Listeria Enrichment Medium (UVM Medium) (М890)
| Склад | грам/дм3 |
| Гідролізат казеїну Протеозопептон М'ясний екстракт Дріжджовий екстракт Натрію хлорид Калію дигідрофосфат Натрію гідрофосфат Ескулін Налідиксова кислота Кінцеве значення рН (при 250С) 7,4 ± 0,2 | 5,00 5,00 5,00 5,00 20,00 1,35 12,00 1,00 0,02 |
Приготування.Розмішати 54,37 г порошку в 1000 см3 дистильованої води. Підігріти до кипіння для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (1210С) протягом 15 хв. Охолодити до 500С і асептично додати стерилізований фільтруванням розчин акрифлавіну гідрохлориду (до кінцевої концентрації 12 мкг/ см3 або 25 мкг/ см3). Готове середовище має янтарне забарвлення, з легкою опалесценцією з голубуватим відтінком.
Принцип і оцінка результату.Середовище використовують для двоступеневого селективного збагачення лістерій, що дозволяє збільшити висів Listeria monocytogenes з м'ясних продуктів протягом 3-4 днів. Це середовище рекомендують як середовище первинного збагачення для виділення лістерій, пошкоджених при термічній обробці.
Гідролізат казеїну, протеозопептон, дріжджовий і м'ясний екстракти є джерелом необхідних поживних речовин для росту лістерій. Ескулін надає середовищу диференціюючи властивостей. Налідиксова кислота і акрифлавін пригнічують ріст, відповідно, грамнегативних і грампозитивних мікроорганізмів, що, разом з підвищеною концентрацією фосфату, додає середовищу селективних властивостей по відношенню до лістерій.
Для збагачення до 25,0 г або 25,0 см3 матеріалу додають 225 см3 середовища, що містить 12 мкг/см3 акрифлавіну і інкубують при 300С протягом 4 годин, після чого висівають 0,2 см3 культури на чашки з Селективним агаром для лістерій. Через 24 год. інкубації 0,1 см3 культури вносять в 10,0 см3 того ж середовища, що містить 25 мкг/ см3 акрифлавіну гідрохлориду, і через 24 год. знову роблять висів на чашки з Селективним агаром для лістерій. Бульйонні культури лістерій представляють велику небезпеку, в порівнянні з колоніями на агарі, тому при роботі з ними треба дотримуватися особливої обережності.
Бульйон збагачення для лістерій, модифікований –
Listeria Enrichment Broth, Modified (М888)
| Склад: | грам/дм3 |
| Триптоза Дріжджовий екстракт М'ясний екстракт Натрію хлорид Натрію гідрофосфат Калію дигідрофосфат Ескулін Налідиксова кислота Акрифлавіну гідрохлорид (Трипафлавін) Кінцеве значення рН (при 250С) 7,4 ± 0,2 | 10,00 5,00 5,00 20,00 9,60 1,35 1,00 0,02 0,012 |
Приготування.Розмішати 52,0 г порошку в 1000 см3 дистильованої води. Підігріти (при необхідності) для повного розчинення частинок. Розлити у відповідні ємкості. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (1210С) протягом 15 хв. Готове середовище має жовте забарвлення, прозоре або з легкою опалесценцією з блакитним відтінком.
Принцип і оцінка результату.Це середовище використовують для селективного збагачення видів Listeria з молока, молочних і інших харчових продуктів. Середовище містить триптозу, дріжджовий і м'ясний екстракти, які є джерелом необхідних поживних речовин для росту лістерій, у тому числі вітамінів, амінокислот, мікроелементів. Хлорид натрію підтримує оптимальний осмотичний тиск середовища, а фосфати надають йому буферних властивостей. Налідиксова кислота і акрифлавін пригнічують ріст, відповідно, грамнегативних і грампозитивних мікроорганізмів, за винятком лістерій.
Для збагачення до 25,0 г або 25,0 см3 матеріалу додають 225 см3 середовища і, при необхідності, подрібнюють. Інкубацію ведуть при 300С протягом 7 діб, роблячи висів через 1, 2, і 7 днів на Селективний агар для лістерій.
Основа бульйону вторинного збагачення для лістерій –
Fraser Secondary Enrichment Broth Base (М1083)
Це середовище із спеціальною добавкою рекомендують для виділення, культивування і збагачення Listeria monocytogenes з харчових продуктів і об'єктів довкілля.
| Склад: | грам/дм3 |
| Протеозопептон Гідролізат казеїну Дріжджовий екстракт М'ясний екстракт Натрію хлорид Літію хлорид Натрію гідрофосфат Калію дигідрофосфат Ескулін Заліза амонійного цитрат Кінцеве значення рН (при 250С) 7,2 ± 0,2 | 5,00 5,00 5,00 5,00 20,00 3,00 12,00 1,35 1,00 0,50 |
Приготування.Розмішати 57,85 г порошку в 990 см3 дистильованої води. Підігріти до кипіння для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (1210С) протягом 15 хв. Остудити до 45-500С і асептично додати розчинений в 10 см3 0,2 N NaOH вміст 1 флакона з однією з добавок Фрейзера (FD064 або FD065). Ретельно перемішати і розлити у відповідний посуд.
Готове середовище має жовте забарвлення, прозоре, з легким преципітатом. Після введення добавки середовище набуває флюоресцентно-жовтого забарвлення і має легкий преципітат.
Принцип і оцінка результату.Протеозопептон, гідролізат казеїну, дріжджовий і м'ясний екстракти є джерелом необхідних поживних речовин для росту лістерій. Хлорид літію пригнічує ріст ентерококів. Усі лістерії гідролізують ескулін до ескулетина, який з іонами заліза формує коричнево-чорний або чорний комплекс. Цитрат амонійного заліза стимулює ріст Listeria monocytogenes. Цей бульйон засівають матеріалом з середовища первинного збагачення. Культури, що виросли на бульйоні Фразера, відсівають на щільні середовища для підтвердження присутності лістерій.
Основа селективного бульйону для лістерій –
Listeria Selective Broth Base (М889)
Це середовище з додаванням селективних речовин рекомендують для селективного виділення і культивування Listeria monocytogenes.
| Склад: | грам/дм3 |
| Гідролізат казеїну Папаїновий перевар соєвого борошна Дріжджовий екстракт Натрію хлорид Калію гідрофосфат Глюкоза Кінцеве значення рН (при 250С) 7,3 ± 0,2 | 17,00 3,00 6,00 5,00 2,50 2,50 |
Приготування.Розмішати 36,0 г порошку в 1000 см3 дистильованої води. Підігріти для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (1210С) протягом 15 хв. Охолодити до кімнатної температури і асептично додати розчинений в 5 см3 0,2 N NaOH вміст 1 флакона з Селективною добавкою для лістерій II (FD163) або 2 флаконів з Селективною добавкою для лістерій I (FD163I). Перед розливом ретельно перемішати.
Готове середовище має жовте флуоресціююче забарвлення, прозоре, без будь-якого преципітату.
Принцип і оцінка результату.Гідролізат казеїну, папаїновий перевар соєвого борошна і дріжджовий екстракт є джерелом необхідних поживних речовин для росту бактерій. Глюкоза є джерелом енергії. Добавки, що вносяться, надають середовищу селективних властивостей. Циклогексамід пригнічує ріст сапрофітних грибів. Налідиксова кислота і акрифлавін пригнічують ріст, відповідно, грамнегативних і грампозитивних мікроорганізмів.
Для збагачення до 25,0 г або 25,0 см3 матеріалу додають 225 см3 середовища і, при необхідності, подрібнюють. Інкубацію ведуть при 300С до 7 доби. Вказаний період інкубації підходить для більш ефективного виділення пошкоджених зовнішніми чинниками лістерій з молока і молочних продуктів. Через 1, 2, і 7 днів інкубації матеріал висівають на Селективний агар для лістерій.