Диагностические, профилактические и лечебные препараты. Тест-системыдля диагностики ВИЧ/СПИД методом ПЦР

Тест-системыдля диагностики ВИЧ/СПИД методом ПЦР.

Тест-системыдля серодиагностики ВИЧ/СПИД методом ИФА.

Тест-системыдля диагностики папилломавирусной инфек­ции методом ПЦР.

Противовирусные препараты:

Ингибиторы обратной транскриптазы:азидотимидин (AZT), ди-дезоксиинозин (DDI), дидезоксицитидин (DDC), невирапин и др.

Ингибиторы протеазы:саквинавир, ритонавир, индинавир, нелфинавир и др.

Препараты для иммунотерапии:интерферон человеческий лейкоцитарный; интерферон рекомбинантный.

Глава 23

ВОЗБУДИТЕЛИ МИКОЗОВ

Заболевания, вызываемые грибами (myces), — микозы, чрезвычайно разнообразны как по биологическим особеннос­тям их возбудителей, так и по патогенезу и клиническим про­явлениям (табл. 23.1). Важную роль в развитии микозов играют иммунодефицитные состояния, изменения экологических фак­торов. Некоторые грибы рассматриваются как возбудители вто­ричных инфекций, например при ВИЧ/СПИД, а также имеют значение при развитии дисбактериоза.

Лабораторная диагностика микозов проводится в микологи­ческих лабораториях или в специализированных микологичес­ких центрах.

Таблица 23.1. Грибы — возбудители микозов человека

Микроорганизмы

Заболевания (локализация поражений)

Возбудители глубоких (системных) микозов

Histoplasma capsulation Гистоплазмоз

Coccidioides immitis Кокцидиомикоз

Blastomyces dermatitidis Бластомикоз (северо-американский)

Cryptococcus neoformans и др. Криптококкоз

Возбудители эпидермомикозов (дерматомикозов)

Trichophyton spp. Микоз гладкой кожи, стоп, паховой

области, волосистой части головы, ногтевых пластинок

Epidermophyton spp. Микоз паховой области, стоп, ногте-

вых пластинок

Microsporum spp. Микоз волосистой части головы и

гладкой кожи

Условно-патогенные грибы и вызываемые ими микозы

Candida spp. Кандидоз кожи и слизистых оболочек

полости рта, мочеполовой системы, дыхательной системы, кишечника и др.

Aspergillus spp. Аспергиллез дыхательной системы,

ушей и др.

Pneumocystis carinii и др.Пневмоцистоз дыхательной системы

(пневмония, развивающаяся на фоне иммунодефицита)

Тема 23.1. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА МИКОЗОВ

▲ План

▲ Программа

1. Биологические свойства возбудителей кандидоза, дер­матомикозов и глубоких микозов; их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемиология вызываемых заболеваний.

2. Микробиологическая диагностика.

3. Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

Демонстрация

1.Candida spp. — мазок из чистой культуры (окраска ген-циановым фиолетовым).

2. Candida spp. — нативный препарат "раздавленная" кап­ля из чистой культуры.

3. Candida spp. в патологическом материале от больного (окраска по методу Грама).

4. Типы филаментации грибов рода Candida на карто­фельном агаре.

5. Определение видовой принадлежности грибов рода Candida.

6. РСК и реакция агглютинации при диагностике висце­рального кандидоза с парными сыворотками.

7. Морфология и культуральные свойства плесневых и других грибов (рост на плотных питательных средах).

8. Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

Задание студентам

1.Указать материал для исследования.

2. Микроскопировать и зарисовать препараты дрожже­подобных грибов рода Candida, приготовленные из чистой культуры и патологического материала.

3. Определить видовую принадлежность грибов рода Candida на основании морфологии клеток и колоний, типа филаментации и биохимических свойств.

4. Оценить результаты РСК для серодиагностики висце­рального кандидоза. Сделать заключение.

5. Дать краткую характеристику демонстрируемым диа­гностическим, профилактическим и лечебным пре­паратам.

Методические указания

• Микробиологическая диагностика кандидоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: налет со слизистых оболочек, кожные чешуйки из очага поражения, мокрота, мо­ча, спинномозговая жидкость, кровь и др.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Микроскопическое исследование.При исследовании пре­паратов используют окраску простыми методами, а также по методам Романовского—Гимзы, Грама и др. Грибы рода Can­dida хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. При необходимости исследуют нативные препараты. В нативных и окрашенных препаратах видны одноклеточные микроорганиз­мы круглой или овальной формы.

Микологическое (культуральное) исследование.Делают посев исследуемого материала на агар Сабуро или другие специаль­ные среды. Посевы инкубируют при 20 и 37 "С. Рост колоний начинается на 2—3-й сутки, и окончательное формирование происходит через 5—6 дней. Идентификацию грибов рода Can­dida проводят на основании морфологии клеток, типа фила­ментации и биохимических свойств (табл. 23.1.1). Важное диа­гностическое значение имеют многократные количественные посевы исследуемого материала. Нарастающее количество ко­лоний в посевах подтверждает диагноз.

Таблица 23.1.1. Таксономические признаки дрожжеподобных грибов родаCandida

Вид	Морфо­логия	Культуральные свойства	Биохимические свойства — ферментация Сахаров
	колонии	преобла­дающий тип фи­ламента-	глю­козы	саха­розы	маль­тозы	лак­тозы
			ции

C.albicans Крупные, Круглые, Мусо- КГ — КГ

круглые, сметано- toruloi-

овальные образные, des края ров­ные

C.tropicalis Оваль- Круглые, Мусо- » КГ » ■ —

ные, сметано- toruloi-

удлинен- образные, des

ные края ров-

ные или зубчатые C.krusei Удлинен- Круглые, Мусо- » — — • —

ные суховатые, toruloi-

неровные des края

Условные обозначения: КГ — образование кислоты и газа.

Во многих случаях возможна идентификация выделенной культуры с указанием только родовой принадлежности (Can­dida spp.).

Экспресс-методы диагностики. Иммунохимические исследования. Метод ИФ и другие серологические реакции применяют для обнаружения антигенов возбудителя в материа­ле.

Серодиагностика.Для обнаружения антител используют ре­акции агглютинации, РСК и др. Серодиагностика имеет ог­раниченное применение: нарастание титра антител в сыво­ротке крови при висцеральном кандидозе подтверждает диа­гноз.

• Микробиологическая диагностика дерматомикозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ чешуйки кожи, воло­сы, соскоб ногтевых пластинок.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Микроскопическое исследование.Для приготовления пре­парата на предметное стекло наносят каплю 10 % раствора

Рис.23.1.1. Дерматофиты в пораженном волосе.

а — Microsporum; б — Tricho­phyton; в — Achorion.

гидроксида натрия или спирта с глицерином, в которую поме­щают 2—3 подозрительных волоса, или несколько кожных чешуек. Препарат (со щелочью) осторожно подогревают над пламенем до появления белого ободка из кристаллов щелочи по периферии капли, не доводя ее до кипения. Затем каплю накрывают покровным стеклом и рассматривают под микро­скопом с объективом 8х и 40х.

При оценке результатов микроскопического исследования и дифференциальной диагностике учитывают следующие при­знаки (рис. 23.1.1).

Microsporum canis идр. (микроспория) — волос в фоллику­лярной части окружен "чехлом" из мозаично расположенных мелких спор гриба. Внутри волоса обнаруживаются фрагменты гриба и споры.

Trichophyton tonsurans (стригущий лишай) — локализация элементов гриба в патологическом материале может быть раз­личной. Споры гриба Trichophyton либо располагаются только внутри пораженного волоса, сплошь заполняя его содержимое (эндотрикс), либо несколькими слоями окружают волос снару­жи в виде чехла (эктотрикс), либо споры и мицелий находятся как внутри, так и снаружи волоса (эндоэктотрикс).

Trichophyton (Achorion) schoenleinii (фавус или парша) — в во­лосе обнаруживают полиморфные грибковые элементы. Наря­ду с тонким мицелием встречается мицелий широкий, состо­ящий из прямоугольных клеток. Часто наблюдаются споры круглой или прямоугольной формы, а также пузырьки воз­духа.

Epidermophyton floccosum (эпидермофития паховая) — эле­менты гриба содержатся в чешуйках кожи, где располагаются в виде толстых септированных ветвящихся нитей мицелия на­ряду со спорами многогранной формы.

Микологическое (культуральное) исследование.Проводят для установления родовой и видовой принадлежности возбудителя путем выделения чистой культуры гриба и изучения его био­логических свойств. Материал предварительно обрабатывают кислотами или антибиотиками. Затем делают посев на сахар­ный питательный агар, сусло-агар, агар Сабуро, овощные сре­ды (см. тему 4.1), куда добавляют антибиотики для задержки роста бактериальной флоры. Посевы инкубируют при 30 °С. В положительных случаях рост наблюдается на 3—5-е сутки в виде разнообразных колоний: гладких, морщинистых, мучнис­тых, пушистых, часто пигментированных. При микроскопии препаратов, приготовленных из культур, хорошо заметен раз­витой, широко ветвящийся септированный мицелий. Органа­ми размножения служат споры, которые могут быть как внут­ренними (эндоспоры), расположенными внутри мицелия, так и наружными (экзоспоры), расположенными на концах или по сторонам нитей мицелия. Специальных органов плодоношения типа асков (сумок) у дерматофитов не обнаружено, что дало основание отнести их к несовершенным грибам — Fungi imper-fecti,

• Микробиологическая диагностика глубоких (системных) микозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: мокрота, моча, пора­женные ткани, биоптаты кожи и лимфатических узлов, спин­номозговая жидкость и др.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Микроскопическое исследование.Обнаружение овальных дрожжевых или других тканевых форм грибов позволяет по­ставить предварительный диагноз. Иммунофлюоресцентный метод является наиболее эффективным способом выявления возбудителя в патологическом материале (см. ниже).

Микологическое исследование.Производят посев материала на среду Сабуро, кровяной агар и другие среды. Посевы инку­бируют в течение нескольких недель при 37 и 20 "С. Выделенные культуры идентифицируют на основании морфологических и

биохимических признаков. Грибы, вызывающие глубокие ми­козы, относятся к группе возбудителей ООИ, представляющих биологическую опасность IV степени (см. главу 11). Необхо­димо помнить, что лабораторная диагностика этих инфекций осуществляется только в специализированных лабораториях.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. При криптококкозе определяют антиген в спинномозговой жидкости и в сыворотке крови (у больных ВИЧ/СПИД) в динамике заболевания.

Молекулярно-биологические исследования. Ис­следуемый материал, полученный из очага инфекции, исполь­зуют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поста­вить предварительный диагноз.

Серодиагностика.Проводят для определения антител, кото­рые обнаруживаются в сыворотке крови через 2—4 нед после начала заболевания. Обычно используют РСК, РНГА, реакции иммунодиффузии, ИЭФ и др.

Кожно-аллергические пробы.Применяют для выявления со­стояния ГЗТ к соответствующим аллергенам.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Кандидозный антиген— взвесь 2-суточной агаровой культу­ры грибов рода Candida в изотоническом растворе хлорида натрия. Применяют для постановки реакции агглютинации для серодиагностики кандидоза.

Кандидозный антигендля РСК— спиртово-водный экстракт из культуры гриба рода Candida. Применяют для постановки РСК и кожно-аллергических проб при кандидозе.

Противогрибковые препараты:полиеновые антибиотики (нистатин, леворин, амфотерицин В), кетоконазол, флуконазол и другие производные имидазола, полиоксины, эхинокандины, 5-фторцитозин, гризеофульвин.