Микробиологический контроль воды
1.1. Определение микробного числа.Сущность метода заключается в глубинном посеве определенного объема исследуемой воды или ее разведений в чашки Петри со средой РПА и последующим подсчете колоний, выросших после инкубирования посевов.
Ход определения
1. Разлить стерильной пипеткой в стерильные пробирки по 9 см3 физраствора в пламени спиртовки.
2. Промаркировать пробирки с приготовленным стерильным физраствором и стерильные чашки Петри.
3. Приготовить два десятикратных разведения исследуемой пробы воды. При приготовлении каждого разведения следует использовать новую стерильную пипетку
4. Посеять в две параллельные чашки Петри по 1 см3 пробы воды и ее разведений. Посев следует начинать с наибольшего разведения, тогда можно использовать одну пипетку.
5. В пламени спиртовки внести среду РПА в чашки Петри с посевами. Предварительно РПА следует растопить на водяной бане и охладить до температуры не выше 450С. При внесении РПА крышки чашек следует приоткрывать в сторону огня. После внесения РПА крышки следует закрыть, а агар перемешать с посевным материалом круговыми движениями чашки по поверхности стола. Чашки оставить на поверхности стола до полного застывания агара.
6. Инкубировать посевы при 370С в течение суток.
7. На следующем занятии произвести подсчет колоний, выросших на РПА в чашках Петри. Результаты оформить в виде таблицы:
Таблица 1. Определение микробного числа воды
| № пробы | Количество посеянной воды, см3, a | Количество колоний на чашке с РПА, n | Микробное число, КОЕ./см3, N= n/a | Нормативный показатель, КОЕ./см3 | Заключение |
1. 2. Определение БГКП титрационным методом.Сущность метода заключается в посеве определенных объемов анализируемой воды в среду накопления, подращивания посевов при 370С в течение 24 ч с последующим пересевом на плотную питательную среду Эндо и дифференциацией выросших бактерий.
Ход определения
1. Разлить в 3 стерильные пробирки по 4-5 см3 ЛПС, в 3 стерильные большие пробирки по 7-8 см3 ЛПС двойной концентрации, в 3 флакона – по 50 см3 (точно) ЛПС двойной концентрации. Промаркировать пробирки и флаконы.
2. Посеять стерильными пипетками в каждую из 3-х пробирок с ЛПС по 1 см3 пробы воды, в каждую из 3-х больших пробирок с ЛПС двойной концентрации - по 10 см3 пробы воды, во флаконы с ЛПС двойной концентрации - по 100 см3 пробы воды.
3. Инкубировать посевы при 370С в течение 24 ч.
4. На следующем занятии учесть результаты роста в ЛПС, отмечая наличие кислоты (пожелтение среды) и газа.
5. Приготовить среду Эндо, разлить ее в чашки Петри, после застывания агара чашки подсушить в термостате.
6. Пересеять материал бактериологической петлей штриховым методом из пробирок и флаконов (с наличием роста в ЛПС) на среду Эндо.
7. Инкубировать посевы при 370С в течение 24 ч.
8. На следующем занятии учесть результаты роста на среде Эндо, отмечая цвет колоний и наличие металлического блеска.
9. Произвести определение оксидазной активности. Для этого на предметное стекло помещают фильтровальную бумагу, смачивают ее реактивом для определения оксидазной активности. Затем бактериологической петлей снимают изолированные колонии, выросшие на среде Эндо, и наносят их в виде штриха на поверхность смоченной бумаги. Если в течение 1 мин не появляется синее окрашивание, то бактерии оксидазной активностью не обладают.
10. Изготовить мазки, окрасить их по Граму, микроскопировать с иммерсией.
11. Полученные результаты оформить в виде таблицы.
Таблица 2. Определение БГКП в воде
| № пробы. | Исследуемое количество воды, см3 | Рост на ЛПС | Рост на среде Эндо | Оксидаза | Окраска по Граму | Коли- индекс | Коли- титр | Заключение |