Приготовление эталонных растворов

а) В мерной посуде готовится раствор ортофосфорной кислоты в дистиллированной воде (0,2 М). Для этого:

— на аналитических весах берется навеска ортофосфорной кислоты;

— навеска переносится в колбу на 100 мл, объем доводится дистиллированной водой до метки, и смесь встряхивается до полного растворения (раствор № 1).

б) В мерный цилиндр на 100 мл переносится 75 мл раствора № 1, 20 мл метанола и 1 мл свежеперегаанного при 5б°С диэтиламина. Смесь хорошо перемешивается.

в) Для приготовления эталонных растворов анализируемых фенилалкиламинов используются чистые субстанции норэфедрина, эфедрона, эфедрина, амфетамина и метамфетамина, и проводят
следующие операции:

— на лабораторных весах взвешивается по 25 ± 1 мг указанных веществ;

— навеска каждого вещества переносится в соответствующую маркированную отдельную колбу на 50 см и заполняется элюентом до метки;

— содержимое колбы встряхивается до полного растворения осадка.
Эталонные растворы служат для идентификации указанных веществ, опреде­ления их хроматографических параметров, а также для приготов­ления контрольных растворов при проведении количественных ана­лизов.

Элюеыт и эталонные растворы сравнения перед использованием необходимо очистить от механических примесей (пыль из атмо­сферы, частицы вещества), которые могут забивать фильтры ко­лонки и нарушать нормальную работу насоса и хроматографической колонки. Для удаления этих примесей используется владипоровская мембрана с размером пор 0,15 — 0,25 мкм или мелкопористый стеклянный фильтр. Элюент перед работой необходимо продегазировать в течение 10 минут. Для этого используется ток газообразного гелия при расходе 40 — 50 мл/мин, обработка на ультразвуковой бане или вакуумный насос.

АНАЛИЗ МОДЕЛЬНОЙ СМЕСИ ФЕ­НИЛАЛКИЛАМИНОВ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИХ ПАРАМЕТРОВ УДЕРЖИВАНИЯ

Тестовая модельная смесь норэфедрина, эфедрона, эфедрина, амфетамина, метамфетамина готовится в растворе подвижной фазы. Для этого:

а) берется навеска норэфедрина, эфедрина, эфедрона, амфетамина, метамфетамина;

б) навески переносятся в колбу 50см , объем доводится до метки, смесь встряхивается до полного растворения и фильтруется..

Хроматографирование модельной смеси проводится при следу­ющих условиях:

расход элюента — 100 мкг/мл;

объем вводимой пробы — 7 мкл;

масштаб чувствительности — 0,4 е.о.п.;

время измерения — 0,3 с;

длина волны — 210 нм.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРЕДЕЛОВ ОБНАРУ­ЖЕНИЯ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ВЕЩЕСТВ

Предел обнаружения анализируемого вещества устанавливается по величине такого количества вещества, которое вызывает сигнал, превышающий в 5 раз уровень флкжтуационных шумов, который на шкале чувствительности составляет 2 мм.

Значение пределов обнаружения (Gmin, мг) рассчитывается по формуле

АНАЛИЗ БИОПРОБ НА СОДЕРЖАНИЕ ФЕНИЛАЛКИЛАМИНОВ

Качественный анализ

Идентификация фенилалкиламинов, содержащихся в биопробах, производится следующим образом:

а) сопоставляются время (объемы) удерживания и коэффици­енты емкости определяемого компонента и образца сравнения (эта­лонный раствор) индивидуальных фенилалкиламинов;

б) сравниваются УФ-спектры предполагаемого компонента и об­
разца сравнения;

в) оценивается совпадение значений времени удерживания оп­ределяемого компонента и образца сравнения при добавлении эта­лонного раствора в раствор экстракта из биопробы (концентрация
образца сравнения должна быть близка к концентрации определя­емого компонента);

г) сопоставляются УФ-спектры определяемого компонента и об­разца сравнения при двух длинах волн, и оценивается их спект­ральное отношение.

Количественный анализ

Для количественного анализа фенилалкиламинов в биощюбах можно использовать различные методы,в том числе метод добавки, метод внешнего стандарта, метод внутреннего стандарта и т.д.

а) Метод добавки. В соответствии с методом добавки проводят анализ раствора экстракта биопробыиз этого же раствора, но с добавкой в него раствора известной концентрации предполагаемого фенилалкиламина (эталонного раствора). Анализы растворов "без добавки" и "с добавкой" должны проводиться в одном масштабе регистрации.

Концентрация определяемого вещества (О) в растворе экстракта из биопробы определяется но формуле

где

Ск —- концентрация "добавки" в растворе по­движной фазы; Vk —- объем добавленного эталонного раствора; Vi — объем раствора экстракта с определяемым веществом; hi — высота сигнала определяемого вещества в растворе экстракта из биопробы; hi+k—- высота сигнала определяемого вещества после добавки в раствор экстракта эталон­ного раствора.

б) Метод внешнего стандарта. В соответ­ствии с методом внешнего стандарта и с учетом линейной зависимости выходного сигнала от массы вещества последовательно, сразу же по­сле анализа раствора экстракта биопробы про­водят анализ эталонного раствора идентифици­рованного вещества. Концентрация эталонного раствора (Ск) должна быть близка к концент­рации определяемого вещества в растворе экс­тракта. Анализы эталонного раствора и экс­тракта биопробы должны проводиться в одном масштабе регистрации.

где

hi — высота сигнала определяемого наркотического вещества в растворе экстракта биопробы; hk — высота пика вещества эталонного раствора.

в) Метод внутреннего стандарта. В соответствии с методом внутреннего стандарта к биообъекту до операции пробоподготовки добавляется известное количество вещества, принятого за стандарт.

Концентрация определяемого вещества (СО рассчитывается по формуле

где

Свс — концентрация внутреннего стандарта;

hi — высота пика (или площадь) определяемого вещества;

h_Bc — высота пика (или площадь) стандарта;

Fi/bc— относительный калибровочный фактор.

Относительный калибровочный фактор компонента Fi/с вычис­ляется по формуле

где

hi — высота пика (или площадь) компонента известной концент­рации (калибровочный раствор);

Q —концентрация калибровочного раствора определяемого ком­понента;

hue — высота пика (или площадь) внутреннего стандарта;

Свс — концентрация внутреннего стандарта.

СЕЛЕКТИВНЫЙ АНАЛИЗ ЭФЕДРОНА

Используя значительное различие в коэффи­циентах молярного поглощения эфедрона и других соединений этой группы при 250 нм, можно провести се­лективный анализ эфедрона в смеси с другими компонентами этой группы — норэфедрином, эфедрином, амфетамином, метамфетамином. При этом анализ проводится путем детектирования при двух длинах волн: 210 нм для регистрации всех определяемых фенилал-киламинов и 250 нм для селективно определяемого эфедрона с последующим сопоставлением полученных хроматограмм для ко­личественного определения эфедрона в биопробах.

При детектировании при длине волны 250 нм имеет место селек­тивная чувствительность спектрофотометрическогодетектора к оп­ределяемому эфедрону и практически полное отсутствие чувстви­тельности к сопутствующим компонентам.

Эфедрин

Эфедрин (1-фенил-2-метиламинопропанола-1-. гидрохлорид) относится к ациклическим алка­лоидам, в молекуле которых аминогруппа на­ходится в боковой цепи. Эфедрин и его стереоизомер псевдоэфедрин находится в некоторых видах эфедры. Эфедрин также содержится в тиссе ягодном и в некоторых других растениях.

Находящийся в растениях эфедрин явля­ется левовращающим, а синтетический — правовращающим. К числу синтетических препаратов относится эфетонин, являю­щийся рацематом эфедрина.

Основание эфедрина растворяется в этиловом спирте (1 : 1), воде (1:36), диэтиловом эфире и хлороформе. Гидрохлорид эфедрина растворяется в воде (1 :4), этиловом спирте (1 : 17), практически не растворяется в диэтиловом эфире и хлороформе. Эфедрин экстрагируется органическими растворителями из ще­лочных водных растворов.

Он повышает артери­альное давление, сужает сосуды, расширяет зрачок и бронхи, уменьшает перистальтику кишок, возбуждает центральную нерв­ную систему. В медицине эфедрин применяется при бронхиальной астме, в глазной практике и при ряде других заболеваний.

Метаболизм. Эфедрин быстро всасывается из пищевого кана­ла и накапливается в печени, почках, легких и мозге. Через 24 ч 80 % принятой дозы эфедрина выделяется из организма с мочой в неизмененном виде. Незначительная часть дозы эфедрина под­вергается N-деметилированию с образованием феиилпропаноламина. Этот метаболит эфедрина выделяется из организма с мочой. Эфедрин — в неизмененном виде выделяется 55—75%. Основными метаболитами являются: 8 — 20%— норэфедрин, 4 — 13%—безаминные метаболиты (бензойная и гиппуровая кислоты, фенилпропандиол). При щелочной моче выведение эфедрина снижается до 20—35%, соответственно увеличивается содержание норэфедрина. рКа = 9,6. Т ½ = 9-11ч.

Обнаружение эфедрина

1. Реакция с солями меди и сероуглеродом. При взаимодейст­вии эфедрина с сероуглеродом и щелочным раствором сульфата меди образуется производное дитиокарбаминовой кислоты, раст­воримое в бензоле:

2. Реакция с 2,4-Динитрохлорбензолом. При этом образуется фенилэтилкетон и амин:

Образовавшийся при этой реакции метиламин с 2,4-динитро-хлорбензолом дает соединение желтого цвета, которое экстра­гируется хлороформом:

3. Реакция с реактивом Драгендорфа. При взаимодействии эфед­рина с реактивом Драгендорфа образуются кристаллы, напоми­нающие тонкие иглы, собранные в пучки.