Тема № 26.Возбудитель аспергиллеза.

Цель занятия: Усвоить правила отбора и пересылки патологического материала в лабораторию, порядок и методику исследования его для выделения и идентификации возбудителей сальмонеллезов.

Материалы и оборудование: Посевы, сделанные студентами на прошлом занятии; питательные среды МПА, МПБ, агар Эндо, агар Плоскирева, среды Кларка и Симмонса, среда с лактозой, среды индикаторные для определения индола и сероводорода, диагностические агглютинирующие сыворотки для серогрупповой типизации Е coli и сыворотки агглютинирующие для видовой дифференциации сальмонелл. Для демонстрации: таблица — схема проведения исследования на сальмонеллез. Биопрепараты.

Аспергиллез — Aspergillosis — острая или хроническая микозная болезнь домашних и диких птиц, реже животных других видов, характеризующаяся поражением органов дыхания. В легких, трахее, воздухоносных мешках, иногда в органах брюшной полости находят фибринозные узелки различной формы и цвета, содержащие гифы мицелия грибов из рода Aspergillus.

Основным возбудителем аспергиллеза у птиц и млекопитающих является гриб Asp. fumigatus. Описаны микозные энзоотии среди цыплят, утят и индюшат, вызванные Asp. flavus, Asp. niger, Asp. nidulans. Эти грибы относятся к группе несовершенных грибов — Fungi imperfectij порядку Hyphales, семейству Aspergillaceae роду Aspergillus.

Морфология. В неокрашенных препаратах, приготовленных из гноя, некротических очагов, экссудата, дифтеритических наложений со слизистых или из гранулематозных очагов, под покровным стеклом обнаруживают бесцветные, септированные гифы мицелия с характерными органами плодоношения, конидиеносцы, стеригмы, цепочки конидий.

Микроскопировать можно препараты, окрашенные лактофусином или хлопчатобумажной синью. В первом случае фон красный, а гифы мицелия синие, во втором — фон не окрашивается, гифы гриба голубые.

Культивирование. Для культивирования аспергилл используют агары Сабуро и Чапека. Температурный оптимум 20—25 °С, иногда 37°С; рН 5-6,5.

На агаре Сабуро Asp. fumigatus образует белые пушистые колонии, приобретающие впоследствии зеленую или желтую окраску.

На агаре Чапека вырастают гладкие или звездчатые, зеленые или черные колонии. Конидиеносец одноклеточный гладкий, 300— 500 мкм в длину и 2—3 мкм в ширину. На его верхнем конце веерообразно расположен ряд коротких стеригм, от которых цепочками отшнуровываются споры — конидии (от греч. пыль). Конидии шаровидные, диаметром 2—4 мкм.

Гриб Asp. flavus на агаре Чапека образует желто-зеленые колонии. Для колоний Asp. niger характерна темно-коричневая окраска.

При микроскопическом исследовании аспергилл расположение экзоспор в плодоносящей части напоминает собой струйки воды, выливаемой из лейки, отсюда и название «леечная плесень».

Биохимические свойства. В организме птиц и млекопитающих патогенные аспергиллы выделяют протеолитические ферменты и эндотоксин, обладающий гемолитическими и токсическими свойствами.

Антигенная структура. До конца не изучена. Выявлено, что антигенными свойствами обладает эндотоксин, а также корпускулярные (конидиальные и мицеллярные) и растворимые (полисахаридные и белковые) антигены. Против этих антигенов получены иммунные сыворотки.

Устойчивость. Аспергиллы широко распространены во внешней среде как сапрофиты, а при попадании в организм птиц и млекопитающих при благоприятных условиях становятся патогенными. Аспергиллы в споровом состоянии весьма устойчивы к физико-химическим факторам. В лабораторных условиях сохраняют свою жизнеспособность и патогенность до 5 лет

В качестве дезинфектантов, обезвреживающих аспергиллы, используют осветленные растворы хлорной извести, содержащие 2 % активного хлора, 1,5 %-ный раствор креолина, 2,5 %-ный раствор фенола. Экспозиция не менее 3 ч. 2 %-ный раствор формальдегида убивает аспергиллы через 10 мин.

Кипячение не активирует аспергиллы в течение 5—10 мин. В кормах, проросших грибом, устойчивость его возрастает. Такие корма обеззараживаются при температуре 160—180 °С в течение 10 мин.

Патогенность. К аспергиллезу наиболее восприимчивы индейки, куры, цесарки, утки, пчелы, лошади, крупный рогатый скот, овцы, собаки, свиньи, кролики, морские свинки. Чаще болезнь развивается у молодых животных с пониженной резистентностью организма. Заражение происходит как аэрогенным, так и алиментарным путем. Споры грибов могут проникать через неповрежденную скорлупу яиц с последующим развитием в белке, желтке и воздушной камере. Яйца могут поражаться в гнездах, во время сбора, хранения, транспортировки и в инкубаторах. У крупного рогатого скота и других животных появление аспергиллеза обусловлено длительным стойловым содержанием животных, отсутствием моциона и скармливанием им пораженного корма.

Диагностика. Окончательный диагноз на аспергиллез ставят в лаборатории путем микологического исследования. В лабораторию направляют свежие трупы птиц, кусочки пораженных органов с характерными гранулематозными очагами, яйца; при поражении пчел — соты с больным и погибшим расплодом..

Патологический материал микроскопируют в капле 10 %-ной гидроокиси натрия с целью обнаружения мицелия гриба и высевают на среды Сабуро, Чапека, сусло-агар для изоляции чистой культуры. Параллельно исследуют корма, подстилку, предметы ухода, овоскопируют яйца. Для дифференциации аспергилл разных видов дополнительно используют реакции агглютинации, преципитации, иммунофлюоресценцию и иммуноэлектрофорез.

Остропротекающий аспергиллез цыплят необходимо отличать от пуллороза, а у взрослых птиц — от микоплазмоза, туберкулеза, гипоавитаминоза А и инфекционного бронхита.

Специфическася терапия и профилактика. Они отсутствуют. Для лечения и предупреждения распространения болезни среди животных, в том числе птиц, используют йодистый калий, йодинол, люголевский раствор, антибиотики нистатин и амфотерицин, а также аэрозоли 1%-ного раствора беренила в течение 3—4 дней при экспозиции 30 мин.

Инкубаторы и яйца обрабатывают аэрозолями гексахлорофина по методике, предложенной ВНИИВС