Алгоритм практичної роботи

Заняття

ТЕМА.МІКРОБІОЛОГІЧНА ДІАГНОСТИКА СПІРОХЕТОЗІВ.

Актуальність теми: Сифіліс відносять до групи венеричних і соціальних хвороб. В даний час кількість хворих на сифіліс збільшилось в сотні разів порівняно з відповідними показниками початку 90-х і 80-х років.

Значну роль у поширенні лептоспірозу відіграють водяні щурі, виділення

яких потрапляє у воду. Водний шлях інфікування при лептоспірозі

переважає тому хворіють переважно люди, які мають контакт з інфікованою

водою (рибалки і ті, хто купається в водоймах).

На ендемічних по кліщовому зворотному тифу територіях хворіють переважно приїжджі. Епідемічний зворотний тиф (переносять воші) при широкому поширенні педикульозу може швидко розповсюджуватись та призводити до виникнення епідемій. Найчастіше це відбувається в період війн, стихійних лих.

МЕТА (загальна) –уміти проводити мікробіологічну діагностику спірохетозів.

Конкретні цілі Вихідний рівень знань

Уміти:

1. 1.Уміти оцінити та провести реакцію мікропреципітації з сироваткою крові хворого з підозрою на сифіліс.	Проводити реакцію мікропреципітації та оцінювати результати (кафедра мікробіології, попередні заняття).
2. Уміти оцінити реакцію Васермана з сироваткою крові хворого з підозрою на сифіліс.	Проводити реакцію Вассермана та оцінювати результат (кафедра мікробіології, попередні заняття).
3. Уміти провести мікроскопіювання збудника лептоспірозу в темному полі	мікроскопіювати в темному полі (кафедра мікробіології, попередні заняття).

Теоретичні питання:

1. Загальна характеристика спірохет.

2. Мікробіологічна діагностика поворотного тифу.

3. Мікробіологічна діагностика лептоспірозу.

4. Біологічні властивості збудника сифілісу.

5. Мікробіологічна діагностика сифілісу.

6. Профілактика і терапія сифілісу.

При підготовці до заняття користуватися літературою:

1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /под ред. акад. РАМН А.А,Воробьева М.: МИА -2004. С.476-484.

2. Поздеев О.К.Медицинская микробиология /под ред. акад. РАМН В.И.Покровского, М.: ГЭОТАР Медицина 1998. С.475-497

3. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология А.И.Коротяев, С.А.Бабичев.СПб СпецЛит. – 2000. С.481-491.

4. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология Л.Б.Борисов. М.: МИА.-2002.-С.459 -469.

5. Мікробіологія К.Д.П’яткін, Ю.С. Кривошеїн..-К.: Вища школа, 1992.- С.294-307.

6. Микробиология К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин..- М.: Медицина, 1981.- С.358-373.

7. Микробиология В.Д. Тімаков, В.С.Лева шов, Л.Б.Борисов..- М.: Медицина, 1983.- С.359-365.

8. Медицинская микробиология, вірусологія, иммунология Л.Б.Борисов, А.М. Смирнова (ред.)..- М.: Медицина, 1994.- С.340-348.

9. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. К.Д.Пяткин, Н.С.Маркова, Н.Д.Трохимова. - М.: Медицина, 1969.- С.250-258.

10. Руководство к лабораторним заняттям по микробиологии. (Под редакцией Л.Б.Борисова. – М.: Медицина, 1984.- С.211-217, 224-229.

11. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Л.Б.Борисов и др..- М.: Медицина, 1993.- С.187-192, 207-213.

12. Лекції для студентів.

13.Пояснення до самостійної роботи (додаток 1)

14. Графи логічної структури (додаток 2,3)

ПРАКТИЧНА РОБОТА СТУДЕНТІВ

1.Проведення реакції мікропреципітації з сироваткою крові хворого з підозрою на сифіліс.

2.Проведення реакції Васермана з сироваткою крові хворого з підозрою на сифіліс.

3. Переглянути демонстарцію та оформити протокол.

4. Підписати протокол у викладача та прибрати своє робоче місце.

Алгоритм практичної роботи

Робота 1. У сироватці крові хворого можуть знаходитись спірохети тому при проведенні роботи з кров’ю необхідно ретельно дотримуватись правил техніки безпеки. Сироватка не повинна потрапити на слизову ротової порожнини (при роботі піпеткою), шкіру та предмети оточуючого середовища. При проведенні реакції мікропреципітації у вузькі пробірки, які стоять у штативі, наливають по 0,1-0,2 мл нативної досліджуваної сироватки, потім обережно по стінці нашаровують на сироватку тонкою пастеровською піпеткою послідовні розведення антигена. При правильному нашаровуванні повинно бути чітко видно межа між антигеном та сироваткою. Пробірки ставлять у термостат при 37°С на пів-години. При позитивному результаті на межі двох рідин утворюється мутне біле кільце. При обліку реакції приеципітації у любій постановці титром вважають максимальне розведення антигена, з яким утворюється кільце.

Робота 2. При проведенні РЗК скористайтесь таблицею 2.

Таблиця 2 – СХЕМА ПОСТАНОВКИ ОСНОВНОГО ДОСЛІДУ РЗК

N пробірок Інгредієнти	(досл)	2 (к.сиров)	(к. аг)
Сироватка хворого	0,5	0,5	--
Антиген	0,5	--	0,5
Комплемент	0,5	0,5	0,5
Фіз.розчин	--	0,5	0,5
37*С, 30 хвилин
Гемолітична суміш	1,0	1,0	1,0
37*С, 60 хвилин
Облік РЗК (по затримці гемолізу в дослідній пробі)	?	--	--

К.сиров. – контроль сироватки,

К. Аг – контроль антигена.

ДЕМОНСТРАЦІЯ

МІКРОСКОПІЧНІ ПРЕПАРАТИ

Borelia persica забарвлення по Романовському-Гімзе

Спірохети інтенсивно забарвлені в синій колір. Мають 3-5 завитків (вигини самого осьового циліндру), між якими знаходяться відносно рівні ділянки.

Leptospira interrogans в темному полі зору

Лептоспіри не фарбуються аніліновими барвниками, тому їх спостерігають за допомогою мікроскопії в темному полі. Цей різновид патогенних спірохет може мати до 18 первинних завитків та два вторинних завитки (по одному на кожному з кінців клітини).

Мікроскопію в темному полі для знаходження спірохет у матеріалі від хворого використовують при первинному сифлісі. При позитивному результаті спостерігають спірохети у вигляді тонких спіралевидних ниток довжиною 6-14 мкм, які мають 10-12 завитків та активно рухаються. В даний час для діагностики використовують непряму реакцію імунофлюоресценції (РІФ) із стандартною культурою трепонем, сироваткою крові хворого і антивидовою міченою флюорохромом діагностичною сироваткою. Мікроскопію проводять з використання люмінесцентного мікроскопа, спостерігають свічення трепонеми.

ІМУНОБІОЛОГІЧНІ ПРЕПАРАТИ ДІАГНОСТИЧНІ

Кардіоліпіновий антиген для реакції Васермана:

а) представляє собою спиртовий екстракт ліпідів із м’яза серця бика з додаванням 0,25-0,3% холестерину;

б) кардіоліпіновий антиген, це високо очищений екстракт бичого серця, що має постійний хімічний склад ліпідів і змішаний в постійній пропорції з холестерином і лецетином. Постійність хімічного складу кардіоліпінового антигена забезпечує найбільшу уніфікацію результатів. Реакцію Васермана проводять паралельно з двома антигенами: кардіоліпіновим і специфічним, це забезпечує максимально можливу точність результату.

Специфічний антиген для реакції Васермана

готують з тканиних (накопичених в яєчках кролів) трепонем, зруйнованих ультразвуком.

Кардіоліпіновий антиген для реакції мікропреципітації на склі

є розчином трьох високо очищених ліпідів: кардіоліпіну, лецетину, холестерину в спирті етиловому абсолютизованому.

РЕАКЦІЯ ВАСЕРМАНА

Реакція поставлена в відповідності з табл.2. У контрольних пробірках реакція негативна (“лакова” кров – еритроцити повністю гемолізовані, осад еритроцитів відсутній), у досліджуваній пробі реакція позитивна (на дні пробірки або в зависі видні еритроцити, надосадна рідина безбарвна).

Додаток 1

Цільові навчальні завдання:

1. При мікроскопічному дослідженні мікропрепарату крові, зафарбованому за Романовським-Гімза лікар виявив мікроорганізм у вигляді тонких ниток синьо-фіолетового кольору з кількома великими завитками довжиною від 10 до 30 мкм і більше. Для якого інфекційного захворювання характерна така мікроскопічна картина?

А. Поворотного тифу

В. Сифілісу

С. Лептоспірозу

Д. Трипаносомозу

Е. Лейшманіозу

2. При огляді хворого сифилісом на статевих органах знайдений твердий шанкр. Про яку форму інфекції може йти мова у даного хворого?

А. Рецидив

В. Вторинна інфекція

С. Змішана інфекція

Д. Первинна інфекція

Е. Суперінфекція

3. У хворого підозра на сифіліс. Яким методом можна виявить збудника у матеріалі отриманому з твердого шанкра ?

А. Реакція аглютинації.

В. Реакція Вассермана.

С. Виділенням чистої культури.

Д. Мікроскопія матеріалу забарвленого за методом Грама

Е. Темнопольною мікроскопією

4. При плановому обстеженні вагітної в жіночій консультації взята кров із вени для проведення реакції Васермана. Реакція виявилася позитивною. Позашлюбні статеві зв’язки вагітна та її чоловік заперечують. Що потрібно зробити для підтверження або відключення діагнозу сифіліс?

А. Поставить реакцію імобілізації блідих трепонем

В. Зробить мазок із уретри

С. Повторить реакцію Вассермана

Д. Поставить осадові реакції

Е. Поставить реакцію зв’язeванyя комплементe

5. Реакція Васермана у хворого 30 років різко позитивна (++++). Для діагностики якого інфекційного захворювання використовується реакція Васермана?

А. Сифіліс

В. Бруцельоз

С. Туберкульоз

Д. Поліомієліт

Е. Грип

6. У мікропрепараті виготовленому з пунктату регіонарного лімфовузла хворого, зафарбованому за Романовським-Гімза лікар виявив тонкі мікроорганізми з 12-14 рівномірними завитками з гострими кінцями довжиною 10-13 мкм блідо-рожевого кольору. Про збудника якої інфекційної хвороби може йти мова в даному випадку?

А. Сифілісу

В. Трипаносомозу

С. Лептоспірозу

Д. Поворотного тифу

Е. Лейшманіозу

7. В інфекційну клініку поступив хворий з попереднім діагнозом “епідемічний поворотний тиф?” Який матеріал, взятий від хворого, необхідно дослідити в першу чергу?

А. Кров

В. Сечу

С. Ліквор

Д. Фекалії

Е. Змив з носоглотки

8. У лікарню був госпіталізований чоловiк на 5-й день хвороби з проявами жовтяниці, болі в м’язах, лихоманкою, носовими кровотечами. При проведенні лабораторної діагностики бактеріолог провів темнопольну мікроскопію краплини крові хворого. Як виглядає збудник хвороби?

А. мілкі ниткоподібні спірально вигнуті мікроорганізми, які мають 3-5 завитків, з загостреними кінцями.

В. Округлі клітини у вигляді скупчень

С. Палички з потовщеннями на кінцях

Д. Мілкі кокоподібні включення розташовані внутрішньоклітинно

Е. Рухливі, тоненькі з вторинними завитками на кінцях, у вигляді букви S спірілли.

9. До iнфекцiйної лiкарнi поступив хворий з гарячкою , що періодично повторюється . В препараті кровi( товста крапля),забарвленому за методом Романовського Гiмзи, виявленi спиралевиднi мiкроорганiзми з гострими кiнцями синьо-фiолетового кольору. Який збудник виявлено ?

А. Поворотного тифу

В. Черевного тифу

С. Малярії

Д. Висипного тифу

Е. Лептоспiрозу

10. У померлого від гострого інфекційного захворювання, яке супровод-жувалось гарячкою, жовтяницею, геморагічними висипаннями на шкірі і слизових оболонках, а також гострою нирковою недостатністю, при гістологічному дослідженні тканини нирки (забарвлення за Романовськом-Гімзою) виявлені звивисті бактерії, які мають вигляд букв С и S. Які бактерії були виявлені?

А. Лептоспіри.

В. Трепонеми.

С. Спірілли

Д. Боррелії

Е. Кампілобактерії