Необходимый уровень знаний
4.1. Из курса анатомии: раздел «Костный мозг».
4.2. Из предыдущих занятий по гистологии: учебник гистологии/ под ред. Ю.И.Афанасьева и др.,2013. - «Кровь и лимфа» - гл.8, «Ретикулярная ткань» –гл. 9.
Новый материал
5.1. Общая характеристика органов кроветворения (классификация, источники развития, строение, функции)
5.2. Развитие, строение и функции красного костного мозга
5.7. Эритроцитарный, гранулоцитарный, моноцитарный, тромбоцитарный, лимфоцитарный диффероны (ряды кроветворения)
Иметь представление:
5.8. Взаимоотношения кроветворных дифферонов и стромы
5.9. Факторы, влияющие на гемоцитопоэз.
Учебник гистологии/ под ред. Ю.И.Афанасьева и др.,2013.
«Органы кроветворения» - гл.8, лекционный материал. Кровь. Кроветворение.
Методические указания к изучению гистологических препаратов.
6.1.1. Красный костный мозг (мазок).Окраска азур-эозином по Романовскому-Гимза.
Из-за малых размеров клеток препарат изучается при больших увеличениях микроскопа. Освещённость должна быть полной – поднять конденсор, открыть диафрагму, световое пятно поставить в центр поля зрения. Для просмотра пригодны участки мазка, где клетки лежат одним слоем. Трудность идентификации (распознавания) клеток костного мозга обусловлена не только наличием нескольких видов гемопоэза, но и постепенным характером процессов дифференцировки. Нужно отчётливо представлять какие изменения происходят в строении цитоплазмы и ядра на каждой стадии кроветворения. Осложняет идентификацию присутствие дефомированных, разрушенных клеток, стромальных клеток костного мозга, а также остеобластов и остеокластов.
Для облегчения распознавания клеток гемопоэтических рядов следует использовать цветные таблицы, имеющиеся в учебнике и атласе. Успех поиска зависит от доли тех или иных клеток в общей массе клеточных форм. В костном мозге взрослого человека клетки миелодного ряда составляют 53—75%, эритроидного – 14- 26 %, лимфоиднего 5-14 %, моноцитарного около 2 %. Хотя клетки предшественники тромбоцитов – мегакариоциты составляют небольшую долю, они легко определяются благодаря своим очень крупным размерам цитоплазмы и ядра. Следует отметить, что в крови новорождённого доля эритроидного ростка значительно выше.
Согласно данным современной гематологии самые ранние клеточные стадии гемопоэза очень трудно дифференцировать друг от друга. К этим клеткам относятся: стволовая кроветворная клетка, клетка предшественник миелопоэза, колониеобразующая в культуре клетка (предшественник гранулоцитов и моноцитов) эритропоэтинчувствительная клетка (предшественник эритропоэза), тромбопоэтинчувствительая клетка, а также клетка – предшественник лимфопоэза. Все они по морфологии близки к малому лимфоциту. Эти клетки зарисовываются в схему с таблицы с обозначением их роли в кроветворении. К мало дифференцируемым формам также относятся - бласты.
ГРАНУЛОЦИТОПОЗ
Миелобласт имеет размеры 15-20мкм округлую форму. Ядро округлое, содержит 2-5 ядрышек. Хроматин имеет тонкую сетчатую структуру с равномерной окраской. Цитоплазма базофильна, окружает ядро узким ободком. От других бластных форм отличается присутствием в цитоплазме небольшого числа азурофильных зерен.
Промиелоцит- самая крупная клетка (25-30 мкм.) в миелоидном ряду. Форма ядра овальная или бобовидвая. Хроматин грубей, окрашивается неравномерно, ядрышек 1-2. Цитоплазма охватывает ядро широким пояском, окраска её базофильна, содержит обильную азурофильную зернистость. Редко встречающиеся эозинофильные и базофильные промиелоциты, кроме основных гранул, имеют небольшое количество типичных для них гранул.
Миелоцит имеют округлую форму, размеры 12-18 мкм. Ядро округлое или бобовидное, меньших, чем у промиелоцитов размеров. Структура ядра грубая, окрашивается темней. Как правило, ядрышко отсутствует или слабо различимо. Цитоплазма приобретает розоватый тон. Зернистость в цитоплазме носит специализированный характер. У эозинофильного миелоцита она розового цвета, крупная (эту клетку найти легче других). Базофильный миелоцит содержит крупные сине-фиолетовые гранулы, а нейтрофильный миелоцит имеет мелкие гранулы, окрашивающиеся полихроматофильно (как азуром, так и эозином).
Метамиелоциты или юные гранулоциты по характеру гранул делятся на нейтрофильные, эозинофильные и базофильные. Размеры 12-15 мкм. От предыдущей стадии отличаются более плотным ядром подковообразной формы.
Палочкоядрные (нейтрофил, эозинофил, базофил) лейкоциты отличаются наличием тёмного узкого ядра, изогнутого в виде русской или латинской буквы «с».
Зрелые (сегментоядерные) гранулоциты, соответственно окраске гранул,–нейтрофилы, эозинофилы, базофилы.
ЭРИТРОПОЭЗ
Эритробластимеет размеры 16-20 мкм, округлую форму. Ядро округлое, содержит 2-4 ядрышка. Хроматин имеет тонкую сетчатую структуру. Цитоплазма ярко базофильная, без просветления вокруг ядра, в отличие от миелобластов зернистости не содержит.
Пронормоцит – чуть меньших размеров, имеет округлое ядро не содержащее ядрышек. Хроматин отличается более грубой структурой. Цитоплазма ярко базофильная с легким перинуклеарным просветлением.
Базофильный нормоцит - клетка округлой формы, размером около 12 мкм. Цитоплазма ярко базофильная с просветлением около ядра. Ядро плотное, хроматин в виде заметных глыбок.
Полихроматофильный нормоцит имеет размеры 8-10 мкм. Ядро уплотнено. В отличие от базофильного нормоцита цитоплазма, из-за накопления гемоглобина, окрашивается в сиреневый цвет.
Оксифильный нормоцит имеет размеры 7-10 мкм. Цитоплазма оксифильная. Ядро резко пикнотизировано, иногда совершенно непроницаемо для света. Часто встречаются картины смещения и выталкивания ядра из клетки.
Эритроциты -безъядерные клетки, окрашены резко оксифильно, реже полихромно, размеры 7- 8 мкм.
ТРОМБОЦИТОПОЭЗ
Мегакариобласт отличается от эритробласта наличием выростов цитоплазмы и чуть более грубым рисунком хроматина.
Промегакариоцит – крупная клетка (40-60 мкм.). Ядро полиплоидное, структура его грубая, ядрышек нет. Начинается сегментация ядра. Цитоплазма обильная, окрашивается в сиреневые тона, зернистая.
Мегакариоцит- клетка гигантских размеров (50-150 мкм.). Ядро состоит из нескольких крупных долей, прилегающих друг к другу, лежащих иногда кольцеобразно. Хроматин грубый. Цитоплазма обильная, сиреневого цвета, богата азурофильной зернистостью. Иногда наблюдаются картины отделения кровяных пластинок, старение мегакариоцитов. От мегакариоцитов следует отличать остеокласты, также имеющих значительные размеры, но остеокласты содержат несколько ядер, лежащих изолированно друг от друга.
Для облегчения работы остальные виды гемопоэза срисуйте с таблицы кроветворения. Обозначьте каждую клеточную стадию.
Пользуясь таблицей «Кроветворение» и описанием развивающихся форменных элементов, данное в методических указаниях к препарату, найти и зарисовать морфологически различаемые стадии эритропоэза (1): оксифильный нормоцит (1а), эритроцит (1б);стадиитромбоцитопоэза (2): промегакариоцит (2а), мегакариоцит (2б);стадииэозинофильного гранулоцитопоэза (3):эозинофильный миелоцит (3а), эозинофильный метамиелоцит (юный эозинофил) – (3б), палочкоядерный (п/я) эозинофил (3в) и сегментоядерный (с/я) эозинофил (3г). Из гранулоцитов также можно встретить большое количество клеток нейтрофильного гранулоцитопоэза (4): п/я нейтрофил(4а) и с/я нейтрофил(4б), у которых при используемом увеличении микроскопа мелкая нейтрофильная зернистость практически не определяется (только оболочка и ядро характерной формы).