Фенотипирование гемобластозов

Значительный прогресс в гематологических исследованиях связан в последние годы с использованием современных иммунологических методов и автоматизированных средств анализа и сортировки клеток периферической крови и костного мозга — проточных цитоф-люориметров. Традиционные морфологические и цитохимические исследования клеток суб­страта болезни (кровь, костный мозг, лимфатические узлы, селезенка и т.д.) во многих слу­чаях, особенно при лимфопролиферативных заболеваниях, не позволяют выявить все много­образие вариантов среди морфологически сходных форм и установить источник происхож­дения патологического клона. Эти задачи могут быть решены только путем изучения имму­нологической характеристики клеток. Каждой стадии дифференцировки гемопоэтических клеток соответствует свой набор антигенов, которые по международной классификации на­зываются дифференцировочными и разделяются на кластеры дифференцировки, обозначаемые CD. При неопластических изменениях блок дифференцировки может про­изойти на любой стадии нормального развития клеток, в результате чего образуется клон па­тологических клеток, определяющих субстрат болезни и имеющих одинаковую иммунологи­ческую (или фенотипическую) характеристику. Проведя исследования этих маркеров на клетках, можно определить, какой форме и варианту заболевания они соответствуют, т.е. на основе иммунологического фенотипа клеток проводить дифференциальную диагностику, которая наиболее трудна при лимфопролиферативных заболеваниях, потому что основной клеткой патологического субстрата болезни являются морфологически почти однотипные лимфоциты. Фенотипирование позволяет с помощью моноклональных антител типировать бластные и зрелые клетки крови миело-, моно-, лимфоцитарного ряда по наличию диффе-ренцировочных антигенов (рецепторов) в клеточной стенке. Выявление антигена обознача­ется CD+. В разделе «Оценка иммунного статуса организма» частично изложена характерис­тика и диагностическое значение исследования клеточных маркеров; здесь будет дана крат­кая характеристика антигенных маркеров клеток применительно к диагностике гемобласто-зов. На мембранах клеток крови и костного мозга можно выявить следующие антигены (мар­керы).

1. CD2-aHTnreH — мономерный трансмембранный гликопротеид. Он присутствует на
поверхности всех циркулирующих в крови Т-лимфоцитов и на некоторых натуральных кил­
лерах (НК). СО2-антиген принимает участие в процессе альтернативной активации Т-лим­
фоцитов. Выявление СО2-антигена с помощью моноклональных антител в клинической
практике используется для фенотипирования острых Т-клеточных лейкозов, лимфом, хро­
нических воспалительных и иммунодефицитных состояний.

2. СБЗ-антиген представляет собой белковый комплекс, который ассоциирован с анти­
ген специфическим Т-клеточным рецептором и является основным функциональным мар­
кером Т-лимфоцитов. Он способствует передаче сигнала активации с мембраны в цитоплаз­
му клетки. Определение СОЗ-антигена показано для диагностики острых Т-клеточных лей­
козов, лимфом (СОЗ-антиген не экспрессируется при не-Т-клеточных лимфоидных новооб­
разованиях) и иммунодефицитных заболеваний.

3. СО4-антиген является трансмембранным гликопротеидом, экспрессируемым субпо­
пуляцией Т-хелперов (индукторов), составляющих 45 % лимфоцитов периферической крови.
На ранних стадиях развития лимфоцитов в вилочковой железе антиген CD4, так же как CD8,
экспрессируется всеми кортикальными лимфоцитами. Медуллярные тимоциты, фенотип ко­
торых схож со зрелыми СО4+Т-клетками периферической крови (Т-хелперы), экспрессиру-
ют уже либо CD4-, либо СО8-рецепторы. В периферической крови до 5 % клеток несут
одновременно маркеры CD4 и CD8. Незначительная экспрессия CD4 наблюдается на неко­
торых клетках макрофагально-моноцитарного ряда. СО4-антиген экспрессируется в боль­
шинстве случаев Т-клеточных лимфом, включая грибовидный микоз, а также при HTLV-ac-
социированном Т-клеточном лейкозе.

4. СО5-антиген — одноцепочечный гликопротеид, присутствующий на всех зрелых Т-
лимфоцитах и большинстве тимоцитов, слабо экспрессируется В-лимфоцитами. СОЗ-анти­
ген выявляется на неопластических клетках В-клеточного хронического лимфоцитарного
лейкоза и центроцитарной лимфомы. При других типах злокачественных лимфоидных забо­
леваний — фолликулярной лимфоме, волосатоклеточном лейкозе, крупноклеточной лимфо-
ме — СО5-антиген не экспрессируется.

5. СО7-антиген — одноцепочечный белок, являющийся самым ранним маркером Т-кле-
точной дифференцировки. Он экспрессируется про-Т-лимфоцитами еще до миграции их в

вилочковую железу. СО7-антиген выявляется на большинстве НК-клеток, слабая экспрес­сия наблюдается на моноцитах. В-лимфоциты и гранулоциты не содержат этого антигена. Определение СО7-антигена применяют в целях диагностики лимфом, детских Т-клеточных лимфобластных лейкозов.

6. СО8-антиген — белок, состоящий из двух полипептидных цепей, связанных дисуль-
фидными мостиками. Он экспрессируется субпопуляцией цитотоксических и супрессорных
Т-лимфоцитов, которые составляют 20—35 % лимфоцитов периферической крови. Этот
антиген имеют также НК-лимфоциты, кортикальные тимоциты, 30 % медуллярных тимоци-
тов и субпопуляции клеток костного мозга. СБ8-антиген исследуют при количественной
оценке содержания Т-супрессоров (см. выше «Т-лимфоциты-супрессоры в крови»).

7. CDlO-антиген представляет собой мембранассоциированную эндопептидазу. Антиген
CD 10 экспрессируется молодыми формами В-лимфоцитов и субпопуляцией кортикальных
лимфоцитов. CDlO-антиген экспрессируется всеми клетками острого лимфобластного лей­
коза.

8. CDllc-антиген экспрессируется на клеточной мембране макрофагов, моноцитов, гра-
нулоцитов, НК-клеток и клетках волосатоклеточного лейкоза.

9. СВ13-антиген — гликопротеид, экспрессируется клетками миеломоноцитарного ряда
(клетки-предшественники, нейтрофилы, базофилы, эозинофилы, моноциты и клетки миело-
идных лейкозов). Он отсутствует на Т- и В-лимфоцитах, эритроцитах и тромбоцитах.

10. СО14-антиген — поверхностный мембранный гликопротеид. Экспрессируется в ос­
новном моноцитами и макрофагами, а также клетками Лангерганса и детритными клетками.
СО14-антиген определяется более чем у 95 % моноцитов периферической крови и костного
мозга. Сильная экспрессия CDH-антигена наблюдается при острых миелобластных лейко­
зах. При острых и хронических лимфобластных лейкозах экспрессии этого антигена не на­
блюдается.

11. CD15-aHTnreH представляет собой олигосахарид. Он принимает участие в процессах
фагоцитоза и хемотаксиса. Этот антиген присутствует на поверхности зрелых гранулоцитов и
клетках Березовского—Штернберга. Экспрессия СО15-антигена выявляется при болезни
Ходжкина. При неходжскинских лимфомах СО15-антиген в большинстве случаев не обнару­
живается.

12. СО1б-антиген экспрессируется на поверхности гранулоцитов, моноцитов, макрофа­
гов и НК-клеток. Все лимфоциты, экспрессирующие этот антиген, обладают способностью к
антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC). СО1б-антиген определяют при ти-
пировании хронических миелоцитарных лейкозов, для характеристики НК-клеток.

13. СО19-антиген — гликопротеид, присутствующий на всех периферических В-лимфо­
цитах, а также на всех предшественниках В-клеток. Он отсутствует на плазматических клет­
ках. Является самым ранним маркером В-клеток и играет важную роль в регуляции актива-

: ции и пролиферации В-лимфоцитов. СО19-антиген экспрессируется на всех неопластичес-

■' ких клетках острых лейкозов В-клеточного происхождения, а также выявляется при некото-

рых формах острых монобластных лейкозов.

■ 14. СО20-антиген представляет собой негликозилированный белок. В онтогенезе В-

• лимфоцитов СО20-антиген появляется после CD 19 на стадии пре-В-клеточной дифферен-

•: цировки лимфоцитов. На плазматической мембране плазматических клеток он отсутствует.

Экспрессируется при острых лимфобластных лейкозах, В-клеточных хронических лимфоци-тарных лейкозах, волосатоклеточных лейкозах, лимфомах Беркитта и очень редко — при острых монобластных лейкозах.

15. CD21-антиген — гликопротеид; в значительном количестве выявляется на В-лим­
фоцитах в лимфоидных органах и в небольшом количестве — на В-клетках перифери­
ческой крови. Функционально CD21-антиген является рецептором вируса Эпштейна—
Барр.

16. СО22-антиген — белок, состоящий из двух полипептидных цепей. Экспрессируется
на мембране большинства В-лимфоцитов, включая клетки-предшественники (пролимфоци-
ты). Антиген не экспрессируется на В-лимфоцитах (плазматические клетки) после их акти­
вации. Наиболее выраженная экспрессия СО22-антигена выявляется на клетках при волоса-
токлеточном лейкозе, слабая — при миелоидных лейкозах и не-Т-клеточных острых лим­
фобластных лейкозах.

17. СО23-антиген представляет собой гликопротеид, экспрессируется активированны­
ми В-лимфоцитами периферической крови в гораздо большей степени, чем покоящимися
В-клетками. CD23 опосредует IgE-зависимую цитотоксичность и фагоцитоз макрофагами и
эозинофилами.

21 -5812

18. СО25-антиген — одноцепочечный гликопротеид, идентифицированный как низко­
аффинный рецептор к интерлейкину-2. Этот рецептор экспрессируется на активированных
Т-лимфоцитах и с меньшей плотностью на активированных В-клетках. В периферической
крови здоровых людей антиген присутствует более чем на 5 % лимфоидных клеток.

19. СО29-антиген является рецептором фибронектина. Широко распространен в тка­
нях, экспрессируется лейкоцитами. Определение СО29-антигена на клетках периферической
крови используют для типирования субпопуляции Т-клеток, имеющих фенотип
CD4+CD29+, которые называют хелперами-2 (Th-2). Эти клетки посредством продукции
лимфокинов участвуют в реализации гуморального иммунного ответа.

20. СОЗЗ-антиген — трансмембранный гликопротеид. Присутствует на поверхности
клеток миелоидного и моноцитарного рядов. Он обнаруживается на поверхности моноцитов
и в меньшей степени гранулоцитов периферической крови. Около 30 % клеток костного
мозга экспрессируют СОЗЗ-антиген, включая миелобласты, промиелоциты и миелоциты.
Антиген отсутствует на мембранах полипотентных стволовых клеток. Определение CD33-
антигена используют для характеристики клеток при лейкозах миелоидного происхождения.
Клетки лейкозов лимфоидного и эритроидного происхождения не экспрессируют CD33 (-).

21. СО34-антиген является фосфогликопротеидом, экспрессируется гемопоэтическими
клетками-предшественниками, включая монопотентные стволовые клетки. Наиболее выра­
женная экспрессия антигена наблюдается у ранних предшественников; при созревании кле­
ток экспрессия маркера падает. СО34-антиген обнаружен также на эндотелиальных клетках.
Определение СО34-антигена используют для характеристики клеток при острых миело- и
лимфобластных лейкозах. При хронических лимфоцитарных лейкозах и лимфомах экспрес­
сия антигена CD34 не выявляется.

22. СО41а-антиген экспрессируется тромбоцитами и мегакариоцитами. Моноклональ-
ные антитела для выявления СО41а-антигена используют при диагностике мегакариобласт-
ного лейкоза. При тромбастении Гланцманна экспрессия этого антигена отсутствует или
значительно подавлена.

23. СО42в-антиген — мембранный гликопротеид, состоящий из двух полипептидных
цепей. Маркер выявляется на поверхности тромбоцитов и мегакариоцитов. В клинической
практике обнаружение СО42в-антигена используется для диагностики тромбоцитопатии —
синдрома Бернара—Сулье.

24. CD45RA-aHTHreH принадлежит к классу трансмембранных гликопротеидов. Является
общим лейкоцитарным антигеном. Экспрессируется на клеточной мембране В-лимфоцитов,
в меньшей степени Т-лимфоцитов и на зрелых медуллярных тимоцитах. Маркер не экспрес­
сируется гранулоцитами.

25. CD45RO-aHTnreH — низкомолекулярная изоформа СО45ЯА-антигена — общего
лейкоцитарного антигена. Он выявляется на Т-клетках (Т-лимфоциты памяти), субпопуля­
ции В-лимфоцитов, моноцитах и макрофагах. Моноклональные антитела к CD45RO-aHTnre-
ну взаимодействуют с большинством тимоцитов, субпопуляцией покоящихся CD4+ и CD8+
Т-лимфоцитов и зрелыми активированными Т-клетками. Клетки миеломоноцитарного про­
исхождения, гранулоциты и моноциты также несут этот антиген. Слабое цитоплазматичес-
кое окрашивание наблюдается в случаях центробластных и иммунобластных лимфом.

26. СО4б-антиген представляет собой О-гликозилированный димер. Он широко распро­
странен в тканях и экспрессируется Т- и В-лимфоцитами, моноцитами, гранулоцитами, НК-
клетками, тромбоцитами, эндотелиальными клетками, фибробластами, но отсутствует на по­
верхности эритроцитов. СО46-антиген обеспечивает защиту тканей и трофобластов от дейст­
вия комплемента.

27. CD61-антиген — тромбоцитарный антиген. Экспрессируется на тромбоцитах пери­
ферической крови и костного мозга, а также на мегакариоцитах и мегакариобластах. Его оп­
ределение используют в качестве маркера при острых мегакариобластных лейкозах. Экспрес­
сия антигена отсутствует или подавлена у больных с тромбастенией Гланцманна.

28. HLA-DR-антиген представляет собой мономорфную детерминанту молекул II класса
главного комплекса гистосовместимости человека (HLA). Маркер экспрессируется на клет­
ках Лангерганса, дендритных клетках лимфоидных органов, определенных типах макрофа­
гов, В-лимфоцитах, активированных Т-клетках и эпителиальных клетках вилочковой желе­
зы. В клинике определение маркера применяют для количественной оценки активирован­
ных Т-лимфоцитов, имеющих фенотип CD3+ HLA-DR+.

Используя различный подбор моноклональных антител к маркерам, можно составить фенотипический портрет клеток, характерактерных для данной формы лейкоза (табл. 7.38).

Таблица 7.38. Иммунофенотипичекская характеристика лейкозов [Myers A.R., 1996)

№ п/п

Иммуновариант лейкоза

Доминирующий клеточный фенотип

1

2 3

4 5

10 11 12 13 14

15 16

Пред-Т-клеточный острый лимфолейкоз Т-клеточный острый лимфолейкоз «Нулевой» острый лейкоз

la-вариант острого лимфолейкоза

Про-В-клеточный лимфолейкоз (в рамках 1а-варианта)

«Общий» острый лимфолейкоз (пре-пре-В-клеточный)

Пре-В-клеточный острый лимфолейкоз

В-клеточный острый лимфолейкоз

Вариант острого лимфолейкоза с коэкс-прессией миелоидных антигенов CD11Ь, CD15

МО (острый недифференцированный лейкоз)

Ml (острый миелобластный лейкоз без созревания)

М2 (острый миелобластный лейкоз ссозреванием)

МЗ (острый промиелоцитарный лейкоз)

М4 (острый миеломонобластный лейкоз)

М5 (острый монобластный лейкоз) Мб (острый эритромиелоз)

М7 (острый мегакариобластный лейкоз)

CD7+, CD5+, CD2+, CD3+, CD15-, CD23-, CD13-, CD33-

CD7+, CD5+, CD2+, CD3+, CD10-, CD15-, CD22-, CD23-, CD13-, CD33-

CD38+/-, CD58+/-, CDlla+/-, CD1-, CD5-, CD7-, CD8-, CD10-, CD19-, CD22-, CD23-, HLA-DR-, CD1 lb—, антиген эритробластов—

CDlla+, CD38+, CD58+/-, CDlc+ Ia+, CD19+, CD22+, CD34+/-

CD19+, CD10++/-, CD20+/-. CD22+/~, CD34+/~, CD58+/-, CD2-, CD3-

HLA-DR+,CD19+, CD10+/-, CD58++/-, CD2-, CD3-, CD13-,CD33-

Ia+/-, CD2-, CD3-, CD15-

- фенотип «общего» ОЛЛ(1а+)+ CD1 lb+, CD15+

- фенотип Т1-ОЛЛ(1а+) + CDllb+, CD15+

- фенотип la-ОЛЛ + CDHb+, CD 15+

- фенотип Т-ОЛЛ + CDllb+, CD15+

- фенотип «нулевого» ОЛЛ + CDllb+, CD15+

HLA-DR+, CD15+/-, CD13+/-, CD33+/-

HLA-DR+/-, CD38+/-, CDlla+/-, CD53+, CDllb+/-, CD15+/-, CD7+/-

HLA-DR+/-, CD38+/-, CD72+, CD53+, CDllb+/-, CD7+/-, CDllb++/-, CDlla+/-, CD15++/-

CD53+, CDllb+/—, CD15+/—, HLA-DR+/—, CD38-, CD2-, CD3-, CD4-, CD8-, CD19-, CD72-

HLA-DR+, CD15+, CD38+, CDllb+

HLA-DR+, CDllb+, CD15+, CD38-

Гликофорин А+ антиген эритробластов, HLA-DR+/—, CD38-

CD38+, CD41 + , HLA-DR+/-, CD7+/-, CD4-, CD8-, CDllb-, CD15-, CD33-, CD10-, CD34-, CD71-

Примечание: «+» — выраженная экспрессия; «+/—» — вариабельность экспрессии; «—» вие экспрессии антигена.

отсутст-

Помимо использования методов иммунофенотипирования для диагностики и диффе­ренциальной диагностики гемобластозов, особенно важным оказалось их применение в про­цессе лечения для оценки состояния ремиссии и остаточной популяции лейкозных клеток. Зная фенотипический «портрет» бластных клеток в период установления диагноза, по этим маркерам можно обнаружить клетки лейкозного клона в период ремиссии, а по нарастанию их количества — предсказать развитие рецидива задолго (за 1—4 мес) до появления его кли-нико-морфологических признаков [Воробьев А.И., 1995]. Возможность прогнозирования и ранней диагностики рецидивов острого лейкоза позволяет своевременно изменить или ин­тенсифицировать программу лечения больного во избежание его полного развития. Именно использование методов иммунофенотипирования позволило зарубежным клиникам достичь больших успехов в лечении гемобластозов. В настоящее время ведутся исследования по ис­пользованию полимеразнои цепной реакции для обнаружения в пробах костного мозга и пе­риферической крови бластных клеток при острых лейкозах.

21*