Особенности приготовления препарата

1. Взятие материала и фиксация	Материал берут очень маленькими кусочками (порядка 1 мм 3), а фиксацию осуществляют обычно в 2 стадии: вначале глутаральдегидом (стабилизация белков), затем - четырёхокисью осмия (стабилизация фосфолипидов и контрастирование ткани).
2. Уплотнение материала	1. Образцы, как обычно, обезвоживают, а для их дальнейшего уплотнения используют эпоксидные смолы . 2. а) Заливку производят в специальных формах, б) затвердевание смеси происходит путём её полимеризации в термостате, в) и затвердевшие блоки имеют вид маленьких свечей.
3. Приготовление срезов	1. Срез делают с помощью ультратома; их толщина - 30-50 нм (ср. с микротомными срезами - 10.000 – 20.000 нм). 2. Затем их переносят на сеточки (играющие роль предметного стекла).
4. Окрашивание срезов	1. а) Окрашивание срезов сводится к их контрастированию с помощью солей тяжёлых металлов (свинца, вольфрама, урана). б) Эти соли осаждаются на фосфолипидах мембран и поглощают электроны. 2.Поэтому соответствующие места клетки выглядят более тёмными.

Вопросы для контроля

1. Назовите методы исследований в цитологии и гистологии
2. Каковы отличия световой и электронной микроскопии.
3. Из каких этапов состоит приготовление постоянных препаратов
4. Какие бывают красители для клеток и тканей?
5. Назовите основные части светового микроскопа

Практическая часть занятия

1.Работа с микроскопом

При выполнении практической работы следует помнить следующие основные правила обращения со световым микроскопом:

1.Поставьте микроскоп у края стола так, чтобы окуляр находился ближе к левому глазу. Тетрадь и все предметы, необходимые для работы, расположите справа от микроскопа.

2. Освещение устанавливается только с объективом малого увеличения; следует обязательно проверить центровку положения объектива; конденсор должен быть поднят до упора; диафрагма открыта полностью

3. При помещении препарата на предметный столик покровное стекло должно быть сверху; препарат на предметном столике должен находится против отверстия

4. При фокусировке следует помнить, что расстояние между нижней линзой объектива и препаратом при малом увеличении (х8) - около 10 мм, при большом (х40) - менее 1 мм;

5. С помощью макровинта поднимите предметный столик, чтобы расстояние между препаратом и фронтальной линзой объектива было 3-4- мм. окуляры, плавно поднимите объектив до положения, при котором хорошо видно изображение объекта. Для большей четкости изображения слегка прикройте диафрагму и опустите конденсор.

6. При переводе с малого увеличения на большое следует:

-расположить исследуемый участок препарата в центре поля зрения,

-перевести револьвер с объективом 40 и отцентрировать его положение,

-наблюдая в окуляр, увидите расплывчатое изображение предмета. -дальнейшее изучение объекта производите, пользуясь микровинтом, вращая его на 0.5-1 оборот.

7. После окончания работы с большим увеличением поверните револьвер, установите малое увеличение и снимите препарат.

Общий вид биологического микроскопа МБИ-1: 1-окуляр, 2-поворотная бинокулярная насадка, 3-винт для поворота , 4- револьвер, 5- объективы, 6-подвижный предметный столик, 9-конденсор и ирисовая диафрагма, 7 – препаратодержатель, 8 - подвижные лапки, 10- маковинт (винт грубой наводки), 11 - микровинт, 12 – осветитель, 13 – рукоятки управления,14 - основание штатива, 15 – регулятор освещения, 16 – выключатель.

Литература

Основными учебниками и учебными пособиями для подготовки к практическим занятиям и самостоятельной работы являются:

1. Быков В.Л. Цитология и общая гистология.-СПб.:SOTIS,1998.

2. Гистология/Под ред.Ю.И.Афанасьева.-М.:Медицина,1999.

4. Гистология: Учебник. 2-е изд., перераб. и доп./Под ред. Э.Г.Улумбекова, Ю.А.Челышева.-ГЭОТАР-МЕД, 2001.- 672 с.

5. Лабораторные занятия по курсу гистологии, цитологии и эмбриологии/ Под ред. Ю.И.Афанасьева, А.Н.Яцковского.-М.:Медицина,1999.

Электронные учебные пособия

рекомендуемые для самостоятельной работы:

1.Данилов Р.К., Клишов А.А., Боровая Т.Г., Ващенков В.В. Гистология в мультимедиа.-СПб.:ВмедА, 1998

2.Кузнецов С.Л., Мушкамбаров Н.Н., Горячкина В.Л. Руководство-атлас по гистологии, цитологии и эмбриологии.-М.: ММА им. И.М.Сеченова.

3.Павлов А.В, Гансбургский А.Н., Щербаков О.О. Знаете ли Вы гистологию? InterNet – программа для самостоятельной работы.-Ярославль, ЯГМА, 2000.

Лабораторная работа №2

Общая морфология клетки и клеточных структур

Цель занятия.

После самостоятельного изучения теоретического материала и работы на практическом занятии студент должен знать:

1.Общий план строения клетки, классификацию ее структур. Уметь идентифицировать ядро, плазмалемму, цитоплазму.

2.Связь формы (кубическая, веретеновидная, отростчатая и др.) и структуры клетки с выполняемой функцией.

3.Физико-химическую характеристику цитоплазмы.

4.Строение элементарной клеточной мембраны, ее компонентов.

6.Органеллы общего значения, их роль в жизнедеятельности клетки.

7.Органеллы специального значения, их роль в клетке.

Приборы и материалы. Демонстрационный микроскоп Nikon Eclipse 50i, микроскоп Биолан, постоянные препараты

План изучения темы.

1.Единство и многообразие клеток

1.1. Клеточная теория

1.2.Основные положения теории

1.3.Понятие о дифференцировке

2. Форма клеток и их ядер

2.1. Клетки кубической и цилиндрической формы

2.2. Веретеновидные

2.3. Округлые
2.4. Отростчатые клетки

2.5. Симпласты

3.Клеточные мембраны и структуры клеточной поверхности

3.1. Клеточные мембраны

3.1.1Принцип организации мембран

3.1.2.Особенности плазмолеммы

3.1.3.Функции плазмолеммы

3.2. Способы трансмембранного переноса

3.2.1. Перенос низкомолекулярных веществ через плазмолемму.

3.2.2. Перенос в клетку крупных соединений и частиц (эндоцитоз)

3.2.3. Перенос из клетки крупных соединений и частиц (экзоцитоз)

3.3. Компоненты мембранной системы клеток:

эндоплазматический ретикулум (гладкий и шероховатый),

комплекс Гольджи,

лизосомы,

одномембранные микротельца.

3.4. Двумембранные компоненты клетки

митохондрии

пластиды

4. Немембранные компоненты клетки

микротрубочки

филаменты

рибосомы

включения

Вопросы для контроля.

1. Дайте определение понятию “клетка”.
2. Перечислите основные функциональные свойства живой клетки.
3. Назовите основные составные части клетки.
4. Перечислите основные формы клеток у человека.
5. Дайте структурную характеристику клеточных мембран согласно жидкостно-мозаичной модели строения мембраны.
6. Назовите основные функции плазмолеммы.
7. Назовите составные части цитоплазмы.
8. Укажите основные химические компоненты матрикса цитоплазмы.
9. Дайте определение понятию “органелла”.
10. Назовите группы органелл.
11. Перечислите мембранные органеллы.
12. Назовите немембранные органеллы.
13. Перечислите неклеточные структуры тканей, укажите особенности их строения и происхождения.