Методы клинико-диагностических микробиологических исследований

Основной задачей клинико-диагностических микробиоло­гических исследований является установление этиологического агента инфекционного заболевания — микроорганизма-возбу­дителя. Для решения этой задачи используют различные диа­гностические методы, которые можно подразделить на две группы в зависимости от подхода к определению возбудителя. Первая группа включает методы, направленные на обнаруже­ние присутствия в материале от больного самого возбудителя, а также его антигенов, нуклеиновых кислот (НК), характерных продуктов его жизнедеятельности или органических соедине­ний, входящих в его состав.

Для обнаружения возбудителя применяют традиционные методы: микроскопические, микробиологические и биологи­ческие. Для выявления микробных антигенов используют им-мунохимические методы. Обнаружение НК и других биомоле­кул возбудителя осуществляют с помощью биохимических и молекулярно-биологических методов. Иммунологические, био­химические и молекулярно-биологические методы относятся к числу экспресс-методов диагностики инфекционных заболева­ний, поскольку позволяют получить результат в течение не­скольких часов.

Вторая группа диагностических методов основана на выяв­лении специфической иммунной реакции на данного возбуди­теля со стороны макроорганизма: гуморальной — антител про­тив возбудителя (серодиагностика) или клеточной — ГЗТ (ал-лергодиагностика).

Существующие методы диагностики отличаются друг от Друга трудоемкостью, сроками проведения исследований, чув­ствительностью и специфичностью, а также информативнос­тью полученных данных. Выбор методов исследования зависит от предварительного клинического диагноза заболевания, его сроков и определяется биологическими свойствами микроор-

ганизма-возбудителя и особенностями его взаимодействия с макроорганизмом в ходе инфекционного процесса.

Тема 11.1. МЕТОДЫ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОЦЕНКА ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

▲ План

▲ Программа

1. Выбор, взятие и транспортировка исследуемого мате­риала.

2. Оформление документации.

3. Анализ результатов лабораторных исследований.

А Демонстрация

1. Образцы исследуемого материала (гной, экссудат, кровь, спинномозговая жидкость, моча и др.).

▲ Задание студентам

1. Заполнить типовые бланки для направления материа­ла в лабораторию.

2. Изучить схемы и методы микробиологической диа­гностики основных групп микроорганизмов. При оценке результатов лабораторных исследований опре­делить патогенные и условно-патогенные микроорга­низмы.

▲ Методические указания ^ч

■ ОСНОВНЫЕ ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ И НАПРАВЛЕНИЯ МАТЕ­РИАЛА В КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКУЮ МИКРОБИО­ЛОГИЧЕСКУЮ ЛАБОРАТОРИЮ

Результаты микробиологических исследований во многом зависят от правильного выбора материала для исследования, соблюдения всех правил его получения и направления в лабо­раторию. Выбор материала определяется клинической карти­ной заболевания, предполагаемой локализацией возбудителя в организме на данном этапе инфекционного процесса и путями его выделения в окружающую среду.

1. Материал берут в ранние сроки заболевания, до начала антимикробной терапии. Это повышает вероятность выделения возбудителя. Следует исключить попадание в образец антибио­тиков, антисептиков, дезинфектантов, а также частиц ваты, содержащей свободные жирные кислоты. Важным условием является достаточное количество материала для исследования (например, не менее 5—10 мл крови, 3—5 мл мочи и т.д.).

2. Любой клинический материал для микробиологических исследований рассматривается как потенциально опасный для человека. Поэтому при получении, хранении и транспортиров-

ке материала в лабораторию строго соблюдают правила техни­ки бактериологической безопасности.

3. Материал собирают, соблюдая правила асептики, для предупреждения его возможной контаминации нормальной микрофлорой организма больного и микроорганизмами окру­жающей среды. Используют стерильные инструменты и сте­рильную посуду, закрывающуюся пробками. После взятия ма­териала его в максимально короткие сроки доставляют в лабо­раторию. При отсутствии такой возможности материал со­храняют непродолжительное время, соблюдая определенные правила.

Способ сохранения материала определяется свойствами предполагаемого возбудителя и самого материала. В большин­стве случаев возможно непродолжительное хранение в холо­дильнике при температуре 4 °С. Низкая температура препятст­вует размножению микробов нормальной микрофлоры, при­сутствующих в нестерильном материале (раневое отделяемое, мазки и смывы со слизистых оболочек, мокрота, моча, испраж­нения), а также способствует снижению активности микроби-цидных факторов организма (лизоцима, дефенсинов, компле­мента, клеток иммунной системы). При необходимости дли­тельного хранения материал можно подвергнуть глубокому за­мораживанию при температуре —20 °С и ниже.

Если предполагаемый микроб-возбудитель чувствителен к действию низких температур, материал необходимо сохранять в термостате при 37 "С. Для подавления размножения сопутст­вующей микрофлоры можно использовать антимикробные препараты.

Для предохранения микробов от высыхания материал реко­мендуется помещать в специальные транспортные среды, не содержащие питательных веществ, но обеспечивающие опти­мальные условия влажности, рН, осмолярности, ионной силы и т.д., необходимые для сохранения жизнеспособности возбу­дителя.

При подозрении на анаэробную инфекцию необходимо со­здать бескислородные условия: поместить материал в электив­ные транспортные среды для анаэробов или в емкость, запол­ненную газовой смесью, не содержащей 0₂.

4. Материал транспортируют в специальных биксах, пеналах или металлических контейнерах, которые после использования подвергают дезинфекции.

5. Для серологического исследования у больного натощак берут кровь в количестве 5—6 мл из локтевой вены при соблю­дении правил асептики. Кровь ставят в термостат на 30—60 мин; образовавшийся кровяной сгусток отделяют от стенки стериль­ной стеклянной палочкой и оставляют материал в холодиль­нике на 18—20 ч. Отстоявшуюся сыворотку осторожно сливают в стерильную пробирку; в случае примеси эритроцитов ее

центрифугируют. Сыворотка может храниться в стерильных условиях в холодильнике до 1 мес. Для более длительного хранения ее замораживают при температуре от —20 до -70 "С.

6. В микробиологической лаборатории все остатки патоло­гического материала подлежат уничтожению (путем автоклави-рования).

7. Все материалы, направленные в лабораторию, должны иметь сопроводительный документ — направление на специ­альном бланке, где указаны фамилия, имя, отчество больного, возраст, вид материала, дата взятия, предполагаемый клини­ческий диагноз и другие сведения.