Микробиологическая диагностика лептоспирозов

МАТЕРИАЛДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, спинномозго­вая жидкость, моча.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование(схема 16.1.5). Из иссле­дуемого материала готовят препарат "раздавленная" капля и микроскопируют в темном поле зрения. В положительном слу­чае видны серебристые лептоспиры, представляющие собой подвижные изогнутые нити длиной 6—9 мкм с первичными и вторичными завитками (рис. 16.1.5). Загнутые крючкообразные концы придают лептоспирам S-образную форму. Для живых лептоспир характерны активное поступательное движение (прямолинейное), вращение на месте и перемещение по кругу. Ввиду очень слабой восприимчивости лептоспир к красителям исследуют только нативные препараты.

Бактериоскопия крови (а при менингеальных явлениях и спинномозговой жидкости) позволяет установить диагноз в ранней стадии заболевания (первые 5 дней). Однако отрица­тельные результаты не исключают лептоспирозной природы заболевания. Исследование мочи рационально проводить на­чиная с 10-го дня болезни.

Бактериологическое исследование.Культуры лептоспир вы­деляют на водно-сывороточной илифосфатно-сывороточной среде сдобавлением инактивированной кроличьей сыворотки. Исследуемый материал засевают у постели больного в 3—5 про­бирок, заливают стерильным вазелиновым маслом (для огра­ничения доступа кислорода воздуха) и инкубируют при 28 "С не менее 2 мес. Поскольку при росте лептоспир среда остается прозрачной, через каждые 5—6 дней из среды готовят препара­ты для микроскопии в темном поле. Идентификацию выделен­ной чистой культуры осущест­вляют на основании морфо­логии, подвижности, культу-ральных признаков иантиген­ных свойств. Для серологичес­кой идентификации и сероти-пирования используют РА с на­бором диагностических сыво­роток. Используют также моле-кулярно-биологические методы идентификации.

Биопроба.Внутрибрюшинно
или подкожно заражают мор­
ских свинок, крольчат или зо-
Рис.16.1.5. Лептоспира в темном лотистых хомячков. Животных
поле зрения. держат под наблюдением в те-

чение месяца. При заболевании или гибели животного готовят препараты из крови, мочи, материала, полученного после вскрытия, микроскопируют их в темном поле и делают посевы для выделения чистой культуры лептоспир.

Экспресс-методы диагностики.Биохимические и моле-кулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить пред­варительный диагноз.

Серодиагностика.Антитела в крови пациентов удается обна­ружить с конца 1-й недели болезни. Для их выявления исполь­зуют реакцию агглютинации-лизиса с живыми эталонными куль­турами лептоспир разных серогрупп и сероваров. Учет резуль­татов реакции проводят методом термопольной микроскопии в препаратах "раздавленная" капля в темном поле. В положи­тельном случае отмечают агглютинацию и лизис лептоспир. При этом в первых разведениях сыворотки наблюдаются пол­ное растворение лептоспир, частичный лизис или зернистое набухание, в последующих разведениях — агглютинация леп­тоспир и появление агломератов в виде паучков. Диагностичес­кий титр реакции 1:100. Максимальный титр антител (1:1000— 1:10 000 и выше) наблюдается на 15—30-й день заболевания. Ввиду того что у части переболевших антитела в высоких титрах сохраняются в течение многих лет, диагностическое значение имеет нарастание титра антител в парных сыворотках.

• Микробиологическая диагностика сапа

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гной из язвенных поражений, абсцессов, отделяемое из носа.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование.Из исследуемого мате­риала готовят мазки и окрашивают по методу Грама. В мазках обнаруживаются мелкие (2—4 х 0,5—1 мкм) грамотрицатель-ные палочки. Метод имеет ориентировочное значение.

Бактериологическое исследование.Burkholderia mallei культи­вируют на простых питательных средах. Они образуют мелкие гладкие колонии, имеющие кремовую окраску, которые появ­ляются на 2—3-й день. Чистую культуру возбудителя иденти­фицируют по морфологии микробных клеток, подвижности (B.mallei неподвижны), тинкториальным, культуральным и биохимическим признакам.

Экспресс-методы диагностики.Биохимические и моле-кулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае

обнаружения соответствующих молекул можно поставить пред­варительный диагноз.

Серодиагностика.Для обнаружения антител к возбудителю используют реакции агглютинации, РНГА, РСК.

Кожно-аллергическая проба.Диагностическое значение име­ет постановка кожно-аллергической пробы с маллеином (ал­лергеном, приготовленным из B.mallei).

• Микробиологическая диагностика листериозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, смывы из зева, спинномозговая жидкость, околоплодные воды, плацента.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Вмазках из исследуемо­го материала, окрашенных по методу Грама, обнаруживаются мелкие короткие (0,5—2x0,4—0,5 мкм) грамположительные па­лочки. Метод имеет ориентировочное значение.

Бактериологическое исследование.Исследуемый материал за­севают на богатые питательные среды (кровяной агар, сердеч­но-мозговой бульон и др.), применяют также селективные сре­ды с высоким содержанием NaCl, антибиотиками (полимик-син, цефтазидим) и другими селектирующими агентами. По­севы инкубируют 5—7 дней при 35 °С. На кровяном агаре характерен р-гемолиз. Идентификацию осуществляют по мор­фологии микробных клеток, культуральным и биохимическим признакам. Для видовой и внутривидовой идентификации осу­ществляют серотипирование (по жгутиковому антигену и со­матическому антигену клеточной стенки) и фаготипирование.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования.Иммуно­химические исследования. Для быстрого обнаружения антигенов возбудителя в мазках из исследуемого материала используют метод прямой ИФ.

Биохимические имолекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностикамало информативна и практически не при­меняется.