Иммуноблотинг на антитела к белкам вируса гепатита С в сыворотке
Антитела к вирусу гепатита С в норме отсутствуют. Метод иммуноферментного анализа, применяемый для определения антител к ВГС, является скрининговым. В случае получения положительного результата для подтверждения его специфичности используют метод иммуноблотинга Western-blot - встречную преципитацию в геле антител в сыворотке крови больного с различными вирусными белками, подвергнутыми разделению по молекулярной массе с помощью электрофореза и нанесенными на нитроцеллюлозу. Исследование считается положительным, если выявляются антитела к белкам интенсивностью +1 к 2 или более антителам ВГС. Специфичными для ВГС являются антитела к белкам - Core, NS3-1, NS3-2, NS1, NS5.
Иммуноблотинг на вирус гепатита С служит подтверждающим тестом специфичности метода ИФА.
Анализ РНК HCV (определение РНК вируса гепатита С), часто называемый анализ ПЦР гепатита С— это исследование крови, позволяющее выявить непосредственно генетический материал вируса гепатита (каждый вирус — это одна частица РНК). Этот тест чаще всего выполняется методом ПЦР, — отсюда и название ПЦР гепатита С. Существуют качественный и количественный анализы на РНК ВГС.
Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени.Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл.
Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы намиллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 106 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 105 МЕ/мл = 2.2* 106 копий/мл.
Важно знать, что не существует прямой связи между концентрацией вируса в крови и тяжестью гепатита С.
На что же влияет вирусная нагрузка?
Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основеинтерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.
Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?
Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *103 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*104 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*107 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.
Как часто нужно делать количественный тест?
Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.
Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».
Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).
Лабораторные методы исследования алкогольного гепатита.
· Общий анализ крови выявляет снижение количества эритроцитов (красных клеток крови) с развитием анемии (снижения уровня гемоглобина – особого вещества эритроцитов, переносящего кислород), снижение количества тромбоцитов (кровяных пластинок, склеивание которых обеспечивает начальный этап свертывания крови), реже – всех клеток крови. Может выявляться лейкоцитоз (увеличение количества лейкоцитов – белых клеток крови), преимущественно за счет их особой разновидности – нейтрофилов.
· Биохимический анализ крови (для контроля функции печени, поджелудочной железы, содержания важных микроэлементов (калий, кальций, натрий) в крови).
· Биохимические маркеры (показатели) фиброза печени – PGA-индекс:
1. протромбиновый индекс — показатель свертываемости крови (Р);
2. гамма-глутамилтранспептидаза — биологически активное вещество, в норме участвующее в молекулярных реакциях в ткани печени (G);
3. алипопротеин А1 — белок плазмы (жидкой части) крови, отвечающих за транспортировку « хорошего» холестерина (жироподобного вещества, препятствующего сужению просвета сосудов) в организме — (А);
4. значения PGA колеблются от 0 до 12. Если PGA<2 – вероятность цирроза (диффузного (обширного) заболевания печени, при котором происходит гибель ткани печени и образование крупных или мелких узлов из рубцовой ткани, которые изменяют структуру печени) 0%, если PGA>9 – вероятность цирроза 86%.
· Повышение в крови пролина и оксипролина (аминокислот – составных элементов белка) является отличительной особенностью алкогольного фиброза печени (разрастания рубцовой ткани в печени без изменения ее структуры).
· Коагулограмма (анализ свертывающей и противосвертывающей систем крови) выявляет замедление образования сгустков крови за счет уменьшения количества факторов свертывания, которые образуются в печени.
· Липидограмма – исследование жироподобных веществ крови. При алкогольной болезни печени в крови повышается уровень триглицеридов (особых жироподобных веществ, основного источника энергии для клеток).
· Альфа-фетопротеин – вещество, повышающееся в крови при раке печени (злокачественной опухоли – опухоли, растущей с повреждением окружающих тканей). Рак печени может развиваться как осложнение алкогольного гепатита при его длительном течении.
· Лабораторные признаки длительного приема алкоголя. Повышение:
1. активности в крови гамма-глутамилтранспептидазы;
2. содержания в крови иммуноглобулинов А (Ig A – особый вид антител – белков, вырабатываемых для борьбы с чужеродными агентами);
3. среднего объема эритроцитов;
4. в крови активности аспартат-аминотрансферазы (АсАТ, или АСТ), превышающее активность аланин-аминотрансферазы (АлАТ, или АЛТ). АСТ и АЛТ – специфические биологически активные вещества, участвующие в обмене веществ и нормальной деятельности печени;
5. содержания в крови трансферрина (белка, переносящего железо).
· Определение маркеров (специфических показателей) вирусных гепатитов (воспалительных заболеваний печени, вызываемых особыми вирусами).
· Общий анализ мочи. Позволяет оценить состояние почек и мочевыводящих путей
· Копрограмма – анализ кала (можно обнаружить непереваренные фрагменты пищи и жира, грубые пищевые волокна).
· Инструментальные методы исследования.
· Ультразвуковое исследование (УЗИ) органов брюшной полости позволяет оценить размеры и структуру печени и селезенки.
· Эзофагогастродуоденоскопия (ЭГДС) — диагностическая процедура, во время которой врач осматривает и оценивает состояние внутренней поверхности пищевода (для выявления патологически (ненормально) расширенных вен), желудка и двенадцатиперстной кишки при помощи специально оптического инструмента (эндоскопа).
· Пункционная биопсия печени (взятие кусочка печени для исследования) позволяет оценить структуру печени и установить диагноз
· Спиральная компьютерная томография (КТ) – метод, основанный на проведении серии рентгеновских снимков на разной глубине – позволяет получить точное изображение исследуемых органов (печени и селезенки).
· Магнитно-резонансная томография (МРТ) – метод, основанный на выстраивании цепочек воды при воздействии на тело человека сильных магнитов – позволяет получить точное изображение исследуемых органов (печени и селезенки).
· Эластография – исследование ткани печени, выполняемое с помощью специального аппарата, для определения степени фиброза печени. В процессе эластографии выполняется компрессия (сжатие) исследуемых тканей при помощи ультразвука. Скорость распространения упругих волн зависит от эластичности ткани, то есть от содержания в ней соединительной (рубцовой) ткани. Эластография является альтернативой биопсии печени.
· Ретроградная холангиография — рентгенологический метод исследования желчевыводящей системы, при котором контраст (красящее вещество, делающее участки, где оно находится, видимыми на рентгене) вводится в Фатеров сосок (отверстие, через которое в двенадцатиперстную кишку поступает желчь и панкреатический сок). Позволяет выявить причины ухудшения оттока желчи. Проводится только пациентам с выраженным синдромом холестаза (недостаточного поступления желчи в двенадцатиперстную кишку – начальный отдел тонкого кишечника).
Возможны также консультации терапевта, гастроэнтеролога, гепатолога, хирурга,психиатра, нарколога.
На всякий*
Общий анализ крови:
| Эритроциты | 3,2 – 4,3*1012/л | 3,2 – 3,4*1012/л |
| СОЭ (скорость оседания эритроцитов) | 1 – 15 мм/ч | 15 – 25 мм/ч |
| Ретикулоциты | 0,2 – 1,2% | 3 – 3,8% |
| Гемоглобин | 120 – 140 г/л | 90 – 110 г/л |
| Лейкоциты | 4 – 9*109/л | 4 – 6*109/л |
| Тромбоциты | 180 – 400*109/л | 170 – 180*109/л |
Общий анализ мочи:
| Показатель | Нормальное значение | Изменение при алкогольном гепатите |
| Удельный вес | 1012 - 1024 | 1010 - 1020 |
| Реакция рН | Слабокислая | Щелочная |
| Белок | нет | 0,03 – 1 г/л |
| Эпителий | 1 – 3 в поле зрения | 10 – 12 в поле зрения |
| Лейкоциты | 1 – 2 в поле зрения | 5 – 10 в поле зрения |
| Эритроциты | Нет | 3 – 5 в поле зрения |
Биохимическое исследование крови:
| Показатель | Нормальное значение | Изменения при алкогольном гепатите |
| Общий белок | 68 – 85 г/л | 60 – 75 г/л |
| Альбумин | 40 – 50 г/л | 30 – 40 г/л |
| Глюкоза | 3,3 – 5,5 ммоль/л | 3,2 – 4,4 ммоль/л |
| Мочевина | 3,3 - 6,6 ммоль/л | 5,9 – 6,0 ммоль/л |
| Креатинин | 0,044 - 0,177 ммоль/л | 0,044 - 0,177 ммоль/л |
| Фибриноген | 2 – 4 г/л | 2 – 3 г/л |
| Лактатдегидрогеназа | 0,8 - 4,0 ммоль/(ч·л) | 0,8 - 4,0 ммоль/(ч·л) |
Печеночные пробы:
| Показатель | Нормальное значение | Изменения при алкогольном гепатите |
| Общий билирубин | 8,6 – 20,5 мкмоль/л | 30,5 – 40,0 мкм/л и выше |
| Прямой билирубин | 8,6 мкмоль/л | 6,0 – 8,0 мкмоль/л |
| АЛТ (аланинаминотрансфераза) | 5 – 30 МЕ/л | 30 – 40 МЕ/л |
| АСТ (аспартатаминотрансфераза) | 7 – 40 МЕ/л | 50 – 60 МЕ/л |
| Щелочная фосфатаза | 50 – 120 МЕ/л | 130 – 180 МЕ/л |
| ЛДГ (лактатдегидрогеназа) | 0,8 – 4,0 пирувита/мл-ч | 5,0 – 7,0 пирувата/мл-ч |
| Тимоловая проба | 1 – 4 ед. | 4 ед. и более |
Кагулограмма (свертываемость крови):
| Показатель | Нормальное значение | Изменения при алкогольном гепатите |
| Протромбиновый индекс | 60 – 100% | 40 – 60% |
| Адгезия тромбоцитов | 20 – 50% | 20 – 40 % |
| АЧТВ (активное частичное тромбопластиновое время) | 30 – 40 секунд | 30 секунд |