Замораживание вируссодержащих препаратов

Стабильность вирусов при положительных температурах невелика. Продолжительность
сохранения отдельных видов вирусов даже при температурах, близких к нулю (2-4°),
исчисляется несколькими днями.

Стабильность отдельных групп вирусов при положительных температурах значительно
возрастает при добавлении к ним хлористого магния, хлористого кальция, сернокислой
магнезии и сернокислотного натрия, глюкозы и других препаратов (887, 888, 393, 988, 156).
Но не обеспечивает надежного консервирования вирусов на длительный срок при
положительной температуре. Надежно консервируют вирусы низкие температуры. При
температуре ниже -25° стабилизированы на длинный срок.

Температура в пределах -20-25 , обычно удовлетворительна для сохранения
неочищенных взвесей вирусов (832, 886, 1038, 1073). Чем ниже температура хранения, тем
лучше сохраняются вируссодержащие препараты (319. 501, 673, 707).

Большинство вирусов весьма устойчиво к многократному воздействию низких
температур. Хранение вирусов чумы собак, американского энцефаломиелита, клещевого
энцефалита, ящура, Коксаки при температуре выше эвтектической точки (-20°) в течение
1-2 лет не полностью лишало их активности и не отражалось на других свойствах вирусов.
(64, 66, 89, 616, 672, 1028). Понижение температуры хранения до -35, -79° обеспечивало
сохранение титра вирусов от 1 до 4 лет (674, 707, 804). Очень низкие температуры также
существенно не влияют на активность вирусов, предохраняя их от разрушения
неопределенно длительное время. Испытали действие многократного замораживания (до
-35°) и оттаивания (до 8°) на вирус ящура типа А7, аттенуированный в культуре
клеток почек двухдневных крольчат. Вирусную суспензию (рН 7,6) замораживали в
охлажденном до -38° этиловом спирте, а размораживали в воде, подогретой до 30-35°.
Активность вируса определяли титрованием на культуре ткани почек двухдневных
крольчат после 1,5, 10 и 30 замораживаний и размораживаний.

Замораживание и размораживание тканевой суспензии до 30 раз существенно не
отражается на активности вируса ящура. Аналогичные данные получены при 10-кратном
замораживании вируса болезни Ауески (184).

Вывод: концентрация солей, часто повторяемая при многократном замораживании ряда
вирусов, не влияет на них существенно. Частичное снижение активности вирусов в
процессе длительного хранения их при температуре в пределах -20°, за счет реакций
протеолитического характера, поскольку известно, что активность ферментов не полностью
тормозится даже при температурах значительно ниже нуля (787, 788, 1108).

Большое влияние на сохраняемость вирусов в замороженном состоянии оказывают
защитные среды, которые обеспечивают необходимый водный баланс между вирусом и
окружающей средой, тормозят развитие ферментативных процессов в субстратах, а также
предупреждают механическое повреждение вирусных частиц и снижают влияние
эвтектических концентраций солей. К препаратам, оказывающим защитное действие на ви-
русы при замораживании, можно отнести сахарозу, манит, дульцит, инозит, сыворотку
крови животных (933), снятое молоко, яичный желток (547, 1080), глутаминовую среду
(588), глицерин, диметилсульфоксид и др.

Перед замораживанием фаголизаты фильтровали и добавляли к ним 10% глицерина.
Суспензии величестве 0,1 мл вносили в ампулы объемом 1,5 мл, которые запаивали и
охлаждали вначале до -35° со скоростью 1° в минуту. После этого ампулы переносили в
емкость типа сосуда Дьюара с жидким азотом и хранили при температурах от -165° (в парах
азота) до -196° (в жидкой фазе). Через разные сроки ампулы извлекали, и содержимое их

оттаивали при 35 в течение 30 секунд. Разведения бактериофагов для титрования готовили
на мясном бульоне. После 3-5 лет хранения титр некоторых бактериофагов снижался не
более чем на один логарифм. Серологические свойства, спектр литического действия и
морфология фагов сохранялись без изменения. Фаги, чувствительные к осмотическому
давлению, сохранили эти свойства, а у фагов, устойчивых к осмотическому давлению, они
после замораживания даже несколько усилились.