Продукты секреции макрофагов в реализации

РЕПАРАТИВНЫХ ПРОЦЕССОВ

ПРОДУКТЫ СЕКРЕЦИИ МАКРОФАГОВ В АНГИОГЕНЕЗЕ

Лабораторный практикум

Задание 1. Изучение фагоцитоза птичьих эритроцитов в перитонеальном экссудате морской свинки (Опыт И. И. Мечникова)

Необходимые животные и оборудование на 1 рабочее место:

1. Морская свинка.

2. % взвесь птичьих эритроцитов (петуха) на физиологическом растворе хлористого натрия.

3 Шприц объемом 5,0 мл.

4. Пастеровская пипетка.

5. Ножницы.

6. Пинцет хирургический.

7. Предметное стекло с лункой-

8. Покровное стекло.

9. Вазелин в фарфоровом тигле (1,0 г) и стеклянная палочка.

10. 0,02% раствор краски нейтральрот.

11 Микроскоп (ок. 7-10, об. 8 и 90).

12. Иммерсионное масло.

13. Предметное стекло.

14. Предметное стекло со шлифованными краями.

15. Жидкость Нлкифорова (спирт пополам с эфиром) -- 2 мл.

16. Краска Романовского - 2 мл.

17. Пипетка объемом 5,0 мл. (2 шт.).

18. Ванночка со стеклянным мостиком-

19. Дистиллированная вода - 200 мл.

20. Фильтровальная бумага (1 фильтр).

Ход исследования:

За сутки до занятия морской свинке вводят внутрибрюшинно 8 - 10 мл стерильного мясо-пептонного бульона. При этом возникает асептическое воспаление, в перитонеальном экссудате скапливается большое количество макрофагов. Во время занятия морской свинке внутрибрюшинно вводят 5 - 8 мл 5%, взвеси птичьих эритроцитов, подогретых до 38^о С. Птичьи эритроциты являются объектом фагоцитоза.

Через 1 час после введения птичьих эритроцитов у подопытного животного ножницами разрезают кожу живота по средней линии. В месте надреза стерильной пастеровской пипеткой прокалывают брюшину. В силу капиллярности перитонеальный экссудат заполняет пипетку. Из этого экссудата готовят 2 препарата: 1 - висячую каплю, 2 - фиксированный мазок

Приготовление висячей капли

3 - 5 капель экссудата помещают на часовое стекло и смешивают с равным количеством краски нейтральной красной (нейтральрот). На покровном стекле делают ободок из вазелина и в центре помещают каплю экссудата, смешанного с краской. Покровное стекло накрывают другим стеклом с лункой. Затем весь препарат переворачивают покровным стеклом вверх, при этом капля экссудата повисает над лункой. При таком методе окраски клеток экссудата поврежденные макрофагом птичьи эритроциты (реакция ферментолиза) окрашиваются в красный цвет, что указывает на изменение реакции внутри клетки в кислую сторону. Неповрежденные клетки в перитонеальном экссудате морской свинки не прокрашиваются этой краской. Рассматривают препарат под микроскопом при увеличении 10х8.

Приготовление мазка из перитонеального экссудата

Каплю экссудата наносят на предметное стекло и с помощью стекла со шлифом делают мазок. Высохший мазок помещают на стеклянный мостик и наливают на него жидкость Никифорова (фиксация мазка). Фиксацию проводят в течение 15 - 20 минут. По мере высыхания фиксирующую жидкость добавляют на поверхность мазка. Затем оставшуюся жидкость сливают в ванночку и на поверхность мазка пипеткой наливают краску Романовского. Окрашивание мазка производят также в течение 15 - 20 минут. Далее мазок промывают водой (дистиллированной или водопроводной), сушат (с противоположной стороны мазка стекло можно осушить фильтровальной бумагой. Затем Мазок рассматриваем под микроскопом (ок. 10, об. 90). Зарисавывают все стадии фагоцитоза.

Задание 2. Получение физико-химической модели химиотаксиса

(Опыт Данилевского)

Необходимое оборудование на 1 рабочее место:

1. Чашка Петри.

2. 3% раствор азотной кислоты - 20 мл.

3. Кристаллы двухромовокислого калия - 1 кристалл.

4. Ртуть металлическая - 1 капля.

5. Пинцет анатомический.

Ход исследования:

В чашку Петри наливают 15 - 20 мл 3% раствора азотной кислоты и помещают каплю ртути. На некотором расстоянии от капли ртути помещают кристалл двухромовокислого калия. По мере растворения кристалла изменяется форма капли ртути - она становится амебовидной и начинает передвигаться по направлению к кристаллу, обтекает его, что в некотором отношении напоминает биологическое явление - фагоцитоз.

Рассматривают причины изменения физико-химического состояния ртути в данном опыте, а также значение этих явлений в реакций фагоцитоза в организме.

Задание 3. Исследование клеток гнойного экссудата

Необходимое оборудование на 1 рабочее место:

1. Микроскоп (ок. 10, об. 90).

2. Гной или мазки гноя.

3. Иммерсионное масло.

4. Предметное стекло (2 шт.).

5. Жидкость Никифорова - 2 мл.

6. Краска Романовского - 2 мл.

7. Ванночка с мостиком.

8. Пипетка глазная (2 шт.).