Влияние внешних условий на спермиев вне организма животного 4 страница

Через 24 ч хранения разбавленной спермы быка при температуре 2 °С перфораторий спермия несколько уве­личивается, становится более контраст­ным, а через 72 ч он набухает и начинает распадаться (Г. В. Зверева и Л. А. Чер­номаз). Следовательно, качество спер­мы и ее оплодотворяющая способность с каждым днем хранения снижаются.

Разбавленную сперму барана ис­пользуют для осеменения овец в тече­ние 24 ч с активностью не ниже 8 бал­лов. Исследования А. И. Лопырина и В. К. Рабочева показали, что свежеполу- ченная сперма барана сохраняет опло­дотворяющую способность в половых органах овцы в течение 27—30 ч. Этот показатель при хранении спермы при нулевой температуре в течение суток снижается на 20 %, а через 2 сут — почти на 30%.

Сперму ж е р е б ц а используют для осеменения кобыл после хранения ее не более 2 сут с активностью не ниже 5 бал­лов.

При хранении спермы любым спосо­бом всегда следует учитывать неодина­ковую способность спермиев реагиро­вать на охлаждение. Такое свойство спермиев отмечается не только у разных производителей, но и у разных эякуля- тов одного и того же производителя. У некоторых быков и хряков сперма при 0 °С сохраняется плохо, а при темпера­туре 4—5 °С получаются удовлетвори­тельные результаты. В производствен­ных условиях для хранения спермы при температуре 2—5 "С пользуются термо­сами, сконструированными специально для искусственного осеменения.

В обычном пищевом термосе вмести­мостью 1 л при наличии в нем не менее 200 г льда температура поддерживается в пределах 0—1 °С. При хранении на мо­розе ниже минус 5 °С на термос следует надеть войлочный или ватный чехол. Если температура ниже минус 20 "С, термос заполняют не льдом, а холодной водой (5—8 °С). Крышку и горловину термоса смазывают вазелином или мас­лом, чтобы они не смерзались. В термо­сах, заполненных водой, при сильных морозах сперма сможет храниться в те­чение 2—3 сут (до замерзания ²/₃ воды).

Долговременное хранение спермы. В процессе хранения спермы при 2—5 °С в ней протекают обменные процессы, от­рицательно влияющие на оплодотворя­ющую способность спермиев. Длитель­ное хранение половых клеток возможно только в условиях полного анабиоза, когда все биохимические процессы сильно замедляются.

Научно обоснованную теорию анабиоза при замораживании животных сформулировал извес­тный русский ученый П. И. Бахметьев (1902). Изучение анабиоза у животных и растительных организмов показало, что одной из причин ана­биотического состояния является потеря воды цитоплазмой клеток в результате охлаждения. Сложное явление анабиоза явилось основой к проведению исследований по хранению спермы при низких температурах. Первые опыты по замо­раживанию спермы жеребца при температуре ми­нус 15 °С были проведены И.И.Ивановым (1907). Затем исследованиями его сотрудников К. Н. Кржишковского и Г. Н. Павлова была пока­зана способность спермиев млекопитающих и че­ловека переносить охлаждение в течение длитель­ного времени при температуре минус 23 °С. По­зднее Янель (1938) нашел, что спермии человека обладают исключительно высокой устойчивостью к охлаждению в жидком азоте (минус 196 °С) и даже в жидком гелии (минус 269 °С).

В 1948 г. И. В. Смирнов впервые осу­ществил замораживание спермы жереб­цов, кроликов, быков и баранов в паке­тах из алюминиевой фольги на поверх­ности твердого диоксида углерода (ми­нус 79 °С) и в парах жидкого кислорода (минус 183 °С). Однако большая часть спермиев погибала, и после оттаивания лишь 5—30 % спермиев сохраняли ак­тивное поступательное движение. При­меняя многократное осеменение такой спермой на протяжении стадии возбуж­дения полового цикла, И. В. Смирнов в 1950—1951 гг. получил ягнят и телят.

В дальнейшем английские ученые Полдж и Раусон (1952), используя за­щитное действие глицерина при охлаж­дении спермиев, разработали пригод­ный для производства метод длительно­го хранения спермы быка в жидком азо­те (минус 196 °С). В настоящее время этот метод хранения спермы быка ши­роко применяется у нас и за рубежом.

Хранение спермы в жидком азоте по­зволяет значительно улучшить пород­ные качества разводимого скота, так как в тысячи раз увеличивается количество самок, осеменяемых спермой ценных

9. Основные технические характеристики некоторых сосудов Дьюара для хранения замороженной спермы Марка сосуда Масса пустого сосуда, кг Гидравличес­кая вмести­мость сосуда, л Испаряе­мость азо­та, г/ч КВ-6202 ХБ-05 ХБ-02 Харьков-34А 9,8 Харьков-34Б* 18,5 6,5 СДС-5* 4,5 6,2 9,5 СДС-20* 21,5 СДС-30*

* Сосуды можно использовать для транспорти­ровки спермы.

производителей. Осеменение коров та­кой спермой возможно на протяжении ряда лет. У спермы быка, хранящейся в жидком азоте, оплодотворяющая спо­собность остается удовлетворительной на протяжении 25 лет. Метод долговре­менного хранения спермы значительно

Рис. 30. Устройство сосуда Дьюара для хранения замороженной спермы:

Внешняя и 2—внутренняя стенки сосуда Дьюара; 3 — подвешивающее устройство канистры; 4— корпус канистры; 5— боковое отверстие в корпусе канистры; 6— жидкий азот, находящийся в сосуде Дьюара

увеличивает возможность организации международного обмена спермой выда­ющихся быков. Для хранения спермы таких быков внутри страны и ее экспор­та во многих странах организованы спе­циальные банки спермы. Для хранения спермы в жидком азоте используется специальное холодильное оборудование (табл. 9).

Известно, что замороженная сперма сохраняет свои качества, когда ее хранят погруженной в жидкий азот. Поскольку азот постоянно испаряется из сосудов Дьюара, его необходимо периодически доливать. В современных сосудах Дьюа­ра канистры (рис. 30) имеют боковое от­верстие, через которое в них затекает жидкий азот при погружении и вытекает часть его при подъеме канистры к горло­вине сосуда. Поскольку канистры раз­ной длины, то их боковые отверстия на­ходятся на различных расстояниях от верхнего среза горловины сосуда. По­этому доливать жидкий азот нужно тог­да, когда его уровень опускается до бо­кового отверстия самой длинной канис­тры, а заполнять их спермой следует только наполовину (до отверстия), что­бы при подъеме канистры в горловину сосуда сперма оставалась в жидком азо­те. Уровень азота в сосуде периодически контролируется линейкой.

При работе с жидким азотом необхо­димо соблюдать правила техники безо­пасности. Два раза в год сосуды Дьюара подвергают профилактической дезин­фекции, перед которой перекладывают сперму в другой сосуд, выливают остат­ки жидкого азота и отогревают сосуд в закрытом помещении не менее 2 сут; за­тем моют горячей водой (не выше 70 °С) и подвергают влажной дезинфекции.

При замораживании спермы мож­но использовать несколько вариантов расфасовки, при каждом из которых применяют соответствующую среду (табл. 10).

Наиболее выраженными криозащит- ными свойствами обладают желток ку­риных яиц, лактоза и глицерин. Но в ра­
створах этих веществ морфологические изменения спермиев начинаются уже при разбавлении спермы, а после экви- либрации ее патологические спермии составляют в среднем 30 %.

После разбавления сперму выдер­живают при 2—5 °С в течение 2—6 ч (эквилибрация). Для замораживания спермы в открытых гранулах берут фто­ропластовую пластину, на которой с двух сторон имеется по 300—324 лунки для накалывания спермы, обеззаражи­вают ее с помощью бактерицидных ламп, опускают в широкогорлый сосуд с жидким азотом и охлаждают до тех пор, пока не прекратится кипение азо­та. Охлажденную пластину приподни­мают над поверхностью жидкого азота и при помощи шприца наносят разбав­ленную сперму объемом по 0,1 мл в каждую лунку. Спустя 2—3 мин после нанесения спермы в последнюю лунку пластину погружают в жидкий азот на 1—2 мин. После этого, вынув пластину, замороженные гранулы собирают в пластмассовые коробочки с небольши­ми отверстиями (или в марлевые ме­шочки) и хранят в жидком азоте. При таком способе замораживания темпе­ратура внутри гранул спермы понижа­ется более равномерно, что обусловли­вает лучшее сохранение и высокую ак­тивность спермиев в оттаянной сперме. Главный недостаток замораживания спермы в гранулах — их незащищен­ность.

Рецепты сред для различной фасовки спермы быка барана жеребца гранулы 0,1—0,2 или 0,5 мл облицованные гранулы 0,25-0,33 мл соломинки по 0,25 мл гранулы по 0,2 мл алюминиевые пакеты по 25 мл или гранулы 0,5 мл среда № 1 среда № 2 10. Среды для замораживания спермы Компоненты срез Вода дистиллированная, мл — Лактоза, г 11,5 — 6** 8,05 8,4 11%-ный раствор лактозы, мл — 63* — — — — Фруктоза, г — — — 1,2 — — Раффиноза пятиводная, г — — — 1,95 — — Натрий лимоннокислый, г — — 1,4 — — 0,089 Натрий двууглекислый, г — — — — — 0,008 Магний сернокислый, г — — — 0,01 — — Хелатон-3, г — — — — 0,136 0,1 Ксилит, г — — — — 0,26 — Трис-оксиметил-аминоме- — — — — 0,105 — тан, г             Декстрин, г — — — — — Желток куриных яиц, мл — 1,6 Глицерин, мл 3,5 Спермосан-3, тыс. ед. 50-90 50-90 50-70 25-30

* Можно заменить таким же количеством 11%-ного раствора сахарозы. ** Можно Заменить таким же количеством сахарозы.

В Польше гранулы покрывают жела­тиновыми капсулами. Под руковод­ством Ф. И. Осташко разработана харь­ковская технология замораживания спермы в облицованных (покрытых тонкой полимерной пленкой) гранулах. Во Франции предпочитают быстро за­мораживать сперму в «соломинках» (пайеты), которые одновременно слу­жат инструментом для осеменения ко­ров. Этот способ используют и в нашей стране. Хороший результат дает техно­
логия замораживания спермы в пропи- леновых соломинках (байсогальская технология и по методике И. Хабибул- лина). Важный фактор — сезон года.

В жаркие летние месяцы оплодотво- ряемость коров от замороженной спер­мы, как правило, низкая. Наиболее бла­гоприятное время для заготовки заморо­женной спермы — весна и осень. Спер­ма некоторых быков плохо заморажива­ется.

Разработана методика замораживания спермы жеребцов в гранулах или алюми­ниевых пакетах (Е. М. Платов и др.).

ТРАНСПОРТИРОВКА СПЕРМЫ

В настоящее время осеменение спер­мой, доставляемой, как правило, из племпредприятий, — наиболее распро­страненная форма искусственного осе­менения.

При транспортировке спермы необ­ходимо соблюдать условия, которые мо­гут сохранить ее жизнеспособность от момента получения до осеменения. Сперму обычно перевозят в термосах, в которых она хранится. При этом необхо­димо исключить возможность поврежде­ний емкостей со спермой и термосов.

Сперму, помещенную для кратко­временного хранения, нужно предохра­нять от колебаний температуры.

Замороженную сперму перевозят в сосудах Дьюара, в которых ее и хранят.

При транспортировке таких сосудов с жидким азотом наземными видами транспорта их необходимо тщательно закреплять, так как падение сосуда мо­жет сопровождаться взрывом. При пере­возке сосудов Дьюара на самолете их за­полняют азотом только на половину гидравлической емкости.

К каждой партии отправляемой спермы прикладывают ордер, в котором указывают дату и часы получения спер­мы, кличку производителя, дозу и оцен­ку спермы.

Транспортировка спермы должна проводиться с соблюдением всех правил действующей инструкции по искусст­венному осеменению животных данно­го вида.