Тема: система hla и иммунологическая реактивность

I. МОТИВАЦИЯ ЦЕЛИ: Развитие клинической иммуногенетики первоначально происходило в связи с развитием трансплантологии. Однако, по мере накопления данных стало очевидным, что учение о HLA-системе выходит далеко за пределы интересов трансплантологии. Главный комплекс гистосовместимости инициирует процессы клеточного распознавания, определяет предрасположенность к заболеваниям, является «хранителем» гена иммунного ответа, осуществляет коррекцию гомеостаза. Все это определяет актуальность изучения строения HLA и ее биологических функций в норме и при патологии.

II. ЦЕЛЬ САМОПОДГОТОВКИ: после самостоятельного изучения темы студент должен знать строение HLA-системы, ее биологические функции, роль в иммунных реакциях, связи антигенов HLA с развитием патологических процессов.

III. БАЗИСНЫЕ РАЗДЕЛЫ ДЛЯ ПОВТОРЕНИЯ: к практическому занятию студент должен повторить:

"Биология", под редакцией В.Н. Ярыгина, гл. 5.2, 5.3 - "Наследственность", "Изменчивость", с. 74 – 149.

IV. ПЛАН ИЗУЧЕНИЯ ТЕМЫ:

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ ИЗУЧЕНИЯ ТЕМЫ:

1) Понятие системы гистосовместимости.

2) Определение понятий генов и антигенов гистосовместимости.

3) Строение HLA-системы:

- полиморфизм антигенов;

- классы генов HLA, их характеристика;

- строение антигенов HLA.

4) Характеристика генов 1 класса.

5) Антигены HLA 1 класса, локализация, биологическая функция, роль в иммунных реакциях.

6) Характеристика генов 2 класса.

7) Антигены 2 класса, локализация, биологическая роль, значение в иммунном ответе.

8) Характеристика генов и антигенов 3 класса.

9) Ассоциация HLA с риском развития некоторых заболеваний.

10) Методы идентификации антигенов HLA.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ ИЗУЧЕНИЯ ТЕМЫ:

После разбора теоретических вопросов темы, студенты самостоятельно

решают ситуационные и проблемные задачи.

Рекомендуемая литература по теме занятия:

Основная:

1) А.А. Ярилин «Основы иммунологии», учебник для студентов медвузов, 1999 г.;

2) Р.В. Петров «Иммунология», учебник для студентов медвузов 1987 г.;

3) Д.К. Новиков «Медицинская иммунология», 1998 г., разд. 4, с. 62 – 65.

4) Лекция.

Дополнительная:

5) В.Г. Галактионов «Иммунология», 1998 г., гл. 3, 10;

6) А.Ройт «Основы иммунологии», 1991 г., гл. 8, 9;

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ:

1) Иммуногенетика как наука.

2) Определение ГКГС.

3) Определение генов и антигенов ГКГС.

4) Расскажите о строении системы HLA.

5) Охарактеризуйте понятие полиморфизма антигенов HLA.

6) Охарактеризуйте гены 1 класса.

7) На каких клетках присутствуют антигены 1 класса, их биологическая роль.

8) Охарактеризуйте гены 2 класса.

9) Назовите локализацию антигенов 2 класса и их биологическую роль.

10) Какова роль антигенов 1 и 2 классов в иммунном ответе?

11) В чем отличие строения антигенов МНС 1 и 2 классов?

12) Охарактеризуйте гены 3 класса и кодируемые ими антигены.

13) Какова роль системы HLA в трансплантационном иммунитете.

14) Перечислите основные гипотезы, объясняющие связь антигенов HLA с развитием некоторых патологических состояний.

15) Назовите и кратко охарактеризуйте методы идентификации антигенов HLA.

16) Каково диагностическое значение типирования антигенов HLA?

17) Каковы перспективы развития иммуногенетики?

ОБЯЗАТЕЛЬНЫЕ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ЗАДАНИЯ:

1) Нарисуйте схему строения ГКГС.

2) Нарисуйте схему строения антигенов HLA 1 и 2 классов.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Табл. 7.Заболевания,ассоциациированные с HLA

Заболевания с высокой степенью ассоциации с HLA	Класс HLA	Специфичность	Относительный риск
Анкилозирующий спондилит (болезнь Бехтерева)   Болезнь Рейтера   Подострый аутоимунный тиреоидит   Герпитиморфный дерматид   Селективный дерматид IgA   Вульгарная пузырчатка   Аутоимунный увеит   Инсулинзависимый сахарный диабет   Бактериальные артриты   Хронический аутоимунный гепатит   Псориаз   Синдром Гудпасчера   Идиопатический мембранозный гломерулонефрит   Целиакия	I   I   I   II   II   II   I   II   I   II   I   I     II   II	B27   B27   B36   DR3   DR3   DR4   B27   DR3/4   B27   DR3   DR2   DR3     DR3	O – 207,9 K – 91,0 H – 54,4   37,6   18,9   17,3   17,0   14,6   14,6   14,3   14 – 30   13,9   13,3   13,1   12,0     11,6

Рис. 17. Строение системы HLA (Медуницин Н.В., Алексеев А.Л., 1987)

Рис. 18. Строение МНС I И II классов

ЛИТЕРАТУРА

ОСНОВНАЯ:

В.Г. Галактионов «Иммунология», 1998 г

Р.В. Петров. – Иммунология, учебник для медвузов. - Медицина 1987 г.

В.И. Пыцкий, Н.В. Андрианова. - Аллергические заболевания. - М., Ме-

дицина, 1990 г.

А. Ройт. - Основы иммунологии.- М. - 1991 г.

В.С. Федосеева с соавт. - Руководство по иммунологическим и аллерго-

логическим методам в гигиенических исследованиях. - М., 1993 г.

А.А. Ярилин. - Основы иммунологии, учебник для студентов медвузов, 1999 г.;

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ:

1. В.Г. Галактионов. - Графические модели в иммунологии. Медицина 2001 г.

2. В.Г. Галактионов. - Иммунология, 1998 г.

3. Г. Н. Дранник. - Иммунотропные препараты. Киев, 1994 г.

4. Иммунология (под. ред. Пола У.). - т.1,2,3, Мир 1987 г.

5. Л. Йегер Клиническая иммунология и аллергология. - т 1,2,3. Медицина .- 1990 г.

6. С.А. Кетлинский. - Эндогенные иммуномодуляторы, 1992 г.

7. Клиническая ревматология (под ред. КАРРЕЯ). - М, 1990 г.

8. Клиническая иммунология и аллергология (под ред. Г. Лолора, Т. Фишера). – М.,

2000 г.

9. Л.В. Ковальчук, Л.В. Ганковская и др. «Система цитокинов», пособие для студентов, М., 1999 г.

10. А.С. Логинов. - Иммунная система и болезни органов пищеварения.

Медицина 1985 г.

11. М.С. Ломакин. - Иммунобиологический надзор. М, 1990 г.

12. Д.Н. Маянский. - Хроническое воспаление. М. 1991 г.

13. Д.К. Новиков «Медицинская иммунология», 1998 г.

14. Д.К. Новиков «Оценка иммунного статуса», 1998 г.
МЕТОДЫ ОЦЕНКИ ИММУННОГО СТАТУСА

МЕТОДИКА ВЫДЕЛЕНИЯ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ В ГРАДИЕНТЕ ПЛОТНОСТИ ФИКОЛЛ-ВЕРОГРАФИН

Кровь из периферической вены в объеме 5 мл забирается в чистые сухие центрифужные пробирки содержащие 3 мг среды 199 или среды Хенкса и гепарин в конечной концентрации 20 ЕД/мл. Содержимое пробирки тщательно перемешивается, после чего подслаивается фиколл-верографин в объеме 2 мл (1/4 общего объёма) плотностью 1,077 – 1,078 г/мл.

Пробирки центрифугируют при 1500 об./мин. 30 мин. после чего мононуклеары образующие беловатое кольцо над разделяющим раствором, отсасывают и трижды отмывают раствором Хенкса, центрифугируя 1 раз 25 мин. при 1500 об./мин., второй и третий разы по 10 мин. - при 1000 об./мин.

Как правило, доля лимфоцитов в полученной взвеси клеток составляет около 90%

Определение поверхностных антигенов лимфоцитов CD(табл. ) широко применяется в ди­агностике иммунодефицитов, аутоиммунных, аллергических и других заболеваний, обусловленных нарушением иммунитета, а также для контроля за приживлением трансплантата и эффективностью иммунотерапии. В настоящее время для определения поверхностных антигенов лимфо­цитов применяются моноклональные антитела.

Моноклональные антителавырабатываются гибридомами, ко­торые образуются при слиянии миеломных клеток с нормальны­ми плазматическими клетками. Для фенотипирования лимфоци­тов человека используют мышиные моноклональные антитела. Моноклональные антитела используются не только для выявле­ния разных типов клеток, но и для изучения процессов дифференцировки, созревания, межклеточного взаимодействия и актива­ции лимфоцитов. Определение поверхностных антигенов лимфоцитовпроводятв иммунопероксидазном (с использованием светового микроскопа) или иммунофлюоресцентном (с использованием люминесцентного микроскопа или проточного цитофлюориметра) тестах.В случае использования флюоресцентного метода антитела метят флюоресцеина изотиоцианатомили фикоэритрином.Оба вещества флюоресцируют под действием света с дли­ной волны 488 нм, при этом флюоресцеина изотиоцианат излуча­ет зеленый, а фикоэритрин — оранжевый свет. Флюорохром — перидинин также флюоресцирует под действием света с длиной волны 488 нм, но излучает красный свет. Использова­ние трех флюорохромов, поглощающих возбуждающий свет од­ной длины волны, позволяет одновременно определять три разных поверхностных антигена.

Проточный цитофлюориметр— прибор, позволяющий быстро оценить состав клеточной популяции по флюоресценции и опти­ческим характеристикам клеток. С помощью этого прибора можно определить абсолютное и относительное число клеток разных популяций и субпопуляций. К основным преимуществам метода относятся быстрота анализа и возможность одновремен­ной оценки многих параметров клетки: размера, оптической плотности, поверхностных антигенов. Проточная цитофлюори-метрия применяется также для анализа ДНК при исследовании клеточного цикла.

Исследование молекул адгезии. Определяют экспрес­сию поверхностных антигенов CDlla/CD18, CDllb/CD18 и CD11 c/CDl8 с помощью проточной цитофлюориметрии и моноклональных антител к CDlla, CDllb, CDllc и CD18. При иммунодефицитах, обусловленных нарушением адгезии лей­коцитов, наблюдается снижение экспрессии этих антигенов как на покоящихся, так и на активированных нейтрофилах.