Тинкториальные свойства

Общая характеристика спирохет.

Спирохетозы – это группа инфекционных заболеваний, вызываемых спиралевидными бактериями, характеризующиеся общей интоксикацией и видовой цикличностью развития.

Таксономия:

Порядок: Spirochaetales (от греч. speira – завиток, chaite - волос)

Семейство: Spirochaetaceae, Leptospiraceae

Род: Spirochaeta Leptospira

Borrelia

Treponema

Serpulina

Морфология:длинные, тонкие, спирально-изогнутые микроорганизмы, размеры 0,1-0,3х5-250 мкм. Центральной структурой является протоплазматический цилиндр, в котором содержатся цитоплазма, нуклеоид, рибосомы 70 S и ферменты окружен цитоплазматической мембраной и клеточной стенкой. Протоплазматический цилиндр имеет постоянную спиралевидную форму, благодаря пептидогликану, образуя первичные завитки. Их число, тип, шаг, угол наклона варьируют у разных видов. Вторичные завитки в результате изгиба всего тела. Вокруг спиралевидного цитоплазматического цилиндра располагается периплазматический жгутик (жгутики), один конец его прикреплен к одному из полюсов протоплазматического цилиндра, а другой – к последнему примерно посередине клетки, количество жгутиков от 2-100 (одна половина прикреплена к одному полюсу, а вторая – к другому полюсу). Периплазматические жгутики спирально обвивают протоплазматический цилиндр, образуя осевую нить, поверх которой располагается многослойная наружная мембрана (наружная оболочка спирохеты); жгутик расположен между ней и цилиндром (периплазматический жгутик или эндожгутик).

Отличия от энзожгутиков:

- постоянно обвиваются вокруг тела клетки;

- полностью расположены внутри клетки;

- сокращаются вращением вокруг своей оси, поступательно и сгибательно;

- сохраняют подвижность в среде с относительно высокой вязкостью.

Спор и капсул не образуют. При неблагоприятных условиях образуют цисты в результате сворачивания в клубок.

Тинкториальные свойства: плохо окрашиваются анименовыми красителями, кроме боррелий, грамотрицательные, применяют метод серебрения по Морозову.

Культуральные свойства: требовательны к питательным средам, необходимо добавлять нативный белок, углеводы, жирные кислоты. По способу запасания энергии различают анаэробы, факультативные анаэробы, микроаэрофилы и аэробы. Оптимальная температура для лептоспир и боррелий 28-30 ?C.

Биохимические свойства: каталаза-, уреаза-, оксидаза- отрицательные, реакция Фойгеса-Проскауэра “-”, не восстанавливают нитраты.

Резистентность: зависит от рода и вида.

Роль в патологии.

Трепонемы являются возбудителями сифилиса, фрамбезии, пинты, беджеля;

Боррелии – эпидемического и эндемического клещевого возвратного тифов, лайм-боррелиоза;

Лептоспиры – лептоспирозов.

Общие признаки спирохетозов:

- циклическое течение;

- обнаружение возбудителя в крови и тканях;

- основные методы микробиологической диагностики: бактериоскопический и серологический.

Микробиология сифилиса.

Сифилис - хроническое инфекционное венерическое заболевание, характеризующееся волнообразным течением, чередованием периодов активности клинического проявления болезни с длительными латентными периодами.

История открытия.

Возбудитель сифилиса выявлен в 1905 году Шаудином и Гоффманом и назван бледной спирохетой. Вассерман, совместно с Кейссером и Бруком предложил серологическую реакцию для диагностики сифилиса.

Таксономия.

Порядок Spirochaetales

Семейство: Spirochaetaceae

Род: Тreponema

Вид: Тreponema pallidum

Морфология: спиралевидные бактерии размером 6-14х0,2-0,3 мкм, число первичных завитков от 8 до 12, расположенные на равном расстоянии друг от друга; от концов клетки отходят три периплазматических жгутика. Спор и капсул не образуют, но в организме экспериментальных животных могут синтезировать мукополисахаридной природы капсулоподобный чехол. При неблагоприятных условиях могут превращаться в цисты, зернистые и кистоподобные сферические тела.

Тинкториальные свойства: плохо окрашиваются анилиновыми красителями, граммоотрицательны, по Романовскому-Гимзе – в слабо-розовый цвет (pallidum – бледная), осуществляют метод серебрения по Морозову и негативное контраститрование по Бурри, наиболее эффективное изучение в темнопольном или или фазовоконтрастном микроскопе.

Культуральные свойства: облигатные анаэробы, хемоорганогетеротрофы, оптимальная температура - 35°C, при температуре выше 40°C теряют жизнеспособность. Очень требовательны к питательным средам; необходимо добавление почечной, мозговой ткани или асцитической жидкости. Выросшие на питательных средах трепонемы (“культуральные” штаммы) становятся более грубыми, короткими, полиморфными, утрачивают иммуногенность и патогенность. Трепонемы хорошо растут, не теряя своих иммунногеных и патогенных свойств в тестикулах кроликов, в куриных эмбрионах – “тканевые” штаммы, что используется для выделения и изучения возбудителя от больных.

Биохимические свойства: малоактивны, разлагают глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, маннит с образованием кислоты; образуют индол и сероводород, разжижают желатин; восстанавливают нитрат серебра в металлическое серебро, что придает тканям черную или темно-коричневую окраску.

Антигенная структура: сложная, белки наружной мембраны (термолабильные, разрушающиеся при 76-80°C, полисахариды (термостабильные); липопротеиды, являющиеся перекрестно-реагирующими антигенами, общими для человека и крупного рогатого скота, например, кардиолипиновый антиген – это экстракт липопротеидов из сердца быка, используется в серологических реакциях в диагностике.

Факторы патогенности:

а) токсины:

- эндотоксин (ЛПС клеточной стенки);

б) ферменты патогенности не выявлены;

в) структурные и химические компоненты клетки:

- подвижность за счет жгутиков;

- адгезины;

- белки наружной мембраны.

Резистентность:чувствительны к воздействию факторов внешней среды, УФЛ, высушиванию, высоким температурам (при 40°C в течение 1 часа теряют патогенные свойства, при 48°C погибают через 10 мин); дез. растворы в рабочих концентрациях оказывают губительное действие; выдерживают низкие температуры (на холоде сохраняются до 50 суток, при замораживании до 1 года), в цельной крови и сыворотке при 4°C остаются жизнеспособными в течение 24 часов; чувствительны к солям тяжелых металлов и антибиотикам (пенициллин, эритромицин, карбенициллн и др. )

Эпидемиология.

Источник инфекции – больной человек. Бактерионосительства при сифилисе не бывает.

Путь передачи:

1)контактный: а) прямой; б) непрямой.

2) трансплацентарный (от матери новорожденному);

3) трансфузионный.

Входные ворота: слизистые оболочки половых органов, ротовой полости и т.д., кожа с нарушением целостности.

Роль и патологии

Сифилисом болеют только люди. Экспериментально можно заразить обезьян, кроликов, хомяков. У обезьян образуется твердый шанкр, у кроликов и хомяков – генерализованная хроническая инфекция.

Патогенез:

А. Инкубационный период 3-4 недели (21-24 дня). Возбудитель размножается во входных воротах и регионарных лимфатических узлах.

Б. Первичный сифилис – развивается первичный очаг (аффект), образуется в месте внедрения безболезненная язва с плотным основанием (твердый шанкр, от франц. chancre – язва), отмечается регионарный лимфаденит. Первичные период длится 6 –7 недель и делится на 2 фазы: 1 фаза (первые 3 недели) – первичные серонегативный сифилис; 2 фаза (с 3 по 4 недели) – первичный серопозитивный сифилис.

В. Вторичный сифилис – фаза генерализованной спирохетемии, наступает через 6 недель после появления твердого шанкра и продолжается 3-4-6 лет, поражаются внутренние органы и нервная система. Характерный симптом – розовато-красные папулезно-розеолезные и пустолезные высыпания (сифилиды) на коже (вторичный свежий сифилис). Под действием иммунной системы (ZgM и Щ) большинство спирохет погибает, что обуславливает периодическое исчезновение высыпаний (латентный период), часть спирохет сохраняется в лимфатических узлах и внутренних органах, при снижении активности защитных реакций высыпания проявляются вновь (вторичный рецидивирующий сифилис).

Г.Третичный период (висцеральный сифилис) – обычно развивается через 3-4 года при отсутствии лечения, появляются грануляционные разрастания во внутренних органах – гумм (от лат. gummi – камедь), склонных к распаду и рубцеванию, развивается инфекционная аллергия по типу ГЗТ, образуются IgE и другие неспецифические продукты реагинового типа. Продолжительность периода – 8-10-15-20 лет. Больной сохраняет опасность заражения, но в меньшей степени, чем в инкубационном периоде, в первичном и вторичном сифилисе, особенно при локализации гранулём в полости рта или на половых органах.

Д. Четвертичный период (нейросифилис) развивается через 8-15 лет, специфическое поражение ЦНС (прогрессирующий паралич, спинная сухотка, сифилис мозга). В этот период в спинномозговой жидкости обнаруживают высокие титры специфических антител.

При инфицировании плода от больной матери развивается врожденный сифилис, часто приводящий к выкидышам во II половине беременности или мертворождениям.

При рождении больного ребенка различают:

а) ранний врожденный сифилис – клинические симптомы появляются сразу после рождения (папулезно-розеолезные высыпания, сифилитическая пузырчатка, остеохондриты, поражения внутренних органов и нервной системы (менингиты, энцефалиты);

б) поздний врожденный сифилис (в возрасте 5-15 лет) – характеризуется триадой Хетчинсона: кератит, “бочкообразные зубы”, глухота, иногда изменяются большеберцовые кости “саблевидные голени”.

Иммунитет:

Развивается через 10-11 дней инфекционный иммунитет (“шанкерный” иммунитет), повторного заражения не может быть или развивается абортный шанкр.

Отмечается волнообразное изменение реактивности организма: в I стадии реактивность снижена, образующиеся антитела не обладают протективностью, во II стадии – возрастает за счет клеточного иммунитета, но элиминации возбудителя не происходит, трепонемы образуют цисты и локализуются в стенке кровеносных сосудов, могут образовываться и ?-формы, в III стадии формируется ГЗТ с образованием гранулём.

Микробиологическая диагностика:

При первичном и вторичном сифилисе применяют бактериоскопический методдля обнаружения возбудителя в твердом шанкре или сыпи (темно-польная и фазово-контрастная микроскопия, серебрение по Морозову – это гистологические препараты, импрегнированные серебром, спирохеты в виде черных спиралей.

Основное значение имеет серологическая диагностика:

Экспресс-диагностика: РИФ (непрямой метод).

Через 2-3 недели появляются ZgM, которые выявляют в РИФ (непрямой метод: сыворотка +инактивированные трепонемы РСК (реакция Вассермана) ставится с двумя диагностикумами: а) специфический трепонемный; б) неспецифический перекрестнореализующий кардиолипиновый антиген. Положительный результат – у 50 % больных через 2-3 недели, 75-90 % - при вторичном и начале третичного периода; при врожденном сифилисе – через 2-3 месяца после рождения.

Отметить, что реагиновые антитела представляют смесь ZgM и ZgА, обнаруживаются в сыворотке крови через 2-3 недели после заражения сифилисом, в ликворе через 4-8 недель.

Реакции преципитации применяют в различных модификациях, чаще ИФА (на выявление белков наружных мембран), иммунноблотинг на выявление антител. Некоторые авторы разделяют серологические методы на неспецифические и специфические.

Неспецифические тесты (без участия трепонем):

а) РСК;

б) VDRα реакция (от лат. Veneral Disease Research Laboratory, лаборатория изучения венерических заболеваний) – специализированная флоккуляционная проба на предметных стеклах с использованием кардиолипин-лецитин-хлостеринового антигена (модифицированные осадочные реакции Кана и цитохолева);

в) РА частиц угля, нагруженных каридолипином на выявление реагинов плазмы.

Специфические тесты (с участием трепонем):

а) Реакция иммобилизации бледной трепонемы (реакция Нельсона-Мейера): потеря подвижности тканевой культуры бледной трепонемы в присутствии сыворотки крови больного сифилисом (на поздних сроках болезни);

б) РА (реакция микроаггмотикации);

кожно-аллергическая проба с взвесью убитых трепонем (аллерген люэтин) – (ГЗТ).

Профилактика:

а) неспецифическая – соблюдение личной гигиены;

б) специфическая не разработана.

Лечение:

а) антибиотики пенициллинового ряда, соли тяжелых металлов.

3. Микробиология лептоспирозов.

Лептоспироз – острое природно-очаговое инфекционное заболевание, характеризующееся интоксикацией, волнообразной лихорадкой, поражением кровеносных капилляров, почек, печени, ЦНС, сопровождающееся иногда желтухой, чаще – гемморагическим синдромом.

История открытия: возбудитель описан и изучен в 1915 году. Р. Инадой и У. Идо, Г. Хюбнером, П. Улонгутом и др.

Таксономия:

Порядок: Spirochaetales

Семейство: Spirochaetaceae

Род: Leptospira

Виды: L.interrogans (патогенные для человека и животных)

L.biflexa (сапрофитные).

Морфология.

Тонкие извитые нити (leptos – тонкий, нежный, spira – спираль), размеры 7-15х0,07-0,014 мкм, с 12-18 мелкими первичными завитками, имеет вторичные завитки на концах, придающие им S- или С – образную форму. Встречаются и бескрючковые лептоспиры, обладающие пониженной вирулентностью. Первичные завитки тесно сжаты, при обычном увеличении не различимы (видны в электронном микроскопе). Спор, капсул не имеют. Очень подвижны (поступательные, сгибательные, вращательные, ротационные, змеевидные, волнообразные движения). Могут быть неподвижны в виде веревки.

Тинкториальные свойства.

Плохо окрашиваются анилиновыми красителями. Грамотрицательные. По Романовскому-Гимзе окрашиваются в розовый цвет, при импрегнации серебром по Морозову - коричневые или черные.