ВИЧ- инфекция. Лабораторная диагностика, иммунопатогенез ВИЧ- инфекции.

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ или HIV) относится к семейству ретровирусов, подсемейству лентивирусов (медленных вирусов). Геном ретровирусов уникален - он представлен двумя идентичными молекулами позитивной РНК, т.е. это РНК - вирусы с диплоидным геномом. Свое название ретровирусы получили за отличительные особенности репродукции (РНК à ДНК à иРНК à геномная РНК). Особенности репродукции связаны с функциями фермента обратной транскриптазы (ревертазы или РНК - зависимой ДНК - полимеразы), обладающей тремя видами активности - обратной транскриптазы, РНК - азы и ДНК - полимеразы.

Семейство Retroviridae включает три подсемейства.

1. Lentivirinae - возбудители медленных вирусных инфекций, в т.ч. ВИЧ.

2. Oncovirinae - онкогенные вирусы, с которыми связано превращение клеток в опухолевые. Раньше не знали, как РНК - вирусы могут встраиваться в геном клетки и способствовать опухолевому росту (не были известна возможность обратной транскрипции у вирусов), что тормозило научную разработку вирусологии опухолевого роста.

3. Spumavirinae - “пенящие” вирусы, название которых связано с характерным “вспененным” видом инфицированных ими клеточных культур как результатом интенсивного симпластообразования.

Первыми открытыми в конце 70- х годов ретровирусами были HTLV-1 и HTLV-2 (от “human T- lymphotropic virus) - возбудители Т - клеточных лейкозов и лимфом. Наиболее известны обладающие лимфотропным и цитопатическим действием вирусы ВИЧ-1 (HIV-1 в английском варианте) и ВИЧ-2, вирус иммунодефицита обезьян (ВИО или SIV), к которому по ряду свойств ближе (чем к ВИЧ-1) ВИЧ-2. К настоящему времени имеется информация уже о нескольких сотнях ретровирусов, интегрированных с геномом человека и практически очень мало об их роли в патологии.

История изучения и происхождения ВИЧ.

Синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) впервые выделен как самостоятельное заболевание в США в 1981г. Возбудитель (ВИЧ-1) был описан почти одновременно в 1983г. французом Л.Монтанье и американцем Р.Галло. Эпидемиология нового вида патологии поражала своей необычностью. Почти 100% больных были мужчинами в возрасте 25-49 лет, 94% - гомо- или бисексуалами, отмечалась высокая летальность. У больных были выявлены дефекты клеточного иммунитета, развитие пневмоцистозной пневмонии, кандидоза и саркомы Капоши у них было расценено как оппортунистические заболевания. СПИД окрестили болезнью четырех “H”- по первым буквам английских вариантов слов гомосексуалы, гемофилия, гаитяне и героин. В 1986г. был идентифицирован еще один вирус - ВИЧ-2.

Окончательного ответа на вопрос о месте, времени и условиях возникновения ВИЧ нет. Ретроспективные исследования показали циркуляцию этого вируса по крайней мере с конца 50-х - начала 60-х годов. Прародительницей ВИЧ считают тропическую Африку, где широко распространен ВИО (близкородственный ВИЧ-2) среди обезьян. Первые известные серологические находки ВИЧ отмечены в Африке, здесь же - наибольшая интенсивность передачи ВИЧ наиболее естественным гетеросексуальным путем. Однако эпидемическое распространение ВИЧ - инфекция получила с конца 70-х - начала 80-х годов. В 1987г. выявлен первый случай в России, в настоящее время счет идет на десятки тысяч инфицированных в год. В мире регистрируют десятки миллионов инфицированных ВИЧ в год, ежегодно число вновь инфицированных увеличивается, т.е. налицо пандемия ВИЧ - инфекции.

Структура вириона ВИЧ.

ВИЧ имеет сферическую форму и размеры 100-120 нм в диаметре. Наружная оболочка образована двойным липидным слоем с гликопротеиновыми “шипами”, состоящими из трансмембранного белка gp41 (пронизывает липидный слой) и наружного белка gp120. Эти оболочечные белки кодируются геном env и участвуют в прикреплении вириона к мембранам клеток хозяина. С внутренней стороны липидной оболочки находится матричный каркас, образованный белком р17. Он окружает внутреннюю структуру вириона - нуклеокапсид или сердцевину (англ. - core). Собственная оболочка сердцевины образована “коровским” белком р24. Внутри нуклеокапсида находится геном вируса в виде двух цепочек, связанных белками р7 и р9, полимеразный комплекс ревертазы, протеаза, интеграза (эндонуклеаза), затравочная т - РНК. Наиболее распространен ВИЧ-1, который в зависимости от строения гена env имеет субтипы. Субтипы A-H составляют доминирующую группу M (major), наиболее распространены субтипы С и Е.

Жизненный цикл ВИЧ.

Инфекционный процесс при заражении ВИЧ носит последовательный фазовый характер и начинается с проникновения вируса через слизистую оболочку половых путей или с непосредственного поступления в кровоток. Проникнув в организм, вирус в первую очередь атакует клетки, имеющие специфичный для него рецептор CD4. Этот рецептор имеют в большом количестве Т - хелперы, в меньшем - макрофаги и моноциты, нейроны, клетки нейроглии и некоторые другие клетки (см. лекции по общей иммунологии). Вирус распознает CD4 - рецепторы с помощью своего белка gp120. Процесс инфицирования клетки вирусом осуществляется в два этапа : прикрепления и слияния. Прикрепленный через белок gp120 к рецептору CD4 клетки - мишени вирус белком оболочки gp41 сливается с мембраной клетки. Белок gp41 обеспечивает не только слияние вирусной и клеточной мембран, но и слияние мембран клеток с образованием синцития (многоядерных клеток), обреченного на гибель. Нуклеокапсид, освобожденный от суперкапсида при слиянии мембран, попадает в цитоплазму. На пути к ядру освобождается геномная РНК и ассоциированные с ней компоненты сердцевины. Обратная транскриптаза синтезирует на вирионной РНК минус - цепь ДНК, РНК-аза разрушает вирионную РНК, а вирусная ДНК - полимераза синтезирует на минус - цепи плюс - цепь ДНК.

Двунитевая ДНК транспортируется в ядро клетки, где приобретает кольцевую форму и интегрируется под действием эндонуклеазы (интегразы) с ядром клетки, превращаясь в ДНК - провирус.Последующие этапы жизненного цикла ВИЧ - латентная фаза, фаза активации транскрипции с ДНК- провируса и последующая трансляция белков вируса, наработка компонентов вируса и формирование новых вирионов, их выход из клетки, сопровождающийся цитопатическим эффектом для клетки - мишени.

ДНК - провирус может длительно находиться в неактивном состоянии (персистентное инфицирование). В этот период вирус можно выявить только с помощью ПЦР. Активация транскрипции особым ядерным фактором в результате действия иммунокомпетентных клеток или микробных антигенов приводит к продуктивной фазе - активному размножению ВИЧ. Факторы экспрессии генов ВИЧ - специфические антигены (прежде всего - герпес - вирусы), неспецифические митогены (фитогемагглютинин), цитокины (фактор некроза опухолей, интерфероны, гамма - интерферон), бактериальные иммуномодуляторы (фосфолипиды сальмонелл), глюкокортикостероиды.

Антигенные свойства ВИЧ.

Функция обратной транскриптазы не подвергается контролю, что обусловливает высокую частоту генетических ошибок при репликации и мутации структурных белков вируса. С учетом частоты изменчивости ни один ВИЧ не производит при репликации вирион, в точности соответствующий родительскому. Высокая генетическая изменчивость реализуется в вариабельности антигенных и биологических свойств ВИЧ. Высокой изменчивостью характеризуется продукт гена env - оболочечный белок gp120, особенно петлеобразный V3 - домен (из 35 аминокислот), к которому образуется до 90-95% всех вируснейтрализующих антител.

ВИЧ-1 и ВИЧ-2 имеют существенные отличия в строении, гомология первичной структуры геномов составляет только около 42%, перекрестного иммунитета между этими вирусами нет. Антигенными свойствами обладают все основные структурные элементы вириона, прежде всего - белки. Исключительная генетическая и антигенная изменчивость позволяет вирусу выживать в инфицированном организме.

Наряду с генетическими особенностями, ВИЧ-1 имеет фенотипические различия по ряду свойств - эффективности репликации, характеру цитопатического действия и способности образовывать синцитий (этот признак связан с вирулентностью), преимущественному тропизму к клеткам - моноцитотропные изоляты (начальные этапы болезни) и лимфотропные изоляты (разгар болезни).

Патогенез СПИДа.

Рецептором для ВИЧ является дифференцировочный антиген CD4, имеющий гомологичные участки с иммуноглобулинами и белком gp120 ВИЧ. Расположенный на мембранах Т- хелперов и Т- индукторов, рецептор CD4 в комплексе с белками HLA II класса выполняет функцию распознавания антигенов. Фиксация вируса через gp120 ВИЧ-1 (или gp105 ВИЧ-2) с мембранным рецептором CD4 блокирует основную функцию этих иммунокомпетентных клеток - восприятие сигналов от антиген- представляющих клеток. Последующая репликация вируса ведет к гибели этих клеток и выпадению их функций, т.е. к развитию иммунодефицита. Чем активнее CD4+ клетки, тем активнее процесс репродукции вируса. ВИЧ угнетает преимущественно Т- хелперы -1 (связанные с многими цитокинами клеточного иммунитета), что способствует развитию вирусных инфекций и опухолей.

Сродство вирусного gp120 (gp105 в случае ВИЧ-2) к этому рецептору определяет высокую избирательность поражения клеток. В патологический процесс вовлекаются в первую очередь и в наибольшей степени CD4+ лимфоциты, моноциты крови и макрофаги тканей, дендритные клетки крови, лимфоузлов, селезенки, кожи, альвеолярные и интерстициальные макрофаги легких, микроглия и другие клетки нервной системы, имеющие CD4+ рецепторы. Поражаются также В- и 0- лимфоциты, ретикулярные клетки, эпителиальные клетки кишечника. Большое значение в распространении ВИЧ и длительному сохранению в организме придают клеткам Лангерганса.

В патогенезе ВИЧ - инфекции большое значение имеют механизмы иммунного повреждения. Наличие сходных участков в структуре белков gp120, HLA класса II и CD4 - рецепторов определяет перекрестное реагирование антител к ВИЧ с этими структурами с рядом патологических эффектов (блокада кооперации CD4+ лимфоцитов и HLA класса II, неадекватная стимуляция CD4+ клеток и др.).

Поражение иммунной системы при ВИЧ - инфекции носит системный характер, проявляясь глубокой супрессией Т- и В- звеньев иммунитета. Происходят изменения гиперчувствительности немедленного и замедленного типа, гуморального иммунитета и факторов неспецифической защиты. Наряду с дефицитом CD4+ лимфоцитов в динамике болезни нарастает функциональная недостаточность CD8+ лимфоцитов, NK клеток, нейтрофилов. Нарушение иммунного статуса проявляется рядом синдромов - инфекционным, аллергическим, аутоиммунным, лимфопролиферативным.

Манифестный синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) проявляется в трех основных клинических формах: нейроСПИД, онкоСПИД, инфектоСПИД (оппортунистические инфекции). Это зависит от путей внедрения ВИЧ, его преимущественного тропизма к CD4 Т- лимфоцитам или макрофагам, наличия кофакторов (цитомегаловирус, вирус Эпштейна- Барр), дозы инфекта, иммунного статуса организма и др.

В динамике ВИЧ- инфекции можно выделить следующие основные стадии: заражение, латентный период, появление лабораторных признаков инфекции, первичная клиника острой вирусной (ретровирусной) инфекции (эта стадия может отсутствовать), клинический СПИД (иммунодефицит плюс индикаторные болезни). Особое значение имеет выявление лабораторных признаков ВИЧ- инфекции.

Можно выделить три типа инкубации:

- вирусологическую ( от инфицирования до определения в крови вируса или его антигенов) - в среднем 2 - 4 недели;

- серологическую (от заражения до сероконверсии - появления положительных серологических результатов) - в среднем 8 - 12 недель;

- СПИД - инкубацию (равно или более 10 лет). Безусловный иммунологический критерий СПИДа - снижение CD4+ лимфоцитов до 200 клеток в микролитре.

Лабораторная диагностика.

Лабораторная диагностика ВИЧ - инфекции методически базируется на ИФА, иммуноблоте и ПЦР. Основными ее направлениями являются:

- выявление антител к ВИЧ;

- выявление ВИЧ или его антигенов;

- определение изменений в иммунном статусе.

Для выявления антител применяют ИФА с различными тест - системами (лизатными, рекомбинантными, пептидными антигенами ВИЧ-1 и ВИЧ-2). Основная проблема - ложноположительные результаты (перекрестная реактивность gp120, CD4+ рецепторов, белков HLA II класса и др.). Поэтому исследования в ИФА проводят как правило с использованием параллельно нескольких различных тест - систем.

Иммуноблот чаще применяют как подтверждающий тест для выявления антител к отдельным белкам ВИЧ. Антитела к основным внутренним белкам (р17, р24) обнаруживают у 70% инфицированных и примерно у половины больных СПИДом. В иммуноблоте чаще всего выявляются антитела к gp41 (до 85%) и gp160 (до 100%).

В ранние сроки используют выявление в ИФА антигена р24. Наиболее чувствительным методом выявления ВИЧ является ПЦР - диагностика.

Основным клинико - лабораторным показателем диагностики СПИДа у ВИЧ - инфицированных является определение количества CD4+ лимфоцитов. Уровень ниже 200 клеток/мкл является основным критерием СПИДа.

Лечение является одним из наиболее актуальных и до настоящего времени не решенных проблем ВИЧ - инфекции. Теоретически наиболее оправдано применение препаратов, ингибирующих обратную транскрипцию - зидовудин, азидотимидин, диданозин, ставудин и др. Вакцины против ВИЧ находятся в стадии разработки. С учетом высокой изменчивости вируса это очень сложная задача.

№25. Возбудитель сифилиса. Микробиологическая диагностика сифилиса.

СПИРОХЕТЫ

Семейство Spirochaetaceae – патогенны 3 рода:

Treponema (возбу­дитель сифилиса – Т. pallidum, фрамбезии – Т. pallidum subsp. tenue, пинты – Т.carateum);

Borrelia (возбудитель эпидемического возвратного тифа – В. recurrentis, клещевого возвратного тифа – В. persica, В. hispanisa и др.)

Leptospira семейства Leptospiraceae (возбу­дитель лептоспироза – L. interrogans).

Спирохеты имеют штопорообразную извитую форму. Они отличаются друг от друга характером и числом завитков, длиной клеток, а также другими морфологическими и физиологическими признаками.

Все спирохеты – гр–. Большая их часть – свободно живущие мкÒ, в Ò ч-ка обитают как сапрофиты, патогенны немногие.

TREPONEMA PALLIDUM– откры­та в 1905 г. Ф. Шаудином и Э. Гофманом.

Морфология. Спиралевидная (8–12 завит­ков). От концов клеток отходят по 3 жгутика. Плохо воспринимает анилиновые красители, т.к содержит мало НП в #. Только при дли­тельном окрашивании по методу Романовского – Гимзы приоб­ретает слабо-розовый цвет → «бледная».

При действии неблагоприятных факторов (ле­чебных препаратов) → в L-форму, образуют цисты (свернутые в шар, по­крытые непроницаемой муциновой оболочкой). Цисты могут длительное время находиться в Ò больного, не проявляя патогенности. При благоприятных для них условиях цисты становятся спиралевидными, размножаются и восстанавли­вают свою патогенность.

Очень требовательна к составу искусственных пит сред и на обычных средах не размножается, растет на средах, содержащих почечную или мозговую ткань в строго анаэр усл. Длительное культивирование → потеря вирулентности и изменение др биологических свойств (БХ, физиологических). Для сохранения исходных свойств трепонем их пассируютна кроликах – в ткани яичек животных, где они хорошо размно­жаются.

АГ. ПС, липидные и белковые комплексы.

Экология и распространение. Организм человека, Ж!! в естествен­ных условиях не болеют. Заражение – половым путем и редко через предметы обихода. Попадая в окружающую человека среду быстро погибают, малоустойчивы к высыханию, измене­ниям t°С и хим в-вам, к тяжелым Ме (Hg, Bi, As), кислотам и обычным дезинфектантам.

Патогенез. Экспери­ментальное заражение лабораторных Ж!! (крыс, мышей, морских свинок) создает БЕССИМПТОМНУЮ инфекцию. Заражение кроликов в кожу или яичко позволяет размножить, накопить необходимое количество трепонем. Эта модель позволяет сохранять исходные биологические свойства культур, выделенных от больных, и изучать воздействие лекарств и др. Способность трепонем противостоять фагоцитозу, активно внедряться в ткани при повреждающем действии эндотоксина обеспечивает развитие патологи­ческого процесса. После инкубационного периода (в среднем 24–60 дней), на месте внедрения возбудителя возникает без­болезненный плотный инфильтрат – ТВЕРДЫЙ ШАНКР и РЕГИОНАРНЫЙ АДЕНИТ (плотный увеличенный лимфоузел). Это – первичный период, он продолжается 6 нед. Возбудитель размножается, накапливается в большом количестве в первичном очаге.

Затем трепонемы проникают в кровь → гене­рализация, которая сопровождается высыпаниями на коже и слизистых оболоч-ках. Это – вторичный период, возбудитель содержится в элементах сыпи, больной опасен для окружающих. Без лечения период продолжается 2–3 года.

Третичный период– в органах и тканях обнаружива­ются инфекционные гранулемы (гуммы), наступает у нелеченых больных. Этот период продолжается не­сколько лет. При отсутствии кожных высыпаний больной мало­опасен. Возможно поражение ЦНС (прогрессивный паралич) или спинного мозга (спинная сухот­ка). В этот период возбудители обнаруживаются в огром­ном количестве в ткани мозга.

Иммунитет. Восприимчивость человека к сифилису высока. Иммунитет характеризуется защитными клеточ­ными реакциями, способствующими ФИКСАЦИИ трепонем и обра­зованию гранулем, но НЕ ЭЛИМИНАЦИИ возбудителя. Развивается инфекционная аллергия (можно выявить внутрикожным введением убитой взвеси тканевых трепонем). На высоте иммунного ответа трепонемы образуют цисты (ло­кализуются в стенке кровеносных сосудов) → болезнь пе­реходит в стадию ремиссии. При снижении напряженности иммуни­тета → возврат в вегетативную ста­дию, размножение Þ рецидивы.

Образующиеся АТ не обладают защитными свойствами. Способность одних АТ (реагинов) вступать в реакцию с КАРДИОЛИПИНОВЫМ АГ используется в серодиагностике сифилиса.

Перенесенное заболевание не оставляет невосприимчивости. После излечения возможно повторное заболевание.

Лабораторная диагностика. При первичном сифилисе прово­дят микроскопическое исследование. Материалом служит отде­ляемое твердого шанкра, из которого готовят нативные препа­раты. Микроскопию проводят в темном поле зрения.

Широко применяется серодиагностика. Сыворотка крови больного испытывается в реакциях Вассермана, ИФА. Если RW «–», то используют РЕАКЦИЮ ИММОБИЛИЗАЦИИ – инкубируют возбудителя с сывороткой крови обследуемого → теряют подвижность. Сравнивают с контролем (без сыворотки). Если % малоподвижных трепонем <20% Þ «–», если >50% Þ “+”. Также используют РНГА – птичьи эритроциты, нагруженные АГ трепонем + разведённая сыворотка больного Þ “пуговка”=”+”

Профилактика и лечение. Вакцинопрофилактика сифилиса не разработана в связи с отсутствием эффективных вакцин. Для химиотерапии используют АБ.

№26. Хламидии. Микробиологическая диагностика хламидиозов.

ХЛАМИДИИ – облигатные паразитические бактерии, сходны по хим составу с гр–. Полностью зависят от # хозяина, т.к. не способ­ны синтезировать АТФ. В цикле размноже­ния происходит смена 2 разных по морфологии и биологическим свойствам форм (элементарное и ретикулярное тельца). Имеют широкий спектр хозяев в основном – птицы и млекопитающие. Заболевания у человека вызывают хламидий двух видов Chlamydia psittaci и С.trachomatis.

ХЛАМИДИИ ОРНИТОЗА

С.psittaci – возбудитель орнитоза. ИСТОЧНИК – птицы (около 140 видов). У большинства птиц орнитоз протекает как латентная инфекция. В птицеводческих хозяйствах → заражение обслуживающего персонала.

Патогенез и иммунитет. Проникают воздушно-капельным путем, поражают ## эпителия слизистой дыхательных путей и регионарных лимфоузлов. После разрушения зараженных ## → в кровь → в парен­химатозные органы. В ## лимфоидной ткани могут длительно сохраняться и вызывать рецидивы.

В течение заболевания развивается ГЗТ. Образуются АТ, но они не обеспечивают невосприимчивость к повторному заболеванию. Отсутствие гуморальной защиты и аллергия замедленного типа способствуют возникновению рецидивов.

Диагностика. Выделение возбудителя из крови возможно в первые 2–3 нед болезни. Материалом заражают белых мышей в мозг или куриные эмбрионы в желточный мешок. В ## мозга или желточного мешка обнаруживают включения, которые выявляют иммунофлюоресцентным или иммуноферментным методами.

Серодиагностику проводят в РСК, РТГА, ИФА с использо­ванием соответствующих АГ из возбудителя. Аллерги­ческое состояние – внутрикожные пробы со специфическим аллергеном.

Профилактика и лечение. Для лечения и экстренной профилактики – тетрациклиновые АБ.

ДРУГИЕ ХЛАМИДИИ

С. trachomatis – патогенный для человека вид, делится на 15 сероваров: L-1, L-2, L-3 являются возбудителями пахового лимфогранулематоза; А, Ва, В и С— трахомы; остальные, от D до К – уретрит и заболевания глаз. Резервуар – человек. Ж!! в естественных условиях не вос­приимчивы. Передача – при прямом контакте и через зараженные предметы.

ПАХОВЫЙ ЛГМ– венерическая болезнь, распространена в странах с тропическим и субтропическим климатом. Х-ся цикличностью течения, выделяют 3 периода: Первичный– через 1,5-2 нед после зара­жения, на месте внедрения возникает единичный пузырёк → эрозия и язва. Вторичный – генерали­зация процесса, а третичный– формируется фистульно-спаечный процесс промежности.

Заболевание сопровождается аллергией (выявляется внутрикожной реакцией с аллергеном из хламидий). После перенесенного заболевания формируется напряженный ИММУНИТЕТ.

ДИАГНОСТИКА – микроскопия мазков-отпечатков содержимого лимфати­ческих узлов. Выделение возбудителя производится при посеве материала в культуры клеток. Для серодиагностики используется РСК и ИФ.

Специфическая профилактика отсутствует.

ТРАХОМА – хрон инфекционное заболевание, х-ся поражением ## конъюнктивы глаза. При этом в цитоплазме хламидий образуют включения. Обнаружение в соскобах конъюнктивы этих включений имеет диагностическое значение.

Для лечения применяют АБ тетрациклинового ряда. Без лечения → потеря зрения.

КОНЪЮНКТИВИТ НОВОРОЖДЕННЫХ – инфекционное заболевание новорожденных. Ребенок заражается в родовых путях больной матери. Помимо конъюнктивита могут возникнуть пневмония или гастроэнтерит. Хламидийным конъюнктивитом могут болеть взрослые люди при заражении во время купания в инфицированных водоемах.

УРЕТРИТ – венерическое заболева­ние, занимает по частоте возникновения второе место после гонореи. При данном заболевании хламидии поражают цилин­дрический эпителий уретры. М.б. причиной выкидышей, бесплодия.

БОЛЕЗНЬ РЕЙТЕРА – тяжелый системный хламидиоз, развивается после острой инфекции мочеполовых органов или кишечника у лиц с дефектами иммунной системы. Клинически проявляется триадой: уретрит, конъюнктивит, артрит.

Лабораторная диагностика проводится путем микроскопиче­ского исследования мазков, окрашенных краской Романов­ского–Гимзы. Наличие в ## элементарных телец розового цвета, ретикулярных телец голубовато-синего цвета – положительный диагноз. Также используют иммунофлюоресцентный метод с моноклональными АТ.

Для серодиагностики применяют реакцию ИФА, РСК. Достоверным является 4-кратное нарастание титра антител во 2-й пробе сыворотки крови. Выделение хламидий производится редко. Для этого заражают патологическим материалом клеточные культуры.

№27. Арбовирусы. Вирусологическая диагностика арбовирусов.

Семейство Rhabdoviridae включает более 60 вирусов, инфицирующих млекопитающих, рыб, насекомых и растения; в семействе выделяют два рода – Vesiculovirus и Lyssavirus; наибольшую опасность для человека представляет вирус бешенства. Способность некоторых рабдовирусов размножаться в клетках членистоногих и млекопитающих позволила рассматривать некоторые из них как возбудителей арбовирусных инфекций. Рабдовирусы отличают пулевидная форма, наличие оболочки, спиральная симметрия; геном образован РНК. Средние размеры вириона 180х75 нм; один конец закруглён, другой – плоский; поверхность выпуклая с шарообразными структурами. Сердцевина вириона симметрично закручена внутри оболочки по продольной оси частицы. Вирусная оболоч-ка состоит из двойно­го липидного слоя, включающего внешние поверхностные гликопротеиновые структуры. Мембрану образуют поверхностный гликопротеин (G) и два негликозилированных белка (Ml и М2).Репликативный цикл реализуется в цитоплазме клетки.

Бешенство. Острая инфекция ЦНС, сопровождающаяся дегенерацией нейронов головного и спинного мозга; летальность для человека составляет 100%; возбудитель – вирус рода Lyssavirus. Заболевание известно с глубокой древности; во всяком случае, ещё в «Илиаде» греки называли троянца Гектара «бешеной собакой» (очевидно, это первое литературное упоминание бешенства).

Везикулярный стоматит. Возбудитель относят к роду Vesiculovirus; выделяют два антигенных варианта. По своей эпидемиологии и экологии – типичный арбовирус. Переносчики – различные комары, в организме которых он размножается. Отличительная особенность вирусов везикулярного стоматита способность индуцировать выработку ИФН в больших титрах и высокая чувствительность к нему. Клинически заболевание проявляется вези­кулярными высыпаниями на слизистой оболочке рта, дёсен и глотки.

Клещевой (русский дальневосточный) и центрально-европейский энцефалиты. Возбудитель выделен Л.А. Зильбером, Е.Н. Левкович, М.П. Чумаковым и др. (1937). Резервуар и переносчик вируса – клещи Ixodes persulcatus и Ixodes ricinus (переносит вирус более благоприятно протекающего европейского варианта). Дополнительный резервуар – различные животные и птицы. У последних развивается бессимптомная инфекция с вирусемией. Заражение человека происходит после укусов инфицированных клещей или употребления в пищу сырого молока коз и коров. После укуса переносчика вирус попадает в кровоток и первично реплицируется в лимфатических узлах, эндотелиоцитах, клетках печени и селезёнки. В дальнейшем возбудитель распространяется гематогенным и лимфогенным путями, проникая в ЦНС. Вирус поражает двигательные нейроны передних рогов шейного отдела спинного мозга, мозжечок и мягкую оболочку головного мозга. Инкубационный период варьирует от 1 сут до месяца. Острые формы разделяют на лихорадочные, менингеальные, менингоэнцефалитические, полиомиелитические и полирадикулоневритические. Для них характерны явления общей инфекционной интоксикации, общемозговые, оболочечные и очаговые неврологические симптомы. Преобладание ряда из перечисленных симптомов определяет клиническую форму болезни. Благоприятно протекают лихорадочная и менингеальная формы; прогноз прочих поражений сложен. Хронические поражения – синдром хронического полиомиелита; синдром бокового амиотрофического склероза и эпилепсия кожевниковского типа.

Омская геморрагическая лихорадка. Возбудитель выделил М.П. Чумаков (1947). Резервуар и переносчик вируса – клещи рода Ixodes; дополнительный резервуар – различные животные и птицы; у последних развивается бессимптомная инфекция с вирусемией. Заражение человека происходит после укусов инфицированными клещами; при контакте с заражёнными животными (например, ондатрами) или употреблении в пищу сырой воды. После укуса переносчика вирус проникает в кровоток и реплицируется в эндотелии капилляров кожи и различных органов. Клинически проявляется лихорадкой и геморрагиями различной локализации; прогноз благоприятный (летальность не превышает 0,5-3%).

Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций включает выделение возбудителя и выявление противовирусных AT. Для выделение вируса наиболее универсальный способ – внутримозговое заражение 1-3-дневных мышат-сосунков; после появления признаков болезни мозг пассируют, через 3-4 пассажа вирус достигает высокого титра, и его можно использовать для приготовления Аг для идентификации в РТГА и РСК с наборами иммунных сывороток. Окончательную идентификацию проводят в РН – наиболее специфичной реакции. Следует помнить, что работа с материалом (обычно кровь) представляет большую опасность (в плане ингаляционного заражения) и должна производиться в специализированных лабораториях.

Вируспецифические AT. Через 6-7 дней после заражения в крови появляются антигемагглютинины, к концу 2 нед – комплементсвязывающие AT, а на 3-4 нед – нейтрализующие AT.

№28. Возбудитель туляремии. Микробиологическая диагностика туляремии.

Francisella tularensis. Название получил по наименованию района Туляре в Калифорнии, где был выделен.

Морфология. Очень мелкие, полиморфные, кокко- и палочковидные гр– бактерии. Спор не образу­ют, жгутиков нет, образуют небольшую капсулу.

Факультативные анаэробы, на простых пит средах не растут. Для размножения требуют цистеина как стимулятора роста. Культивирование возможно на средах, содержащих яичный желток, на кровяном агаре с добавлением глюкозы и цистеина. На плотных средах – небольшие, беловатого цвета колонии.

Ферментативная активность мало выражена, БХ свойства нестабильны. Оксидазоотрицательны, продуцируют H₂S.

АГ. Соматические и локализованные в клеточной стенке АГ индуцируют синтез аг­глютининов, преципитинов. Есть АГ общность с дру­гим видом – Francisella novicida (непатогенный для человека), и перекрестное реагирование в РА с бруцеллами и иерсиниями.

Экология и распространение. Туляремия – зоонозное забо­левание с природной очаговостью. ЕСТЕСТВЕННЫЕ ХОЗЯЕВА – грызуны.

В окружающей среде сохраняет жиз­неспособность долго. С ↑t°С сокращают­ся сроки выживаемости. К действию ↑t°С малоустойчив. Чувствителен к дезинфектантам и многим АБ.

ЗАРАЖЕНИЕ происходит при прямом контакте с больными животными или трупами погиб­ших, а также через инфицированную воду и пищевые продукты. Возможна передача клещами, комарами, слепнями, которые являются переносчиками. От человека, больного туляремией, здоровые люди практи­чески не заражаются !!!

Патогенез и иммунитет. В Ò – проникает через кожу и слизис­тые оболочки глаз, рта, носа, ОД и ЖКТ. Обладает ↑ инвазивной способностью, может проходить через неповрежденные покро­вы. Через 2–7 дней инкубационного периода проникает в лимфоузлы, интенсивно размножается и появляется в крови. В зависимости от путей проникновения развиваются различные клинические формы туляремии: бубон­ная, язвенно-бубонная, глазная, ангинозно-бубонная, кишечная, легочная, может быть первично-септическая с пора­жением лимфатических узлов.

Болезнетворность связана также с действием эндотоксина.

Туляремия сопровождается развитием специфической аллер­гии, возникающей на 3-5 дни и сохраняю­щейся после выздоровления в течение многих лет, а иногда по­жизненно.

После заболевания остается стойкий, длитель­но сохраняющийся иммунитет.

Диагностика (в специальных режимных лабораториях) – серологи­ческим методом. Со 2-й недели заболевания определяют в сы­воротке крови АТ в РА и РНГА (в парных сыворотках).

Выделить культуру посевом на среды обычно не удается Þ материалом (пунктат из бубона, соскоб из язвы, отделяемое конъюнктивы, налет из зева, мок­рота, кровь) заражают белых мышей или морских свинок. Жи­вотные погибают на 4-12 день. Из их органов делают мазки-отпечатки и посев на свернутую желточную среду.

АГ определяют реакцией термопреципита­ции, в которой исследуемый материал – прокипяченная взвесь селезенки и печени погибшего животного.

Ранним методом диагностики туляремии является постанов­ка аллергических проб с тулярином. Проба становится положи­тельной с 3-5 дня заболевания.

Профилактика и лечение. Профилактика – общая (борьба с грызунами, пере­носчиками), СПЕЦИФИЧЕСКАЯ –иммунизация людей живой вакциной. Эффективность этой вакцины высока, однократная накожная вакцинация создает иммунитет на 5-6 лет. Для лечения применяют АБ.

№29. Возбудитель сибирской язвы. Микробиологическая диагностика сибирской язвы.

В 1786-88 гг. в России, на Урале были большие эпиде­мии заболевания, которое назвали «Сибирская язва». Другое название – антракс (углевик, карбункул) и наименование возбудителя В. anthracis происходит от характерного вида гнойно-воспалительного очага на коже, в центре которого образуется черный струп, по­хожий на уголь.

Род Bacillus семейства Bacillaceae.

Морфология. Гр–, крупная неподвижная палоч-ка. Вне Ò, в присутствии О₂ образует овальные споры (< диаметра клетки) расположенные центрально. В Ò, на пит средах, содержащих кровь или сыворотку, образуют капсулу. В окрашенных препаратах расположены цепоч-ками, выглядят обрубленными на концах, так что их цепи похожи на БАМБУКОВУЮ ТРОСТЬ.

Аэроб или факультативный анаэроб. Хорошо размножаются на простых пит средах. На поверхности агара – шероховатые колонии с неровными краями (локоны или льви­ная грива), в бульоне – белые хлопья, оседающие на дно пробирки, а сам бульон при этом остается прозрачным. Посев уколом в столбик желатина – опрокинутая «елоч-ка».

Высокая БХ активность: разжи­жает желатин, гидролизуют крахмал, казеин, раз­лагают ряд углеводов (глюко­зу, мальтозу и др.), восстанавливают нитраты. На пита­тельном агаре с пенициллином – превращаются в протопласты в виде шаров, расположенных цепью (феномен «жем­чужного ожерелья»).

АГ. Имеют ВИДОВОЙ АГ белковой природы (в капсуле), и ГРУППОВОЙ (сома­тический, ПС природы, в Ò стенке). Соматический АГ термостабилен, не разрушается при кипячении → реакция термопреципитации по Асколи, которой вы­являют сибиреязвенные АГ в различных материалах (тру­пах, коже, шерсти животных) – АГ извлекают экс­тракцией при кипячении.

Экология и распространение. В естественных условиях болеют Ж!! (крупный и мелкий рогатый скот, лошади, свиньи). Они заражаются алиментарным путем, поглощая вместе с кормами споры. Патологический процесс развивается в кишечнике.

Сибирская язва – зоонозное заболевание. Человек заража­ется от больных Ж! при контакте, а также через инфицированные предметы, изделия из зараженного сырья (меховые, кожаные, изделия из шерсти), мясо больных животных. Возможен перенос кровососу­щими насекомыми (слепнями, мухами-жигалками).

В окр среде, главным образом в почве, куда попа­дает возбудитель с испражнениями, мочой больных или трупами животных, сибиреязвенные палочки образуют очень устойчивые эндоспоры (в почве сохраняются десятилетиями, дезинфицирующие вещества уби­вают споры только через несколько часов действия). Споры тер­моустойчивы и выдерживают даже кипячение в течение 20 мин. Вегетативные формы при кипячении гибнут мгновенно.

Патогенез. Бациллы образуют токсин. Он состоит из трех ком­понентов:

I – «отечный фактор», вызывает дермонекротическую реакцию у морских свинок,

II – летальный токсин («мыши­ный» токсин) вызывает отек легких и тяжелую гипоксию

III — протективный АГ.

Патогенность обусловливает так­же капсула, являющаяся фактором вирулентности. Она обла­дает антифагоцитарной активностью, способствует фиксации на ## МКÒ, бескапсульные культуры невирулентны.

В зависимости от места проникновения и выз­ванного первичного поражения сибирская язва проявляется в 3 клинических формах: кожной, кишечной и легочной. Чаще встречается КОЖНАЯ форма – в месте локализации образуется карбункул. КИШЕЧНАЯ – проявляется тяжелой интоксикацией, тошнотой, рвотой, поносом с кровью. ЛЁГОЧНАЯ – тяжёлой бронхопневмонией. Две по­следние формы протекают особенно тяжело и обычно заканчиваются летально. У ослабленных людей м.б. сибиреязвенная септицемия со смертель­ным исходом.

Иммунитет – про­чный, основную роль играют фагоцитарная реакция и АТ. В течение болезни развивается специфическая сенсибилизация, которую