Техника исследования с помощью микроскопа

Задание для самоподготовки

Знать:

1. Увеличительные приборы и их назначение.

2. Устройство светового микроскопа.

3. Правила работы с микроскопом на малом и большом увеличении.

4. Методы окраски.

Практическое задание:

1. Заполните таблицу «Методы микроскопии».

Метод	Описание
Оптическая микроскопия
Световая
Темнопольная
Фазово-контрастная
Поляризационная
Флуоресцентная
Электронная микроскопия
Просвечивающая
Сканирующая

Обозначьте части микроскопа и их функции.

Часть	Функции
Бинокулярная насадка
Диафрагма
Конденсор
Лампа
Макровинт
Микровинт
Объективы
Окуляр
Основание
Предметный столик
Штатив

Ознакомитесь с правилами работы со световым микроскопом.

Установите микроскоп на ровную поверхности рабочего стола. Поворотом револьверной пластинки поставьте объектив малого увеличения (х8) над отверстием предметного столика таким образом, чтобы он занимал срединное (центрированное) положение по отношению к тубусам (при этом срабатывает защелкивающий механизм). С помощью рукояткимакрометрического винта установите расстояние между объективом и поверхностью предметного столика около 1 см. Следует помнить, что изучение любого препарата начинается с использования объектива малого увеличения. Откройте полностью апертурную диафрагму под конденсором и поднимите конденсор вверх до упора.

Обратите внимание на ошибки, возникающие при самостоятельной работе с микроскопом:

ü все поле зрения затемнено, причиной чего является недостаточный световой поток, поступающий в объектив (это легко устраняется максимальным открытием диафрагмы или вращением регулятора освещения);

ü часть поля затемнена, а часть – освещена, т.е. объектив не занял фиксированного положения в гнезде (для исправления нужно повернуть револьвер до упора, после легкого щелчка объектив займет фиксированное положение).

Помните, что микроскоп является точным прибором и требует бережного отношения. При работе с ним необходимо соблюдать определенные правила:

ü при переносе микроскопа с одного места на другое следует держать его одной рукой за тубусодержатель, а другой – за основание;

ü рукоятку микрометрического винта нельзя грубо вращать (при одном обороте винта столик перемещается на 0,1 мм, что вполне достаточно для точной фокусировки);

ü при переводе объектива револьверную пластинку следует вращать плавно, не допуская повреждения защелкивающего механизма, обеспечивающего центрированное положение объектива.

ü

Техника исследования с помощью микроскопа

1. Установите микроскоп в рабочее положение.

2. Приготовьте временный микропрепарат волокон ваты: на поверхность предметного стекла нанесите пипеткой каплю воды, в которую с помощью пинцета поместите несколько волокон ваты; возьмите покровное стекло (двумя пальцами за уголки), опустите его одним краем до соприкосновения с каплей, а затем медленно накройте препарат (рис. 1).

Рис. 1. Схема приготовления временного препарата

3. Изучите микропрепарат волокон ваты с использованием объективов малого (х8) и большого (х40) увеличения:

- с помощью рукоятки макрометрического винта поднимите тубус с центрированным объективом х8 и поместите приготовленный препарат в центре предметного столика. Опустите конденсор, оставляя диафрагму открытой;

- вращая рукоятку макрометрического винта от себя и глядя на препарат сбоку (чтобы не раздавить его), опустите объектив почти до соприкосновения его нижней линзы с покровным стеклом;

- глядя в окуляры и вращая рукоятку винта на себя, медленно поднимайте объектив до появления резкого изображения объекта (фокусное расстояние составляет 5–8 мм). Если после прохождения фокусного расстояния не удалось увидеть изучаемый объект (волокна ваты), работу следует повторить, начиная с предыдущего пункта. При необходимости микроскоп можно сфокусировать вначале на край покровного стекла, а затем разыскать объект, осторожно передвигая препарат;

- изучая препарат при малом увеличении, рассмотрите перекрещивающиеся волокна ваты и лежащие между ними пузырьки воздуха (образования с четкими темными контурами, имеющие округлую или неправильную форму);

- передвигая препарат, найдите подходящий участок (например, перекрест двух отдельных волокон) для дальнейшего изучения с использованием объектива большого увеличения. Поставьте этот участок точно в центр поля зрения;

- осторожным вращением револьверной пластинки поставьте в рабочее положение объектив большого увеличения (х40), поднимите конденсор вверх до упора;

- глядя в окуляры, убедитесь в появлении относительно резкого изображения объекта медленно (в противном случае, медленно поднимайте тубус плавным вращением рукоятки макрометрического винта на себя), и используйте рукоятку микрометрического винта для установления более точной фокусировки (эту рукоятку вращают в обе стороны не более чем на пол-оборота). Если после прохождения фокусного расстояния (около 1 мм) не удалось увидеть изучаемый объект, работу следует повторить, начиная с предыдущего пункта. Необходимо помнить, что выбранный участок препарата может оказаться вне поля зрения, если он недостаточно центрирован. Изучая выбранный участок препарата под большим увеличением, можно при необходимости передвигать его, пользуясь рукояткой для перемещения диска столика;

- закончив изучение препарата, необходимо вращением рукоятки макрометрического винта поднять тубус микроскопа и вращением револьверной пластинки ввернуть объектив малого увеличения. Лишь после этого препарат может быть снят с предметного столика. Ни в коем случае не следует снимать препарат со столика при опущенном объективе большого увеличения (это ведет к порче препарата и линзы объектива).

Масляная иммерсия

Для того чтобы получить более сильное увеличение, чем при работе с обычным объективом большого увеличения (x400), необходимо использовать масляно-иммерсионную линзу. Способность линзы собирать свет в значительной степени усиливается, если между линзой объектива и покровным стеклом поместить жидкость. Жидкость должна иметь тот же коэффициент преломления, что и сам линза. В качестве жидкости обычно используют кедровое и минеральное масло или водный раствор глицерина (см. рис. 2).

Рис. 2. Принцип работы иммерсионного объектива

1. Положите препарат на предметный столик и сфокусируйте изображение так же, как при работе с обычным большим увеличением. Вместо объектива с линзой большого увеличения установите объектив с масляно-иммерсионной линзой.

2. Капните каплю кедрового масла на покровное стекло непосредственно над исследуемым объектом.

3. Снова сфокусируйте изображение теперь уже под малым увеличением, затем поворотом револьверной головки установите объектив с масляно-иммерсионной линзой так, чтобы его кончик касался капли масла.

4. Глядя в микроскоп, очень осторожно сфокусируйте линзу с помощью винта тонкой настройки. Помните, что фокусная плоскость линзы находится всего в 1 мм от поверхности покровного стекла.

5. Кончив работу, сотрите с линзы масло мягкой тряпочкой.

Занятие № 1 Дата______________

ТЕМА: Строение и функции клетки. Эволюция клетки. Клеточная теория.

Цель занятия. Познакомится с особенностями организации и строения различных типов клеток.

Уметь:

· Готовить временные препараты клеток животных и растений;

· Работать с постоянными препаратами при разных увеличениях;

· Зарисовывать микроскопический препарат;

Мотивационная характеристика.Клетка – структурная, функциональная и генетическая единица живых организмов. Знание строения и функций клеток необходимо для изучения в дальнейшем морфологических и медико-биологических дисциплин (анатомия, гистология, физиология, микробиология и др.), а также в научной и практической медицинской деятельности.

Задание для самоподготовки

Знать:

1. Доклеточные формы живого. Гипотезы возникновения клеточной формы жизни.
2. Современное состояние клеточной теории и ее значение для биологии и медицины.
3. Отличительные признаки про- и эукариотических клеток.
4. Клетка - основная форма организации живой материи.

5. Различия в строе­нии и функционировании растительной и животной клетки.

1. Поверхностный аппарат клетки.
2. Мембранные органеллы клетки (строение и функции).
3. Немембранные органеллы клетки (строение и функции).
4. Включения клетки, их классификация и значение.

Практическое задание: