Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования

Иммунохимические исследования. При отдельных нозологических формах стрептококковой инфекции устанавли­вают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК, реакции преципитации и др.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика.Проводят при подозрении на ревматизм. Для подтверждения диагноза ревматизма определяют антитела к О-стрептолизину. Реакция основана на нейтрализации (подавле­нии) антителами, содержащимися в сыворотке крови больного, способности О-стрептолизина вызывать гемолиз. Реакцию ставят со стандартным сухим О-стрептолизином (табл. 12.1.3).

Для постановки реакции исследуемую сыворотку прогрева­ют при 56 °С в течение 30 мин и разводят фосфатным буфером

1:50, 1:250, 1:1000. Диагностический препарат О-стрептолизина также разводят буфером и применяют в количестве 0,3 мл, в котором содержится 1 рабочая доза О-стрептолизина. Рабочая доза — количество О-стрептолизина, которое почти полностью нейтрализуется половиной международной единицы анти-О-стрептолизина стандарта ГИСК. О-стрептолизин в рабочей дозе должен вызывать полный лизис 0,2 мл 5 % взвеси эрит­роцитов. Разведенную сыворотку и другие ингредиенты разли­вают по пробиркам так, как указано в табл. 12.1.3, и инкуби­руют. После инкубации отмечают последнюю пробирку, в ко­торой сыворотка еще нейтрализует рабочую дозу О-стрептоли­зина (гемолиз отсутствует). Титр сыворотки выражают числом единиц анти-О-стрептолизина в 1 мл (АЕ St-О в 1 мл). В табл. 12.1.3 приведено число АЕ St-О в1 мл сыворотки при нейтра­лизации О-стрептолизина различными разведениями сыворот­ки. Титр анти-О-стрептолизина до 250 АЕ St-О обнаруживается у практически здоровых людей. При ревматизме с первых дней болезни антитела к О-стрептолизину выявляются в вы­соких титрах — 500 АЕ St-О и выше.

• Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных грамотрицательными аэробными бактериями

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование.Из исследуемого мате­риала (гной, раневое отделяемое, участки ожоговой ткани и др.) готовят мазки, окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. Обнаружение в мазках грамотрицательных бактерий позволяет сделать предварительное заключение.

Бактериологическое исследование.Для выделения культуры Pseudomonas aeruginosa исследуемый материал засевают в чашки Петри на основные (МПА) или селективные питательные среды (агар, содержащий цитилпиридиний хлорид, который угнетает рост сопутствующей микрофлоры — ЦПХ-агар). По­севы инкубируют при 37 °С в течение суток. P.aeruginosa обра­зуют круглые плоские слизистые колонии, окрашивая среду характерным сине-зеленым пигментом. При бактериоскопии темнопольным методом нативных препаратов, приготовленных из колоний, в "раздавленной" или "висячей" капле обнаружи­вают подвижные и слегка изогнутые палочки; в мазках, окра­шенных по методу Грама, — грамотрицательные палочки. Чис­тые культуры P.aeruginosa идентифицируют по биохимическим признакам и образованию пигмента.

Для эпидемиологического анализа госпитальных инфекций определяют серовары в реакции агглютинации, пиоциновары и фаговары.

Для выделения энтеробактерий исследуемый материал засе-

вают на одну из дифференциально-диагностических сред, на­пример на среду Эндо (см. тему 3.1). Для выделения бактерий рода Proteus используют метод Шукевича (см. тему 3.1).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования.Иммуно­химические исследования. Патогенные штаммы P.aerugi­nosa выделяют различные растворимые белковые (экзотокси­ны и экзоферменты) и небелковые (экстрацеллюлярная слизь) антигены, которые могут быть обнаружены вматериале от пациента (из очага, вкрови или моче) с помощью чувстви­тельных серологических реакций (ИФА и др.).

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

• Микробиологическая диагностика сепсиса

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь; при септико-пиемиях исследуют также материал из первичных и вторичных местных очагов инфекции. Кровь берут впериод подъема температуры до начала антибиотикотерапии из локтевой вены вколичестве не менее 10 мл у взрослых и 5 мл у детей, так как микроорганизмы находятся вкрови в сравнительно не­больших количествах. Посевы делают у постели больного в колбы с 50—100 мл питательной среды. Сравнительно большие объемы питательной среды (в 10 раз превышающие количество крови) необходимы для устранения бактерицидного действия сывороточных белков.

В случае необходимости транспортировки крови к ней до­бавляют антикоагулянты: цитрат или оксалат натрия, декстран сульфат, гепарин. В качестве добавки к среде для выделения бактерий из крови используют полианетолсульфонат натрия, являющийся антикоагулянтом и одновременно угнетающий бактерицидную активность сыворотки, фагоцитоз, инактиви-рующий комплемент и нейтрализующий лизоцим.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование.Является ведущим при ла­бораторной диагностике сепсиса. Посевы производят на жид­кие среды обогащения: сахарный бульон и др.; при подозрении на анаэробную флору — на тиогликолевую среду, среду Китта— Тароцци или другие элективные среды для анаэробов (см. тему 3.1) и инкубируют их при 37 °С в течение 10 дней при еже­дневном контроле. В случае отсутствия роста микроорганизмов дают отрицательный ответ. При наличии роста делают мазки, которые окрашивают по методу Грама. Выделенную чистую

культуру микроорганизмов идентифицируют и определяют ее чувствительность к антибиотикам.

При оценке результатов необходимо исходить из того, что сепсис является тяжелым общим инфекционным заболеванием, развивающимся в условиях резкого угнетения всех основных механизмов иммунитета. Возбудителями сепсиса являются раз­личные патогенные и условно-патогенные микроорганизмы. Однократный посев крови- при сепсисе не всегда приводит к выделению культуры. Более информативным является трех­кратный посев крови с суточным интервалом. На фоне анти­биотикотерапии кровь у больных для посева следует брать 5—6 раз.