушающими правил пожарной безопасности. Двери должны иметь запирающие устройства.

10. Приборы, оборудование и средства измерений, используемые в работе лаборатории, должны быть аттестованы, технически исправны, иметь технический паспорт и рабочую инструкцию по эксплуатации с учетом требований биологической безопасности. Средства измерения подвергают метрологическому контролю в установленные сроки.

11. Лабораторное оборудование и мебель (столы, стеллажи для содержания животных, стулья и т.д.) должны быть гладкими, без острых краев и шероховатостей и иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих средств. Поверхность столов не должна иметь швов и трещин. В помещениях "заразной" зоны не допускается использование мебели из древесины и с мягким покрытием.

12. Помещения "заразной" зоны должны быть оборудованы бактерицидными облучателями для обеззараживания воздуха и поверхностей в соответствии с нормативами.

13. В лабораторных помещениях должна быть предусмотрена защита рабочих столов от попадания прямого солнечного света. Для этих целей могут быть использованы светозащитная пленка, жалюзи из материала, устойчивого к воздействию дезинфицирующих растворов.

14. Все жидкие отходы, образующиеся в процессе работы в "заразной" зоне, перед сбросом в канализационную систему подлежат обязательному химическому или термическому обеззараживанию.

15. Помещения блока для работы и содержания инфицированных животных, бокси-рованные помещения, микробиологические комнаты, помещения с аэрозольными камерами (установками) должны быть оборудованы автономными системами приточно-вытяжной вентиляции с механическим побуждением. Указанные системы оснащаются фильтрами тонкой очистки на выходе, проверяемыми на защитную эффективность. В отдельных случаях для создания асептических условий в помещениях фильтрами тонкой очистки могут оснащаться и приточные системы вентиляции.

16. Не допускается подводка систем горячего и холодного водоснабжения и канализации в микробиологические боксы.

17. Для обеспечения физической защиты работающего персонала, воздуха и поверхностей рабочей зоны, окружающей среды от исследуемых микроорганизмов должны использоваться боксы биологической безопасности.

18. Для работы с ПБА должны применяться боксы биологической безопасности II класса. Все работы в боксах биологической безопасности проводят на поддонах с салфетками, смоченными дезинфицирующим раствором.

19. Боксы биологической безопасности должны проверяться на защитную эффективность. При проверке должна определяться эффективность работы фильтров очистки воздуха, скорость воздушного потока в рабочем проеме бокса.

Окраска препаратов

Существуют простые и сложные методы окраски. При окраске простым методом используется только один краситель, позволяющий отличить клетки от неокрашенного фона, Простой метод окрашивания дает возможность исследовать общую морфологию микробов, их размеры, форму, количество, локализацию, взаимное расположение клеток и т. п.. Но с его помощью невозможно изучать внутреннюю структуру бактерий и их разное отношение к нескольким красителям.

Простым окрашиванием называют такое, при котором применяют лишь один краситель. Чаще всего используют основной разведенный фуксин Пфейффера и щелочную метиленовую синьку Леффлера. Фуксином красят 1-2 мин, а синькой 3-5 мин. Препараты, которые содержат, кроме бактерий, тканевые и клеточные элементы макроорганизма, лучше окрашивать метиленовой синькой, которая красит фон препарата сравнительно слабо, а бактерии значительно интенсивнее. После истечения времени окрашивания препарат промывают дистиллированной водой до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной. Затем мазки высушивают на воздухе или между листами фильтровальной бумаги и микроскопируют с использованием иммерсионного объектива.

При окраске сложным методом используют несколько последовательно наносимых красителей, фиксатор и проявитель (окраска по методу Грама и др.).

«Морфология микроорганизмов»

таблицу 1.1

Название /род м/о	Рисунок	Краткая характеристика
Кокки
Микрококки
Пневмококки
Менингококки
Гонококки
Тетракокки
Стрептококки
Сарцины
Стафилококки
Палочковидные - без спор
Правильной формы (энтеробактерии и др.)
Веретенообразные (фузобактерии)
Булавовидные (коринобактерии)

-споровые
Клостридии
Бациллы
Извитые
Вибрионы
Хеликобактерии
Бифидобактерии
Спириллы
Спирохеты:
Боррелии
Трепонемы
Лептоспиры
Актиномицеты
Полиморфные
Риккетсии
Хламидии
Микоплазмы