ТЕМА: Определение внеклеточных ферментов и

образование антибиотиков микроорганизмами.

Вопросы для рассмотрения

1. Амилолитическая и липолитическая активность.

2. Протеолитическая активность.

3. Определение антибиотической активности микроорганизмов.

4. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотическим веществам.

Задание для выполнения лабораторной работы

1. Определить амилолитическую активность микроорганизмов.

2. Определить интенсивность и форму разжижения желатины.

3. Определить чувствительность микроорганизмов к антибиотическим веществам.

Контрольные вопросы

1. Как определяется амилолитическая активность микроорганизмов?

2. Как определить активность внеклеточных протеаз и какие субстраты для этого используются?

3. Как определяется липолитическая активность?

4. Какими методами выявляют антибиотическую активность микроорганизмов?

5. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Рекомендованный материал

1. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Егоров Е.Н. МГУ, М. 1995. Стр. 165-171.

2. Шлегель Г. Общая микробиология. «Мир», М. 1972. Стр. 301-309.

ЗАНЯТИЕ 13

ТЕМА: Методы выделения и идентификации

Чистых культур микроорганизмов.

Вопросы для рассмотрения:

1. Получение накопительной культуры.

2. Выделение чистой культуры из отдельной колонии.

3. Выделение чистой культуры из одной клетки.

4. Определение чистоты выделенной культуры.

5. Культуральные свойства микроорганизмов.

6. Систематика и идентификация микроорганизмов.

Задание для выполнения лабораторной работы

1. Выделить чистую культуру из отдельной колонии.

2. Описать культуральные свойства колоний.

Контрольные вопросы.

1. Какую культуру называют накопительной?

2. Как получить накопительные культуры микроорганизмов, обладающих высокой требовательностью к составу питательных сред?

3. Как можно получить элективные условия для развития грамотрицательных бактерий?

4. Как обеспечить рост термофилов?

5. Как выделить чистую культуру аэробных микроорганизмов из отдельной колонии?

6. Какие чистые культуры микроорганизмов получают методом глубинного посева? Суть метода.

7. Особенности выделения чистых культур облигатных анаэробов.

8. Для чего и как используются пробирки Хангейта?

9. Суть капельного метода Линдмера.

10. Как проводится выделение отдельных клеток с помощью микроманипулятора?

11. Выделение отдельных клеток с помощью микроселектора Перфильева.

12. Как определить чистоту выделенной культуры?

13. Что относится к культуральным свойствам?

14. Какие признаки учитывают при описании колоний на плотных питательных средах?

15. Чем характеризуется рост микроорганизмов в жидких питательных средах?

16. Что понимают под термином “штамм”?

17. Что такое “вид”?

18. Что означает термины: “морфовар”, “биовар”, “хемовар”, “культивар”, “фаговар”, “серовар”?

19. Цель идентификации и порядок её установления.

20. Что включает морфологическая характеристика при идентификации?

21. Какие физиолого-биохимические свойства учитываются при идентификации?

22. Какие методы используют для определения состава клеток бактерий?

23. Какими методами изучается генотип микроорганизмов.

Рекомендованный материал.

1. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология. МГУ, М. 1985. Стр. 14-17, 94-108.

2. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Егоров Н.С. МГУ, М. 1995. Стр. 56-80, 193-201, 151-154.

3. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. «Спец. литература», С-Петербург. 1998. Стр. 18-31.

ЗАНЯТИЕ 14

ТЕМА: Энергетические процессы микроорганизмов.

Вопросы для рассмотрения.

1.Основные типы брожения.

2.Освобождение энергии в аэробных условиях.

Задание для выполнения лабораторной работы

1.Приготовить окрашенный препарат молочнокислых бактерий; микроскопировать его и зарисовать.

2.Приготовить препарат из маслянокислых бактерий, микроскопировать и зарисовать.

3. Приготовить окрашенный препарат из культуральной жидкости; микроскопировать его, найти и зарисовать микроорганизмы окисляющие жир.

1.Исследование молочнокислых бактерий

Для микроскопических наблюдений молочнокислых бактерий готовят препарат из прокисшего молока, кефира, йогурта, ряженки, ацидофилина, простокваши. Бактериологическую петлю вводят в сгусток и, повернув вокруг оси, извлекают, прикасаясь ею к пленке. Сгусток размазывают на предметном стекле очень тонким слоем без воды. Сушат на воздухе. Фиксируют смесью Никифорова, несколько раз, нанося избыток смеси на мазок и сливая ее. При такой фиксации не только погибают бактерии и прикрепляются к стеклу, но и параллельно эфиром извлекается жир, и удаляется. Фиксированный препарат окрашивают метиленовым синим в течение 2-3 мин, промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсией.

2.Микроскопирование маслянокислых бактерий.

Питательную среду берут из пробирки пипеткой, погружая ее в средний слой сброженной жидкости. Наносят каплю на предметное стекло, добавляют каплю раствора Люголя и покрывают покровным стеклом. Микроскопируют с иммерсией. В клетках можно заметить овальные тельца, сильно преломляющие свет, - это споры. В тех местах клетки, где содержится гранулеза, возникает синее окрашивание. Зарисовать окрашенные клетки, явно относящиеся к группе маслянокислых бактерий.

3.Микроскопирование микроорганизмов, окисляющих жир.

Из колбы берут немного жидкости и готовят мазок. Сушат на воздухе, фиксируют смесью спирта с эфиром и окрашивают фуксином 1-2 мин. При микроскопировании с иммерсионным объективом можно обнаружить неспороносную палочку Pseudomonas fluorescens.

Жир могут окислять также актиномицеты и грибы, особенно рода Oidium lactic.

Контрольные вопросы

1. Спиртовое брожение.

2. Молочнокислое брожение.

3. Маслянокислое брожение.

4. Брожение пектиновых веществ.

5. Брожение целлюлозы.

6. Окисление этилового спирта в уксусную кислоту.

7. Окисление углеводов плесневыми грибами с образованием лимонной кислоты.

8. Окисление клетчатки.

9. Окисление жира.

Рекомендованный материал.

1. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. «Колос», М. 1972. Стр. 104-121.

2. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология. МГУ, М. 1985. Стр.328-364.

3. Мишустин Е.Н., Емцев В.Т. Микробиология. «Колос», М. 1978. Стр. 84-125.

4. Шлегель Г. Общая микробиология.»Мир», М. 1972. Стр. 240-278, 288-300, 347-380.

ЗАНЯТИЕ 15

ТЕМА: Превращение микроорганизмами азотистых

веществ и соединений серы, железа, фосфора.

Вопросы для рассмотрения.

1. Процессы аммонификации.

2. Процессы нитрификации и денитрификации.

3. Биологическая фиксация атмосферного азота.

4. Превращение микроорганизмами соединений серы, железа, фосфора.

Задание для выполнения лабораторной работы

1.Микроскопировать и зарисовать возбудителей аммонификации белковых веществ.

2.Микроскопировать и зарисовать азотфиксирующих бактерий свободноживущих в почве.

3.Микроскопировать и зарисовать тионовые бактерии.

4. Микроскопировать и зарисовать железобактерии.

1.Исследование возбудителей гнилостного распада белковых веществ.

Для обнаружения возбудителей готовят препарат живых бактерий

(в раздавленной капле). Чаще других в препарате встречаются подвижные клетки Prоteus vulgaris, преобладающие на первых стадиях распада белков. Это не спорообразующие, неодинаковой длины палочки. Кроме того, на препарате много спорообразующих клеток Bac.mycoides и Bac.putrificus. У последних споры располагаются терминально и диаметр их шире клетки. Bac.mycoides вызывает аммонификацию белковых веществ в аэробных условиях, Prоteus vulgaris - факультативный анаэроб, а Bac.putrificus вызывает аммонификацию в анаэробных условиях, но может развиваться, если в среде находятся аэробные микроорганизмы, поглощающие кислород.

2.Микроскопирование азотфиксирующих бактерий свободноживущих в почве.

Из группы этих микроорганизмов наибольший интерес представляют бактерии рода Clostridium и Azotobacter.

Clostridium pasteurianum фиксируют азот из атмосферы в анаэробных условиях. Энергию для этого клетки получают за счет маслянокислого брожения. Для выявления азотфиксаторов из почвы и других мест обитания используют безазотную среду Виноградского:

глюкоза ...................20,0г

К₂НРО .......................1,0г

МgSО₄ ..........................0,5г

NаСl ........................0,5г

дистил. вода..............1000мл

Clostridium pasteurianum обычно находится в осадке мела и почвы . Для его обнаружения содержимое колбы хорошо размешивают или взбалтывают и дают осесть крупным частицам. Затем из середины субстрата пипеткой набирают суспензию и каплю наносят на предметное стекло, к которой добавляют каплю раствора Люголя и микроскопируют. Клетки Clostridium pasteurianum содержат в цитоплазме гранулезу, которая от раствора Люголя приобретает синий цвет. Среди них преобладают веретенообразные формы с продолговатыми спорами.

Для обнаружения Azotobacter используют жидкую среду Бейеринка:

манит (или глюкоза, или сахароза) ............20,0г

К₂НРО ..............................................................0,2г

СаСО₃ ...............................................................5,0г

водопроводная вода........................................1000мл

Для микроскопирования берут каплю суспензии из верхнего слоя жидкости и готовят препарат “раздавленная капля”. Обнаруживаются клетки азотобактера в виде диплококков.

3.Исследование тионовых бактерий.

Для выращивания тионовых бактерий используют среду следующего состава:

Na₂ S ₂O₃ .......................5,0г

Na HCO₃ ...................... 1,0г

K ₂HPO.......................... 0,2г

NH₄ Cl............................ 0,1г

MgCl₂ ............................. 0,1г

Из колбы каплю жидкости помещают на предметное стекло и готовят препарат “раздавленная капля”. При микроскопировании обнаруживаются бактерии Thiobacillus thioparus.

АММОНИФИКАЦИЯ

Белковых веществ

Аэробы: bacillus mycoides, bacillus subtilis, bacillus mesentericus

Семейство энтеробактерий (Proteus, Eschirichia).

Анаэробы: Clostridium putrificum, Clostridium sporogenes, bacillus purtificus,

Proteus vulgaris (факультативный анаэроб).

Аммонификация мочевины

bacillus probatus, planasarcina ureae

НИТРИФИКАЦИЯ

I – фаза:NH₄+ 1¹/₂O₂ --- NO₂ + H₂O +2H ⁺; 2NH₃ + O₂--- 2HNO₂ + 2H₂O