Определение группы крови и резус-факторной принадлежности методом цоликлонов.

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения групп крови системы АВ0 человека, цоликлон анти-D – для определения резус-принадлежности. Цоликлоны являются антителами, полученными в результате слияния мышиных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы, не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов. Цоликлоны не являются продуктами клеток человека и поэтому исключена контаминация препаратов вирусами гепатита и СПИД (синдрома приобретенного иммунодефицита). Авидность, т.е. время наступления реакции агглютинации и ее выраженность у цоликлонов анти-А и анти-В выше, чем у изогемагглютинирующих АВ0-сывороток, особенно в случае слабо выраженных антигенов эритроцитов.

Rh-фактор – один из наиболее распространенных агглютиногенов эритроцитов. Он содержится в мембране эритроцитов у 85% людей (кровь резус-положительная, Rh⁺), у 15% данный агглютиноген отсутствует (кровь резус-отрицательная, Rh^-). Его содержание не зависит от наличия других агглютиногенов эритроцитов. Rh-фактор не имеет в плазме врожденных агглютининов, однако может являться причиной развития резус-конфликта при беременности и несовместимости крови при повторном ее переливании.

Оснащение:кровь, планшетка, стеклянная палочка, пипетки, физиологический раствор, спирт, цоликлоны анти-А, анти-В и анти-D, ватные шарики.

Ход работы: На планшетку или пластинку наносят цоликлоны анти-А и анти-В и анти-D по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: «анти-А» или «анти-В» и «анти-D». Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше капли антител (0,01 мл). В случае определения группы крови, взятой из пальца или взятой без консерванта, необходимо обеспечить достаточно большое количество эритроцитов, т.е. брать первые капли из пальца (без сильного выдавливания) или свободные эритроциты из осадка свернувшейся крови (без избытка сыворотки). При определении группы крови на планшете антитела и кровь смешивают, покачивая планшет; при определении на пластинке – стеклянной палочкой, которую промывают и досуха вытирают перед размешиванием каждой капли. Наблюдение за ходом реакции с цоликлонами проводят при легком покачивании пластинки или планшета в течение не более 2,5 мин. Результат реакции в каждой капле может положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся и образующих крупные хлопья вплоть до одного большого агглютината. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. Агглютинация с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек. Наблюдение следует вести 2,5 мин, ввиду возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов.

Рекомендации к оформлению работы:зарисуйте полученную картину, установите группу крови и резус-фактор исследуемой крови.

Результаты работы:

Цоликлоны анти-А анти-В анти-D