Методы изучения морфологии микроорганизмов
6.3. Окраска по Граму
Окраска по Граму – основной метод окраски в бактериологии. С окраски по Граму начинается описание морфологических свойств. Такое значение этого метода обуславливается тем, что окраска бактериальной клетки по Граму зависит от типа строения её клеточной стенки и, соответственно, принадлежности к отделу Firmicutes или Gracilicutes – первого этапа идентификации любого вида в бактериологии. Окраска по Граму осуществляется в четыре этапа (Рис. 6-5 – 6-8).
А. На первом этапе фиксированный мазок окрашивается генциановым фиолетовым.
1. Окрашивание продолжается 1 – 2 минуты.
2. И грамположительные и грамотрицательные бактерии окрашиваются этой краской в синий цвет.
Б. На втором этапе мазок обрабатывается раствором Люголя, который формирует с генцианвиолетом красящий комплекс, локализующийся на цитоплазматической мембране.
1. Обработка раствором Люголя продолжается 1 – 2 минуты.
2. И грамположительные и грамотрицательные бактерии на этом этапе остаются синими.
В. На третьем этапе мазок обесцвечивается спиртом.
1. Обесцвечивание спиртом продолжается примерно 20 секунд с последующим обильным промыванием водой.
2. Грамположительные бактерии за это время не успевают обесцветиться и остаются синими, а грамотрицательные, вследствие более тонкого слоя пептидогликана, препятствующего вымыванию спиртом красящего комплекса, обесцветиться успеют и, следовательно, станут бесцветными.
Г. На четвертом этапе мазок окрашивается водным фуксином или другой красной краской – сафранином.
1. Докраска красной краской продолжается 1 – 2 минуты. Причем, этот этап лучше продлить подольше, так как после обесцвечивания бактериальная клеточная стенка воспринимает краску хуже, чем обычно.
2. Грамположительные бактерии остаются синими, так как они уже окрашены более темной краской а грамотрицательные, которые на предыдущем этапе обесцветились, на этом этапе окрашиваются в красный цвет(Рис. 6-9).
 Рис. 6-5. Окраска по Грамму – первый этап: окраска генциановым фиолетовым |  Рис. 6-6. Окраска по Граму – второй этап: обработка раствором Люголя |  Рис. 6-7. Окраска по Грамму – третий этап: обесцвечивание спиртом | |
 Рис. 6-8. Окраска по Грамму – четвертый этап: окраска водным фуксином или сафранином |  Рис. 6-9. Грамположительные и грамотрицательные бактерии в мазке, окрашенном по Граму | ||
Д. Грамположительные бактерии составляют меньшую часть тех бактерий, которые изучает медицинская микробиология. Ниже приводятся основные (этот перечень будет позже добавлен неспорообразующими анаэробами).
1. Грамположительными являются большинство кокков (кроме нейссерий): стафилококки, стрептококки и пневмококки, энтерококки.
2. Среди палочек грамположительными являются листерии, бактерии актиномицетного ряда (актиномицеты, микобактерии, коринебактерии), спорообразующие палочки (бациллы и клостридии).
Е. Большинство бактерий, имеющих медицинское значение, грамотрицательные. Лишь по отношению к микоплазмам не корректно говорить об их грамотрицательности (хотя по Граму они окрашивались бы в розовый цвет – если бы их так окрашивали, так как на практике этот метод в изучении микоплазм не применяется). Дело в том, что грамоложительные и грамотрицательные бактерии отличаются друг от друга типом клеточной стенки (прежде всего – количеством содержащегося в ней пептидогликана), а у микоплазм клеточной стенки с содержанием пептидогликана нет.
1. Из кокков грамотрицательные – нейссерии.
2. Грамотрицательными являются большинство палочек. Собственно все, за исключением перечисленных выше грамположительных).
3. Клеточную стенку грамотрицательного типа имеют также спирохеты.
2Г. Тестовые вопросы по теме занятия
Бактерии круглой формы:
-кокки
палочки
спирохеты
Бактерии цилиндрической формы:
кокки
-палочки
спирохеты
Извитые бактерии:
кокки
палочки
-спирохеты
Размер кокков:
около 0,01 мкм
около 0,1 мкм
-около 1 мкм
около 10 мкм
около 100 мкм
Очень тонкие и очень длинные бактерии:
кокки
палочки
-спирохеты
Располагаются в мазке попарно:
-диплобактерии
-диплококки
стрептобактерии
стрептококки
стафилококки
Располагаются в мазке цепочкой:
диплобактерии
диплококки
-стрептобактерии
-стрептококки
стафилококки
Стафилококки располагаются в мазке:
попарно
цепочкой
-беспорядочными грудами
Бактериальная клетка:
-прокариотическая
эукариотическая
Прокариотическая клетка, в отличие от эукариотической клетки:
-не имеет внутриклеточных мембранных структур
имеет внутриклеточные мембранные структуры
-имеет циркулярно замкнутую ДНК
имеет линейную ДНК
-в составе клеточной стенки содержит пептидогликан
Какие из перечисленных органелл обязательно входят в состав бактериальной клетки:
-нуклеоид
-цитоплазма
-рибосомы
плазмиды
цитоплазматические включения
спора
Какие из перечисленных органелл обязательно входят в состав бактериальной клетки:
-цитоплазматическая мембрана
-мезосомы
капсула
жгутики
реснички
Какие из перечисленных органелл не обязательно, но могут входить в состав бактериальной клетки:
нуклеоид
цитоплазма
-капсула
-жгутики
-реснички
Какие из перечисленных органелл не обязательно, но могут входить в состав бактериальной клетки:
рибосомы
цитоплазматическая мембрана
мезосомы
-плазмиды
-цитоплазматические включения
-спора
Впячивания цитоплазматической мембраны бактериальной клетки:
-мезосомы
плазмиды
пили
цитоплазматические включения
фимбрии
Клеточная стенка грамположительного типа:
-содержит пептидогликан
-имеет толстый слой пептидогликана
имеет тонкий слой пептидогликана
имеет слой полисахарида
Клеточная стенка грамотрицательного типа:
-содержит пептидогликан
имеет толстый слой пептидогликана
-имеет тонкий слой пептидогликана
-имеет слой полисахарида
Дефектные формы бактерий:
-теряют клеточную стенку
теряют цитоплазматическую мембрану
теряют нуклеоид
теряют плазмиды
теряют рибосомы
Грамположительные бактерии по Граму окрашиваются:
-в синий цвет
в красный цвет
в жёлтый цвет
в зелёный цвет
в чёрный цвет
Грамотрицательные бактерии по Граму окрашиваются:
в синий цвет
-в красный цвет
в жёлтый цвет
в зелёный цвет
в чёрный цвет
Грамположительные бактерии:
-большинство кокков
нейссерии
-палочки, имеющие спору
-бактерии актиномицетного ряда
-листерии
большинство палочек
спирохеты
Грамотрицательные бактерии:
большинство кокков
-нейссерии
палочки, имеющие спору
бактерии актиномицетного ряда
листерии
-большинство палочек
-спирохеты
Бактерии актиномицетного ряда:
-палочки, способные к ветвлению
палочки, имеющие спору
палочки, имеющие капсулу
все кокки, кроме нейссерий
палочки, имеющие жгутики