Культивирование и методы выделения чистой культуры аэробов и анаэробов
Культивирование м/о – это получение большого числа бактерий на питательной среде.
Цель культивирования:Изучение микробиологических свойств, Для диагностики инфекций и Для получения биопрепарата из бактерий или полученные с помощью бактерий.
Условия культивирования бактерии:
· Наличие полноценной питательной среды.
· Оптимальная t (≈37 0C)
· Атмосфера культивирования (есть O2 или без него).
· Время культивирования – видимый рост через 18-48 часов, или для некоторых 3-4 недели (tbc)
· Освещенность питательной среды для фотосинтезирующих (растут только в присутствии света).
Аэробы.
Способы культивирования:
· Стационарный – на поверхности агара
· Метод глубинно культивирования с аэрацией среды для растворения в ней кислорода
· Непрерывное культивирование – используют проточные питательные среды.
Этапы выделения ЧК.
1. Изучение смеси – мазок окраска по Грамму.
2. Разобщение бактериальных клеток в смеси и получение колоний:
· По Дригальскому – штрихами по поверхности агара (петлей с материалом делают штриховые движения по пластинчатому агару, к последних штрихах выросту единичные колонии).
· Метод серийных разведений Пастера в физ растворе.
· Метод серийных разведений Коха в расплавленном агаре.
3. Проверка частоты колоний (мазок → окраска по Граму → микрокопирование).
4. Пересев колоний на скошенный агар для накопления чистой культуры.
5. Идентификация микроорганизма по:
· Морфологическим свойствам
· Тинкториальным свойствам
· Культуральным свойствам
· Ферментативным свойствам
· Патогенным свойствам
· Антигенными свойствам
· Чувствительность к антибиотикам…
Анаэробы.
Особенности культивирования:
Для культивирования анаэробов создаются бескислородные условия, что достигается:
1. Регенерацией ПС – питательная среда кипятится и растворенный O2 выходит из нее.
2. Использование специальных приборов:
· Анаростаты – O2 удаляется откачиванием воздуха и заполняется инертным газом.
· Эксикаторы – O2 поглощается химическими поглотителями или выжигается лучиной.
3. Добавление в среду редуцирующих веществ – которые быстро окисляются (углеводы, цистеин, кусочки паренхиматозных органов, аскорбиновая кислота), на этом принципе создана среда для анаэробов – Китт-Тароцци – среда для анаэробов (МПБ, 0,5% глюкозы, кусочки печени).
4. Специальные методы посева:
· Посев под масло
· Посев в трубке Вейон-Веньяла
· Посев по Фортнеру – на чашку заселяют аэробы и анаэробы, аэробы поглощают кислород и получается анаэробная среда.
Выделение чистой ЧК:
1. Накопление анаэробов: смесь засевают на среду Китт-Тароцци и прогревают при t 80 0С 10 мин, спорообразующие анаэробы споры сохраняются, а прочие вегетативные формы м/о погибают. Затем питательная среда культивируется, споры прорастают, и анаэробы размножаются и накапливаются и накапливаются.
2. Получение колоний:
· по Цейслеру – колонии анаэробов получают на поверхности агара в анаэростате
· по Вейнбергу – колонии получают в трубках Вейон-Веньяла.
3. Проверка частоты (мазок → окраска по Граму → микрокопирование) – все анаэробы Гр(+).
4. Пересев Колоний на среду Китт-Тароцци и накопление чистой культуры анаэробов.
5. Идентификация, определение вида анаэроба.
Выделение чистых культур.
Чистая культура (ЧК) – популяция м/о одного вида, выделенная на жидкой или плотной питательной среде в большом количестве.
Цели выделения.
· Диагностика инфекций.
· Выделение чистых культур – основа бактериологического метода, основан на выделение чистой культуры и ее идентификации (определении вида).
· Получение биопрепаратов
· Изучение биологических свойств бактерий
· Санитарно-гигиеническое исследование