Методика приготовления микропрепаратов

Препараты порошков листьев, трав, цветков, плодов, семян и коры готовят путём нанесения небольшого количества порошка на кончике иглы в каплю хлоралгидрата на предметном стекле с последующим перемешиванием до образования однородной массы. Накрывают покровным стёклышком, нагревают до кипения для просветления частиц и удаления воздуха, предотвращая выкидывание частиц порошка из-под покровного стёклышка.

Препараты порошков корней и корневищ готовят в двух растворах:

-для изучения диагностических признаков - в хлоралгидрате;

-для установления присутствия крахмала и изучение крахмальных зёрен – в водно-глицериновой смеси с добавлением раствора йода, разведённого 1:10;

Приготовление микропрепаратов из брикетов, таблеток и гранул осуществляется путём измельчения небольшого количества лекарственной формы до порошкообразной массы в ступке.

Полученный порошок вносят в каплю хлоралгидрата на предметное стекло и далее выполняют, как описано выше. Приготовленные микропрепараты рассматривают сначала на микроскопе с увеличением 7х8, а позже - при увеличении 7х40 (для изучения и зарисования диагностических признаков).

Микроскопическое исследование микропрепаратов порошкованого лекарственного растительного сырья.

1. Листья в порошке характеризуются зелёным, зеленовато-бурым цветом, наличие фрагментов мезофилла листка, верхнего и нижнего эпидермисов пластинки и эпидермиса жилок листка, проводящих элементов (пучков) жилок, волосков, кристаллов, а также наличием частиц поперечного среза листка. Мезофилл листка наблюдается в виде бесформенных частиц с нечёткой структурой на поверхностных препаратах (палисадная ткань в виде плотно выложенных клеток овальной формы малого диаметра, губчатая ткань в виде лопатовых клеток с межклеточниками на поперечном срезе, палисадная ткань представлена продолговатыми, а губчатая - овальными клетками).

Оба эпидермиса листа наблюдаются в препаратах (часто с мезофиллом) с характерным извилисто - или прямостоячими клетками и присутствием проходов, следов волосков с розеткообразным расположением эпидермальных клеток, иногда с присутствием желёз.

Эпидермис жилок характеризуется продолговатыми клетками на поверхностных препаратах.

Проводящая система жилок изучается на продольных разрезах с наличием склеренхимных волокон (иногда с кристаллоносной оболочкой) и характеризуется продолговатыми клетками, отсутствием хлорофилла в клетках основной паренхимы, на препаратах наблюдается характерная разветвленность проводящей системы (пучков).

Волоски встречаются в сломанном, редко в целом виде, обращается внимание на особенности их строения и кутикулярного слоя.

Диагностическое значение имеют следующие элементы: волоски, их тип, строение, кристаллы оксалата кальция (их тип, характер расположения); желёзки, вместилища (их строение); строение эпидермиса (форма клеток, характер кутикулы) и тип проходов; присутствие кристалоносной оболочки в жилках; особенности строения мезофилла (количество рядов полисахаридной ткани), тип строения (дорсивентральный, изолатеральный); цвет, запах, вкус.

2. Травы в порошкообразном состоянии характеризуются зеленовато-серым цветом, присутствием перечисленных выше (для листов) элементов, а также обрывков (фрагментов) эпидермиса стебля, паренхимы коры и сердцевины, проводящих пучков, частей околоцветника (лепестки, листики чашечки), пыльника, обрывков тканей плодов и семян.

Эпидермис стебля изучается в виде фрагментов с прозенхимными прямостенными клетками и устьицами, которые встречаются редко.

Участки паренхимы и сердцевины встречаются на продольных разрезах (тангентальных или радиальных). Характеризуются удлинёнными клетками по оси стебля, большой их величиной, стенки клеток сердцевины иногда пористые.

Фрагменты проводных пучков наблюдаются на продольных разрезах, редко на поверхностных препаратах; в остальных случаях видно, что они прямы (в отличие от разветвлённых в листьях), их клеточные элементы сильно удлинены, наблюдаются разные типы сосудов и элементов механической ткани (волокна), которые сопровождают пучки.

Ткани элементов цветка рассматриваются на поверхностных препаратах. Частички листочков веночка характеризуются наличием сосочкообразных выростов - папуле на верхнем эпидермисе, листочков чашечки – изодиаметральными клетками внешнего эпидермиса с устьицем и наличием волосков. Иногда в листочках веночка могут наблюдаться друзы или кристаллы оксалата кальция другой формы. Из элементов цветка часто встречаются зёрна пыльника, которые характерны для отдельных семейств (яснотковых, астровых и др.).

Наблюдение элементов плодов и семян описано ниже.

Для определения подлинности порошкообразных трав большое значение имеют элементы листка, а также цвет, запах, вкус.

3. Плоды и семена в порошкообразном состоянии характеризуются бурым или красно-бурым окрашиванием и содержат отрывки (частички) экзокарпия с мезокарпием, оболочки семени, эндосперма, элементов механической ткани мезокарпия (склеренхимных волокон, склереид), выделительной ткани (вместилища или канальцы), фрагментов эндокарпию, проводящих пучков, которые сопровождают волокна.

Экзокарпий наблюдается на поверхностных препаратах в виде частичек с прямостенными изодиаметральными клетками, которые имеют разную толщину стенок и разную форму клеток. Иногда встречаются волоски.

Элементы механической ткани встречаются в виде слоёв (поверхностные препараты) волокон с пористыми клетками. Склереиды (каменистые клетки) наблюдаются отдельно или в ткани мезокарпия группами или врозь, чаще на продольном срезе, с толстостенными пористыми оболочками.

Выделительная ткань секреторных образований наблюдается на поверхностных препаратах с пигментированными удлинёнными тонкостенными клетками.

Элементы проводящей системы (пучков) наблюдаются на поверхностных препаратах в продольном срезе, они характеризуются сильно удлинёнными клетками, иногда с нечётко выраженными контурами ; сопровождаются группами склеренхимных волокон с пористыми стенками.

Фрагменты оболочки наблюдаются на поверхностных препаратах с характерными часто большими клетками эпидермиса и внутренних слоёв (механического, пигметного). Участки эндокарпия плода наблюдаются также на поверхностных препаратах, они имеют структурное расположение клеток (в селеровых) и их форму (у паслёновых).

Для определения подлинности порошкообразных плодов и семян диагностическое значение имеют: наличие волосков на экзокарпии, наличие склереид в мезокарпии или оболочке семени; наличие друзовв эндосперме и мезокарпии; особенности строения слоёв оболочки семени; характер клеток экзокарпия (форма, утолщение стенок); характер клеток эндокарпия (у селерових и паслёновых); цвет, запах, вкус.

4. Кореневища и корни в порошкообразном состоянии характеризуються кремовым или светло-бурым цветом и содержат обломки основной паренхимы, эндодермы, сосудов (группами или одиночно), пучков волокон, корку, редко могут наблюдаться капли жирного масла.

Фрагменты основной паренхимы наблюдаются на поверхностных и продольных препаратах с удлинёнными большими клетками с крахмальными зёрнами, иногда содержат друзы оксалата кальция.

Сосуды в порошке наблюдаются в продольном разрезе и характеризуются наличием пор, утолщением из стенок в виде колец или спиралей. Часто они сопровождаются группами либриформа.

Волокна встречаются также в продольном срезе в виде пучков или одиночно, иногда с кристаллической оболочкой.

Фрагменты корки наблюдаются на поверхностных пепаратах с характерными многоугольными изодиаметральными, часто окрашенными в бурый или в красно-бурый цвет клетками, иногда встречается корковая ткань в поперечном срезе.

Клеточные элементы эндодермы в порошке встречаются в продольном срезе и характеризуются удлинёнными клетками, иногда с характерными утолщёнными и пористыми стенками.

Подлинность порошкообразных корней и корневищ определяют по таким характерным элементам: форма крахмальных зёрен, наличие лубяных волокон (с кристаллоносной оболочкой или без неё), типы сосудов; наличие и форма кристаллов оксалата кальция, наличие жирного масла; наличие слизи, крахмала или инулина; особенности клеток эндодермы и их стенок; наличие склереид; наличие дубильных веществ и антраценпроизводных ( по данным микрохимических реакций).

5. Кора в порошкообразном состоянии содержит многочисленные обрывки основной паренхимы, корку, группы лубяных волокон, склереид.

Основная паренхима наблюдается в продольном срезе в виде частичек с слегка удлинёнными тонкостенными клетками, которые содержат друзы оксалата кальция или без включений.

Лубяные волокна встречаются приемущественно в продольном срезе группами, редко одиночно с кристаллоносной оболочкой или без неё.

Склереиды (каменистые клетки) наблюдаются часто одиночно, реже группами, отличаются сильным утолщением стенок и наличием пор.

Коровая ткань наблюдается в виде фрагментов поверхностных препаратов, клетки её имеют изодиаметральную форму, многоугольные, иногда с пористыми окрашенными стенками. Для определения подлинности порошкообразной коры диагностическое значение имеют следующие элементы: наличие лубяных волокон (с кристаллоносной оболочкой или без неё); склереиды, их форма, особенности стенок, наличие кристаллов оксалата кальция и их форма; окрашивание коровой ткани; наличие млечников; характер строения основной паренхимы и клеток эндодермы; наличие дубильных веществ и антраценпроизводных (по данным микрохимических реакций).