Реакция с танином (проба Кункеля - Ветцеля).
При добавлении к пробам крови раствора танина, из крови, содержащей карбоксигемоглобин, выпадает светлый розово-малиновый осадок, а из крови, не содержащей карбоксигемоглобина, выпадает серовато-розовый.
Материалы и оборудование.
Кровь, содержащая и не содержащая карбоксигемоглобин, 3 %-ный раствор танина, штатив с пробирками, пипетки с грушей.
Ход работы.
Кровь разбавляют пятикратным объемом дистиллированной воды: к 0,1 см3 крови добавляют 0,5 см3 воды. Затем прибавляют 1,5 см3 3 %-ного раствора танина и содержимое пробирки хорошо взбалтывают.
При выполнении этой реакции по Бюркеру кровь разбавляют водой в 100 раз и прибавляют 0,2 см3 3 %-ного раствора танина.
10.5. Реакция с формальдегидом (проба Либмана).
При добавлении к пробам крови 40 %-ного раствора формалина, кровь, содержащая карбоксигемоглобин, сохраняет свою окраску, а кровь, не содержащая карбоксигемоглобина через несколько минут становится коричневато-черной. При применении 20 %-ного раствора формалина изменение окраски происходит через 40-60 мин.
Материалы и оборудование.
Кровь, содержащая и не содержащая карбоксигемоглобин, 20 %-ный и 40 %-ный растворы формальдегида, штатив с пробирками, пипетки с грушей.
Ход работы.
К 0,2 см3 неразбавленной крови прибавляют 0,2 см3 формалина (40 %-ный раствор формальдегида) и сильно взбалтывают. Аналогично поступают, используя 20 %-ный раствор формалина. В обоих случаях отмечают время изменения окраски.
Реакция с сульфатом меди (проба Залесского).
При добавлении к пробам крови 40 %-ного раствора сульфата меди, кровь, содержащая карбоксигемоглобин, становится прозрачно-розовой, не содержащая карбоксигемоглобина кровь приобретает зеленоватый оттенок.
Материалы и оборудование.
Кровь, содержащая и не содержащая карбоксигемоглобин, 40 %-ный раствор сульфата меди, штатив с пробирками, пипетки с грушей.
Ход работы.
К 0,1 см3 крови прибавляют воду до 10 см3 и хорошо взбалтывают. К 5 см3 полученного раствора крови прибавляют 0,2 см3 10 %-ного раствора сульфата меди.
В протоколе отмечают ход работы, результаты наблюдений вносят в таблицу5.
10.7. Реакция с гексоцианоферратом (III) калия (проба Бюркера).
При добавлении к пробам крови раствора гексоцианоферрата (III) калия, кровь, в которой содержится карбоксигемоглобин, остается красной, а кровь, не содержащая карбоксигемоглобина, становится желтоватой.
Материалы и оборудование.
Кровь, содержащая и не содержащая карбоксигемоглобин, 1 %-ный раствор гексацианоферрата калия K3[Fe(CN)6], штатив с пробирками, пипетки с грушей.
Ход работы.
К 0,1 см3 крови прибавляют 10 см3 дистиллированной воды и взбалтывают. К 5 см3 полученного раствора крови прибавляют 0,2 см3 1 %-ного раствора гексацианоферрата калия K3[Fe(CN)6].
10.8. Реакция с гексацианоферратом (III) калия и бихроматом калия (проба Сидорова)
При добавлении к пробам крови растворов гексоцианоферрата (III) калия и бихромата калия, кровь, содержащая карбоксигемоглобин, становится карминово-красной, а кровь, не содержащая карбоксигемоглобин, приобретает коричнево-зеленую окраску.
Материалы и оборудование.
Кровь, содержащая и не содержащая карбоксигемоглобин, 1 %-ный раствор гексацианоферрата калия K3[Fe(CN)6], 0,01 %-ный раствор бихромата калия, штатив с пробирками, пипетки с грушей.
Ход работы.
0,5 см3 крови разбавляют водой до 5 см3. К 2 см3 полученного раствора крови прибавляют 0,2 см3 20%-ного раствора гексацианоферрата калия и такой же объем 0,01%-го раствора бихромата калия. Смесь крови и реактивов слегка взбалтывают. Кровь, содержащая карбоксигемоглобин, становится карминово-красной, а кровь, не содержащая карбоксигемоглобин, приобретает коричнево-зеленую окраску.
Реакция с гексацианоферратом (III) калия и уксусной кислотой (проба Ветцеля)
При добавлении к пробам крови раствора гексоцианоферрата (III) калия и уксусной кислоты, из крови, содержащей карбоксигемоглобин, выпадает светлый карминово-красный осадок, а из крови не содержащий карбоксигемоглобин – серовато-коричневый осадок
Материалы и оборудование.
Кровь, содержащая и не содержащая карбоксигемоглобин, 20 %-ный раствор гексацианоферрата калия K3[Fe(CN)6], уксусная кислота ледяная, штатив с пробирками, пипетки с грушей.
Ход работы.
К 0,5 см3 крови прибавляют 4,5 см3 дистиллированной воды. К 5 см3 полученного раствора крови прибавляют 2,5 см3 20 %-ного раствора гексацианоферрата калия и 0,5 см3 ледяной уксусной кислоты.
В протокол записывают ход работы, результаты наблюдений вносят в таблицу 5.
Таблица 5. Результаты реакций обнаружения оксида углерода (II) в крови лабораторных крыс
| ПРОБЫ | ОКРАСКА КРОВИ | |
| Содержащей СО (II) | Не содержащей СО (II) | |
| Гоппе-Зейлера | ||
| Сальковского– Катаяма | ||
| Кункеля – Ветцеля | ||
| Либмана | ||
| Залесского | ||
| Бюркера | ||
| Сидорова | ||
| Ветцеля |
Вопросы для самоконтроля.
1. Пути проникновения в организм СО.
2. Какие соединения гемоглобина образуются при его взаимодействии с СО?
3. На чем основано обнаружение карбоксигемоглобина в крови при помощи качественных реакций?