Окраска зерен волютина по методу Нейссера

1.На фиксированный мазок нанести ацетат синьки Нейс­сера на 2—3 мин.

2. Добавить раствор Люголя на 10—30 с.

3. Промыть препарат водой.

4. Докрасить водным раствором везувина или хризоиди-на в течение 0,5—1 мин.

5. Промыть препарат водой, высушить и микроскопиро­вать.

Зерна волютина представляют собой включения полифос­фатов, имеющие в отличие от цитоплазмы щелочную реакцию,

и поэтому избирательно воспринимают ацетат синьки, окра­шиваясь в темно-синий цвет. Цитоплазма клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желтый цвет (рис. 2.2.4; на вклейке). Обнаружение макрокапсул по методу Бурри—Гинса

1. Смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши и при помощи стекла со шлифованым краем сделать мазок таким же образом, как мазок из крови, высушить и фиксировать.

2. На мазок нанести водный раствор фуксина на 1—2 мин.

3. Промыть водой, высушить на воздухе и микроскопиро-вать.

Бактерии окрашиваются в красный цвет. Капсулы не окра­шиваются анилиновыми красителями, остаются прозрачными и контрастно выделяются на черно-розовом фоне (рис. 2.2.5; на вклейке).

Рис.2.3.1. Актиномицеты.

Рис.2.3.2. Спирохеты, а — трепонемы; б — боррелии; в лептоспиры.

Тема 2.3. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

И УЛЬТРАСТРУКТУРА АКТИНОМИЦЕТОВ И СПИРОХЕТ

Введение. Актиномицеты (Actinomyces) относятся к порядку Actinomycetales, включающему семейства Actinomycetaceae, Strep-tomycetaceae и Nocardiaceae. Актиномицеты имеют нитевид­ную форму. Они способны к ветвлению и могут образовывать структуры, напоминающие мицелий одноклеточных грибов (рис. 2.3.1). Встречаются также палочко- и кокковидные фор­мы. Нити имеют длину 100—600 мкм и толщину 0,2—1,2 мкм. Актиномицеты неподвижны, лишены выраженной капсулы, жгутиков и пилей. Как и другие бактерии, актиномицеты ок­рашиваются простыми методами или по методу Грама. Акти­номицеты относятся к фирмикутным бактериям и окрашива­ются грамположительно. В отличие от других бактерий они способны размножаться не только поперечным делением, но и спорами.

Спирохеты относятся к порядку Spirochaetales. Они представ­ляют собой извитые подвижные бактерии. Патогенные спиро­хеты входят в семейство Spirochaetaceae и принадлежат к трем родам: Borrelia, Treponema и Leptospira. Их основные морфоло­гические признаки представлены в табл. 2.3.1.

Клетка спирохеты имеет форму нити, закрученной в виде спирали. Клеточная стенка обладает строением, типичным для грациликутных бактерий. В периплазматическом пространстве располагаются сократительные фибриллы — эндофлагеллы, которые прикрепляются к полюсам клетки с обоих концов, оплетают тело бактерии по направлению к центру клетки, где они переплетаются между собой. Фибриллы обладают сокра-

тительной способностью и определяют спиральную форму и подвижность спирохет.

Патогенные спирохеты имеют длину 3—20 мкм и толщину 0,1—0,5 мкм. Представители отдельных родов различаются по размерам, числу и характеру завитков (см. рис. 2.3.2, табл. 2.3.1). Спирохеты плохо окрашиваются по методу Грама. Боррелии в отличие от трепонем и лептоспир окрашиваются анилиновыми красителями (фуксином). Морфологию трепонем и лептос­пир изучают в нативных препаратах ("раздавленная" или "висячая" капля) с помощью темнопольного или фазово-контрастного методов, а также в мазках, окрашенных по методу Романовского—Гимзы или другими специальными методами.

Таблица 2.3.1. Морфологические признаки спирохет

Род

Характер движения

Число и характер завитков

Окраска по методу

Романовского—

Гимзы

Сине-фиолетовая

Borrelia

3—10, крупные, неравномерные

Толчкообразное, сгибательно-по-ступательное

Бледно-розовая

Treponema 8—12, мелкие, равномерные

Плавное, сгиба-тельно-поступа-тельное

Leptospira

Многочисленные первичные завит­ки, вторичные завитки в виде буквы S

Розово-сиренева­тая

Очень активное, вращательно-по-ступательное

А План

Программа

1. Определение формы актиномицетов в препарате, ок­рашенном по методу Грама.

2. Методы изучения морфологии спирохет с дифферен­циацией по морфологическим признакам.

3. Определение формы и подвижности спирохет в при­жизненных препаратах.

4. Исследование спирохет в окрашенных препаратах.

5. Изучение электронограмм спирохет и спирилл.

Демонстрация

1.Препарат из чистой культуры актиномицетов. Окраска по методу Грама.

2. Подвижность лептоспир (темнопольная микроскопия).

3. Боррелии в препарате толстой капли крови (окраска по методу Романовского—Гимзы).

Задание студентам

1.Изучить морфологию актиномицетов в препарате. За­рисовать.

2. Изучить морфологию лептоспир с помощью метода темнопольной микроскопии. Зарисовать.

3. Изучить морфологию боррелии в препарате толстой капли крови. Зарисовать.

Методические указания

Морфологию спирохет изучают в нативных препаратах ив мазках, окрашенных по методу Романовского—Гимзы. Пре­параты исследуют спомощью темнопольной или фазово-кон-трастной микроскопии, наблюдая за активным и характерным движением спирохет и особенностями их формы.

Приготовление мазка из крови. На чистое обезжи­ренное стекло ближе к одному из его концов поместить каплю крови. Другое предметное стекло со шлифованым краем прижать под углом 45° к капле крови, а затем скользящим движением передвинуть его к другому концу нижнего стекла. При этом кровь распределится по предметному стеклу тонким слоем. Высушить препарат на воздухе, фиксировать в жидком фиксаторе (метило­вый спирт или смесь этилового спирта и эфира).

Окраска препарата по методу Романовского — Гимзы (смесь метиленового синего, эозина и азура). На мазок нанести рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды) на 10—20 мин. Затем препарат про­мыть водой и высушить на воздухе.

Боррелии — возбудители возвратного тифа (B.recurrentis) окра­шиваются в фиолетовый, эритроциты крови — в розово-корич­невый, ядра лейкоцитов — в фиолетовый цвет. Трепонемы ок­рашиваются в бледно-розовый, лептоспиры — в розово-сире­неватый цвет.