Производные барбитуровой кислоты

Барбитураты — сильные снотворные и седативные средства.

Имеют кето-енольную и лактим-лактамную таутомерию

Пробоподготовка.

Изолирование из органов трупа.

1. Общие методы

· Изолирование нейтральным ацетоном

· Метод Васильевой

· Метод Стаса-Отто

2. Частные методы

· Метод Валова

100 г измельченного биологического материала + 180 мл воды и 20 мл 10 %-го раствора гидроксида натрияà 30 мин при частом перемешиванииà центрифугируют 30 минà надосадочная жидкость + 120 мл 10 %-го раствора вольфрамата натрия и 1 н. раствор серной кислоты (до рН=2)à нагревают на кипящей водяной бане 20 минà центрифугированиеà центрифугат процеживают через ватный тампонà собирают в делительную воронку + диэтиловый эфирàэфирный слой + 50 мл 10%-го гидроксида натрияà водный слой отделяют + 25 %-ным раствор серной кислоты до рН=2 + диэтиловый эфирà эфирная вытяжка

· Метод Швайковой

100 г измельченных органов трупов + 200 мл воды + раствор щавелевой кислоты до рН=2 à 2 ч при перемешиванииà центрифугируют 30 минà центрифугат процеживают через ватный тампон + хлороформ в течение 5 мин (3 раза)à вытяжки соединяют + 25 мл 0,1 н. раствора гидроксида натрия àхлороформная вытяжка + вода + соляная кислота до рН=2 + две порции хлороформа (по 20 мл) 5 минàхлороформная вытяжка.

· Метод Попова

100 г измельченного биологического материала + 80 мл р-ра серной кислоты до рН=2...3à настаивают 2 ч при перемешиванииà биологический материал еще 2 раза настаивают с новыми порциями раствора серной кислоты 1 ч. à водные вытяжки процеживают через марлю и центрифугируютà центрифугат сливают с осадка и очищают от примесей методом гель-хроматографииà барбитураты + хлороформ в течение 7 мин à хлороформные вытяжки на водяной бане при 70 °С отгоняют и выпаривают досуха.

Очистка полученного извлечения.

Метод экстракции.

Основан на способности фенобарбитала практически не растворяться в органических растворителях в лактимной форме. В лактамной форме он легко переходит в органический слой. Метод заключается в многократной реэкстракции препарата при различных значениях pH из водного в органический слой и наоборот.

Колоночная хроматография.

Очистка вытяжки из биологического материала проводится с использованием колоночной хроматографии. В методе применяются колонки с окисью алюминия. Колонка – мерная пипетка на 10 мл, обрезанная с конца слива. Сорбент смачивают 1-2 мл растворителя - смесь хлороформа и 25% аммиака. Органический экстракт выпаривают в чашечке. Остаток растворяют в минимальном количестве растворителя – хлороформа - переносят в колонку. Затем колонку промывают для удаления соэкстрактивных веществ 8-10 мл хлороформа с добавлением аммиака. Фенобарбитал вымывают из колонки 4-5 мл 0,1 н щелочи (NaOH). Вытекающий из колонки раствор щелочи собирают, доводят до pH=1-2 раствором соляной кислоты и экстрагируют барбитурат хлороформом.

Предварительный этап (ТСХ-скрининг)

1) Исследование в общих системах растворителей

НФ – силикагель

ПФ - ацетон:хлороформ (1:9)

Длина пробега растворителя – 10 см

Время насыщения камеры парами растворителя – 15 – 20 мин

Д:

• дифенилкарбазоном (ДФК) – 0,1% раствор в хлороформе и раствором сульфата ртути – 5% раствор в концентрированной серной кислоте. Исследуемое соединение оказывается во второй хроматографической зоне (барбитураты): Rf=0,31 – 0,41

Непроявленный слой сорбента с анализируемым веществом элюируют ацетоном.

2) исследование в частных системах растворителей

НФ – силикагель КСК, забуференный 0,1н раствором борной кислоты.

ПФ – хлороформ:н-бутанол:25% раствор аммиака (70:40:5)

Время насыщения камеры парами растворителя – 10 мин

Высота поднятия фронта растворителя – 10 см

Д:

Характеристикой каждого вещества при (ТСХ) служит значение R_f :

Длина пробега вещества от старта

R_f = --------------------------------------------------------------------------------------------------------

Длина пробега растворителя от старта

Сравниваются значения R_f соединения, находящегося в образце, со значением R_f вещества сравнения.