Обнаружение молочной кислоты
Принцип метода
Молочная кислота в присутствии фенолята железа (реактив Уффельманна), окрашенного в фиолетовый цвет, образует лактат железа желто-зеленого цвета.
Ход работы
1 г мышц растирают до гомогенного состояния в ступке с небольшим количеством кварцевого песка в течение 3 мин, добавив 5 капель воды. Затем приливают 3 мл дистиллированной воды и фильтруют через смоченную водой вату.
К 15 каплям фильтрата добавляют по каплям реактив Уффельманна (20 капель 1% раствора фенола + 2 капли 1% раствора хлорного железа) до появления фиолетовой окраски. В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска жидкости переходит в желто-зеленую, так как образуется лактат железа. Для сравнения проводят реакцию Уффельманна с раствором молочной кислоты и наблюдают развитие желто-зеленого окрашивания.
Результат: __________________________________________________________________
_______________________________________
Вывод_______
_______________________________________
Лабораторная работа № 16
Проба Бенедикта на глюкозу
Реактив Бенедикта:
В колбу на 1 л наливают 700 мл дистиллированной воды, добавляют 173 глимоннокислого натрия (Na3С6Н507*11Н2О), 100 г безводного (или 200 г кристаллического) углекислого натрия. Нагревают до растворения. Отдельно растворяют 17,3 г сернокислой меди в 100 мл воды. Смешивают оба раствора, непрерывно взбалтывая, и после охлаждения доливают до 1 л дистиллированной водой в мерной колбе.
Ход работы
В пробирку наливают 5 мл реактива Бенедикта и прибавляют 0,4—0,5 мл мочи. После перемешивания пробу нагревают 2 мин на пламени или 5 мин кипятят на водяной бане. Раствор охлаждают 5—7 мин.
Оценка результатов
При наличии глюкозы моча окрашивается в зеленый, желтый или красный цвет, на дне пробирки образуется осадок. Пробу оценивают по условной шкале от 0 до 4 баллов. При зеленой окраске без наличия осадка — проба отрицательная. Проба положительная, если количество глюкозы в моче превышает 0,5 г/л. При содержании в моче 0,5—5,0 г/л глюкозы цвет пробы зеленый (1+); 5—7,5 г/л -желто-зеленый (2+); 10 г/л — желтый (3+); 20 г/л и выше — красный (4+). Проба Бенедикта самая чувствительная из редукционных проб на глюкозу в моче. Ввиду значительного разведения (в 10—12 раз) восстанавливающее действие целого ряда редуцирующих веществ в моче выражено слабее, чем в других пробах.
Вывод_______
_______________________________________
Выделение гликогена из печени
Принцип метода Гликоген хорошо растворим в воде и достаточно устойчив в слабокислой среде, поэтому метод выделения сводится к механическому разрушению ткани и экстракции гликогена 5% раствором ТХУ.
Реактивы, исследуемый материал:
1) ТХУ, 5% раствор;
2) этиловый спирт, 96%;
3) сульфат аммония в порошке;
4) ацетат свинца, 10% раствор;
5) раствор Люголя;
6) NaС1, 0,85% раствор;
7) печень сытого и голодного животного.
8)
Ход работы
Печень животного быстро извлекают, разрезают на тонкие пласты, которые немедленно опускают в стакан с кипящим физиологическим раствором для инактивации фосфорилазы (10—15 мин). Такая печень может храниться в морозильной камере до 1,5 мес.
Отвешивают по 0,5 г печени от сытого и голодного животного, помещают в ступки и заливают по 3,0 мл 5% раствора ТХУ и растирают пестиком 10 мин. К экстрактам добавляют по 3 мл дистиллированной воды и полученные суспензии фильтруют в другие пробирки.
С фильтратами выполняют качественные реакции на гликоген.
3.1.В одну пробирку наливают 1 мл дистиллированной воды, во вторую и третью — по I мл исследуемых фильтратов. После этого в каждую пробирку добавляют по 1—2 капли раствора Люголя и сравнивают окраску.
В три пробирки наливают по 10 капель фильтрата, полученного из печени сытого животного, и проделывают реакцию осаждения. Для этого в первую пробирку приливают 10 капель этанола, во вторую — 10 капель 10% раствора ацетата свинца, в третью насыпают порошок сульфата аммония до полного насыщения и наблюдают, в какой из них выпадет осадок. Те же реакции выполняют с фильтратом, полученным из печени голодавшего животного.
Результат: ___________________________________________________________________
_______________________________________
Вывод_______
_______________________________________
VII.ГОРМОНЫ.
Лабораторная работа № 17