Патогенные анаэробы - Ф. К. Черкес

Патогенные анаэробы относятся к семейству Bacillaceae, роду Clostridium. Анаэробы - обширная группа микроорганизмов, среди которых патогенны для человека: 1) клостридии столбняка; 2) клостридии газовой гангрены (полимикробная инфекция); 3) клостридии ботулизма.

Патогенные анаэробы являются постоянными обитателями кишечника животных и человека, с испражнениями которых выделяются во внешнюю среду. В виде спор они длительно сохраняются в почве, морской и пресной воде.

Патогенные клостридии - крупные палочки размером 4-9 × 0,6-1,2 мк, Молодые культуры грамположительны, старые теряют способность окрашиваться по Граму. Все клостридии образуют споры овальной или круглой формы, располагающиеся терминально, субтерминально или центрально. Большинство анаэробов подвижны. Жгутики располагаются перитрихиально. Клостридии продуцируют экзотоксины высокой биологической активности.

Методы культивирования

Культивируют анаэробы в безкислородных условиях. Существует несколько способов удаления кислорода при их культивировании: физические и биологические.

Физические методы. Удаление кислорода механическим путем. Удаление воздуха осуществляется в анаэростате - герметически закрывающемся приборе с устройством для откачивания воздуха. Портативный (переносной) анаэростат - небольшой цилиндр с герметически закрывающейся крышкой и краном для откачивания воздуха. Посевы устанавливают в анаэростат, создают вакуум в аппарате и ставят в термостат. Этот аппарат может быть заменен эксикатором.

Культивирование в атмосфере инертного газа. Воздух в анаэростате замещается азотом, смесью азота с углекислым газом или водородом.

Культивирование в высоком столбике агара с глюкозой. Микроорганизмы растут на дне, защищенные от воздуха высоким слоем среды.

Метод Виньяля - Вейона. Посев производят в пробирку с расплавленным и остуженным до 45° С агаром. Содержимое пробирки перемешивают и насасывают в пастеровскую пипетку, заполняя ее до верха. Надо следить, чтобы в пипетку не попали пузырьки воздуха. Тонкий конец пипетки запаивают, опускают в пробирку с ватой на дне и переносят в термостат. В толще агара вырастают изолированные колонии. Распилив капилляр пипетки, их извлекают.

Биологические методы. Совместное выращивание анаэробов и аэробов. В чашку Петри наливают толстым слоем агар с 5% крови. По диаметру чашки делают в агаре желобок, чтобы культуры не смешивались. На одну половину засевают культуру аэроба, на другую - анаэроба. Края чашки заливают парафином. Посевы помещают в термостат. Сначала вырастают аэробы, после того как они поглощают весь кислород, находящийся в чашке, начинают расти анаэробы.

Добавление в среду редуцирующих (окисляющих) веществ. Используют среду Китта - Тароцци, содержащую в качестве редуцирующих веществ 0,5% раствор глюкозы и кусочки мяса. Перед посевом среду кипятят 20 мин на водяной бане - удаляют растворенный в ней кислород. Быстро остужают до 45° С и засевают, не дав среде вновь насытиться кислородом. Сразу после посева в пробирку на поверхность среды наливают стерильное масло слоем 1-1,5 см, чтобы защитить посев от воздуха. Посевы выращивают в термостате.

Питательные среды

Среда Китта - Тароцци. Бычью печень или мясо нарезают мелкими кусочками, заливают троекратным количеством питательного бульона рН 7,4-7,6, кипятят 30 мин. Бульон фильтруют. Печень промывают на сите водой, распределяют в пробирки по 3-4 кусочка в каждую, заливают 7-8 мл бульона. Стерилизуют под давлением 1 атм 30 мин.

Кровяной агар. 3% МТТА с 1-2% глюкозы рН 7,2-7,4 смешивают с 15-20% свежей дефибринированной крови барана или лошади. Разливают в чашки Петри. Подсушивают в термостате 20-30 мин. Можно пользоваться кровью кролика или морской свинки, взятой из сердца стерильно, в количестве 5-1% среды.

Среда Вильсона - Блера. 100 мл 3% МПА с 1% глюкозы расплавляют на водяной бане, добавляют 10 мл 20% натрия сульфита и 1 мл 8% раствора железа хлорида. Оба раствора готовят на стерильной дистиллированной воде и кипятят. Приготовленную среду разливают в пробирки по 7-8 мл.

Среда Виллиса - Хоббса. Смешивают 400 мл бульона Хоттингера, 4,8 г агара, 4,8 г лактозы, 1,8 мл 1% раствора нейтрального красного. Автоклавируют, охлаждают до 50-55° С, добавляют 15 мл суспензии куриного желтка с изотоническим раствором натрия хлорида и 60 мл стерильного обезжиренного молока.

Существуют элективные среды для отдельных видов, типов бацилл и среды для лучшего токсинообразования.

В настоящее время широко применяются казеиново-дрожжевые, казенново-грибные, рыбокукурузные и другие среды.