РАБОТА № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛИПОПРОТЕИНОВ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ (ЛПНП) В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. ЛПНП (β-липопротеины) содержат в своем составе 40% холестерина, транспортируют этот стероид в сыворотке крови. Количество ЛПНП изменяется при нарушении метаболизма холестерина в организме.
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА. ЛПНП образуют с гепарином комплекс, который при добавлении хлорида кальция выпадает в осадок. Степень помутнения раствора пропорциональна содержанию ЛПНП в сыворотке крови и определяется нефелометрически.
ХОД РАБОТЫ: взять одну пробирку.
 ПРОБА отмерить | ОПЫТ |
| Раствор СаСl2 0,27 % Сыворотка крови Гепарин, 1 % | 2 мл 0,2 мл Перемешать. ФЭК, λ = 630 нм, кювета 5 мм, определить Е1 против Н2О. Перелить раствор в пробирку. 0,04 мл Перемешать. Инкубация ровно 4 минуты Определить в тех же условиях Е2 против Н2О. |
| РЕЗУЛЬТАТ: Е1 = ; Е2 = . РАСЧЕТ: концентрация ЛПНП = (Е2 – Е1)·100 = г/л. КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ. Нормальное содержание ЛПНП в сыворотке крови: 2 - 4 г/л. Увеличение концентрации ЛПНП наблюдается при атеросклерозе, сахарном диабете, гипотиреозе, механической желтухе, острых гепатитах, хронических заболеваниях печени, ожирении, гиперкортицизме, гиперлипопротеинемии II типа. |
ВЫВОД:
Дата______________
ЗАНЯТИЕ № 27
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА
ПО ТЕМЕ «ОБМЕН И ФУНКЦИИ ЛИПИДОВ»
Задания для самостоятельной работы:
1. Составить метаболическую карту липидного обмена.
2. На карте отметить:
2.1. Диагностически значимые субстраты (общие липиды, три-ацилглицеролы, холестерол, липопротеины, кетоновые тела).
2.2. Ферменты, исследуемые с целью диагностики (липаза, липопротеинлипаза).
2.3. Регуляторные ферменты β-окисления, синтеза жирных
кислот и холестерола, липолиза.
2.4. Витаминзависимые ферменты.
3. Решение и обсуждение ситуационных задач.
Дата: _______________
ЗАНЯТИЕ № 29
РАБОТА № 26. АКТИВНОСТЬ АЛАНИНАМИНО-ТРАНСФЕРАЗЫ (АлАТ) В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Аминотрансферазы - ферменты, катализирующие перенос аминогруппы с аминокислот на кетокислоты. В качестве кофермента ферменты содержат производное витамина В6 - пиридоксальфосфат и пиридоксаминфосфат. Активность аминотрансфераз отражает состояние аминокислотного обмена в печени, сердечной мышце, почках, скелетной мускулатуре и других органах.
ПРИНЦИП МЕТОДА: аланинаминотрансфераза катализирует реакцию:
| |||
| |||
аланин + 2-кетоглутаровая + пировиноградная
кислота кислота
При добавлении кислого 2,4-динитрофенилгидразина ферментативный процесс останавливается и образуется динитрофенилгидразон пирувата:
|
Это соединение в щелочной среде дает коричнево-красное окрашивание. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству образовавшейся пировиноградной кислоты. По количеству пировиноградной кислоты судят об активности фермента (метод Райтмана-Френкеля).
ХОД РАБОТЫ: взять две пробирки.
 ПРОБА отмерить | О П Ы Т | КОНТРОЛЬ | ||
| СУБСТРАТ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЙ РАСТВОР СЫВОРОТКА КРОВИ | 0,25 мл -- 0,05 мл | 0,25 мл 0,05 мл -- | ||
| Инкубируют в термостате 30 минут при 37оС | ||||
| 2,4-Динитрофенилгидразин | 0,25 мл | 0,25 мл | ||
Перемешать, оставить на 20 минут при комнатной температуре.
| NaOH | 2,5 мл | 2,5 мл |
Перемешать и через 10 минут измерить экстинкцию опыта на колориметре против контрольного раствора.
Длина волны 500-530 нм; кювета 5 мм.
РЕЗУЛЬТАТ: D Е = ;
По калибровочному графику активность аланинаминотрансферазы составляет ………….. ммоль/ч×л.
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
Активность аланинаминотрансферазы в сыворотке крови у взрослых в норме: 0,1 - 0,68 ммоль/ч×л, у новорожденных 0,06 – 0,27 ммоль/ч×л, у детей 2-14 лет 0,09 – 0,64 ммоль/ч×л.
Повышение активности фермента наблюдается при некрозе клеток печени любой этиологии, вирусных и хронических гепатитах, механической желтухе, травмах мышц, миозите, миокардите, инфаркте миокарда, дистрофии, миопатии.
ВЫВОД:
Дата: _______________
ЗАНЯТИЕ № 30