Приготування препаратів живих клітин

Мета роботи: Навчити студентів техніці приготування препаратів живих клітин для вивчення їх морфології, метаболізму та життєздатності.

Теоретичні основи: Мікроскопічне дослідження мікроорганізмів проводять у живо­му або фіксованому стані. Мікроскопія мікробних клітин у живому стані проводиться, головним чином, для вивчення їхрозмірів, форми рухомості, характеру розмноження та відношення клітин до різних хімічних подразників.

Для спостереження мікроорганізмів під мікроскопом необхідно відповідним чином приготувати препарат. Препарати готують на предметних скельцях, товщина яких не повинна перевищувати 1,2¸1,4 мм. Застосування більш товстих скелець приводить до різкого зниження чіткості зображення. Поверхня скельця повинна бути ретельно очищена та знежирена, щоб крапля рідини рівномірно розпливалася по скельцю. Існує декілька способів знежирення ске­лець, найбільш надійний спосіб - обробка скелець хромовою сумішшю протягом двох годин разом з наступним обполіскуванням їх водою та спиртом. До знежирення скелець приводить також обпалювання їх поверхні у полум'ї пальника або обробка скелець ефіром.

Мікроорганізми в живому стані можна вивчати за допомогою препаратів «роздавлена крапля», «висяча крапля» та «відбиток».

В препараті «роздавлена крапля» в світлому та темному полі можна встановити форму та розміри клітин, їх фізіологічний стан, характер розмноження, розташування спор та наявність запасних поживних речовин в клітині.

Препарат «висяча крапля» дозволяє вивчати клітини на протязі декількох днів, спостерігаючі за ростом та розмноженням мікроорганізмів, утворенням та проростанням спор, рухом клітин.

Препарат відбиток готують для вивчення природного розташування в колонії клітин актиноміцетів та міцеліальних грибів.

Матеріали, реактиви й устаткування: Мікроскопи, покривні та предметні скельця, предметні скельця з лункою, вазелін, фільтрувальний папір, бактеріологічні петлі, спиртові пальники, сірники, дезінфікуючий розчин, вата, ефір, стерильна вода, фізіологічний розчин, культури бактерій, дріжджів та міцеліальних грибів.

Хід роботи:

1. Приготувати препарат «роздавлена крапля»:

На чисте та знежирене предметне скло наносять краплю стерильної водопровідної води або фізіологічного розчину та вносять у неї бактеріологічною петлею невелику кількість культури мікроорганізмів. Після перемішування культури на край краплі став­лять покривне скельце під кутом 45° та, обережно нахиляючи, кла­дуть його на краплю. У даному препараті не можна допускати, щоб вода вис­тупала за край покривного скельця та містила пухирці повітря. Якщо рідина нанесена у надлишку, її видаляють за допомогою фільтрувального паперу.

2. Приготувати препарат «висяча крапля»:

Для приготування препарату невелику краплю суспензії мікроорганізмів наносять на покривне скельце та накладають на ньо­го спеціальне предметне скло з заглибленням (лункою) у центрі. Краї покривного скельця та лунки попередньо змазують вазеліном. Предметне скельце легко притискують до покривного та обережно повертають.

3. Приготувати препарат «відбиток»:

Із щільного середовища, на якому мікроорганізми ростуть густим газоном у вигляді колоній, вирізають скальпелем невеликий кубик або окрему колонію та переносять на предметне скло. Поверхня з мікроорганізмами повинна бути направлена на верх. Потім прикладають чисте покривне скельце, злегка натискуючи на нього петлею і відразу знімають, намагаючись не здвинути в бік. Препарат розташовують відбитком у низ в краплю води на предметному склі та мікроскопіюють.

Препарати живих клітин розглядають у мікроскопі, використо­вуючи суху систему.

4. Замалювати культури мікроорганізмів при збільшенні 40х.

Контрольні питання:

1. Для чого проводять мікроскопію мікроорганізмів в живому стані?

2. Техніка приготування препаратів «роздавлена крапля», «висяча крапля», «відбиток»?

3. Назвіть переваги препарату «висяча крапля» над препаратом «роздавлена крапля»

Форма звітного бланка до лабораторної роботи №2.

Група	Курс	Лабораторна робота №2
		Приготування препаратів живих клітин
Прізвище студента
1) Рисунок культури мікроорганізмів …………………………………… (назва препарату мікроорганізмів латинською)   А) бактерії, Б) дріжджі, В) міцеліальні гриби. 2) Відповідь на контрольні питання. 3) Висновки по лабораторній роботі №2
Роботу прийняв		Дата		Підпис

Лабораторна робота № 3