Инструктаж по технике С правилами техники
РАБОЧАЯ ТЕТРАДЬ
(практические занятия по микробиологии)
для студентов медицинских техникумов
Студент_______________ Преподаватель_______________
Курс____ группа №_____
ПРАВИЛА РАБОТЫ В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ:
1.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
2.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
3.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
4.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
5.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Инструктаж по технике С правилами техники
безопасности провел______________ безопасности
ознакомлен_______________
ТЕМА: Устройство бактериологической лаборатории и правила работы с ней.
Бактериоскопический метод исследования. Царство вирусов. Диагности-
Ка вирусных заболеваний.
Классификация, морфология и физиология микроорганизмов. Влияние
Факторов внешней среды на микроорганизмы.
ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ЗАНЯТИЯ: 270 минут
МЕСТО ПРОВЕДЕНИЯ ЗАНЯТИЯ: кабинет инфекционных болезней
и микробиологии.
ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:
1. Ознакомиться с основными положениями микробиологии и этапами её развития. Изучить основные задачи микробиологии.
2. Изучить классификацию, морфологию и физиологию микроорганизмов.
3. Отработать технику приготовления фиксированного препарата, окраска его простым способом и по Грамму, иммерсионной микроскопии с целью изучения морфологии микроорганизмов.
4. Изучить и систематизировать основные положения вирусологии.
Основные вопросы, разбираемые на занятии | Требуемый уровень усвоения их студентами |
1. Предмет и задачи медицинской микробиологии. | Знать |
2. Оснащение и правило работы бактериологической лаборатории. | Знать |
3. типы микроскопов и правила иммерсионной микроскопии. | Знать |
4.Принципы классификации микроорганизмов. | Знать |
5. Основные морфологические группы бактерий. | Иметь представление |
6. особенности морфологии простейших, грибов, риккет-сий, хламидий, актиномицетов, спирохет, микоплазм. | Иметь представление |
7. Простые и сложные методы окраски. | Знать |
8. Бактериоскопический метод диагностики, его достоинст- ва и недостатки. | Знать |
9. Питание бактерий. Типы питания. Прототрофы, ауксо трофы. | Иметь представление |
10. Дыхание бактерий. | Иметь представление |
11. Влияние физических факторов на микроорганизмы: воздействие температур, излучений. | Знать |
12. Общее характеристика царства Вира. Отличия Вира от Прокариота и Эукариота. | Знать |
13. Классификация и таксономия вирусов. | Знать |
14. Строение вирусов. Этапы взаимодействия вируса с чувствительной клеткой. | Знать |
15. Методы диагностики вирусных инфекций. | Знать |
16. Бактериофаги и их практическое использование. | Знать |
Отрабатываемые практические навыки
1. Приготовление фиксированного препарата. Уметь
2. Окраска препарата по Грамму. Уметь
3. Иммерсионная микроскопия препарата с целью изучения морфо- Уметь
логии микроорганизмов.
4. Техника взятия крови для выполнения мазка и толстой капли кро- Уметь
ви.
ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ И ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ
Дополните.
ТАКСОНОМИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ
Вид____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Чистая культура _________________________________________________________
________________________________________________________________________Штамм _________________________________________________________________
________________________________________________________________________
Клон ___________________________________________________________________
________________________________________________________________________
Серотип ________________________________________________________________
________________________________________________________________________
Заполните таблицу. Зарисуйте демонстрационные препараты.
ОСНОВНЫЕ ТАКСОНОМИЧЕСКИЕ ГРУППЫ МИКРООРГАНИЗМОВ, ИМЕЮЩИХ МЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Определение | Пример |
Царство ЭУКАРИОТА | |
Простейшие | |
Грибы | |
Царство ПРОКАРИОТА | |
Бактерии | |
Микоплазмы | |
Риккетсии | |
Хламидии | |
Спирохеты | |
Царство ВИРА |
МОРОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ. БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД
ДИАГНОСТИКИ.
Нарисуйте схему ультраструктуры бактериальной клетки.
Обозначьте органоиды.
1.__________________________
2.__________________________
3.__________________________
4.__________________________
5.__________________________
6.__________________________
7.__________________________
8.__________________________
9.__________________________
ФИЗИОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ
Дополните
Прототрофы -______________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ауксотрофы -______________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________
ДЫХАНИЕ БАКТЕРИЙ
Аэробы -__________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Факультативные анаэробы -__________________________________________________
__________________________________________________________________________
Облигатные анаэробы -______________________________________________________
__________________________________________________________________________
Микроаэроилы -____________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Капнофилы -_______________________________________________________________
__________________________________________________________________________
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТКА ВИРУСОВ
1._________________________________________________________________________
2._________________________________________________________________________3._________________________________________________________________________
4._________________________________________________________________________
5._________________________________________________________________________
6._________________________________________________________________________
Методы культивирования вирусов
1._________________________________________________________________________
2._________________________________________________________________________
3._________________________________________________________________________
Методы диагностики вирусных инфекций.
1._________________________________________________________________________
2._________________________________________________________________________
3._________________________________________________________________________
Этапы взаимодействия вируса с клеткой хозяина
и его репродукции (размножения).
1._________________________________________________________________________
2._________________________________________________________________________
3._________________________________________________________________________
4._________________________________________________________________________
5._________________________________________________________________________
6._________________________________________________________________________
Типы взаимодействия вируса и клетки.
1._________________________________________________________________________
2._________________________________________________________________________
3._________________________________________________________________________
4._________________________________________________________________________
Структура вириона.
1._________________________________________________________________________
2._________________________________________________________________________
3._________________________________________________________________________
4._________________________________________________________________________
5._________________________________________________________________________
Нарисуйте схематическое изображение вирусной частицы вирионов вирусов гриппа и ВИЧ, обозначьте структурные компоненты.
1.____________________________________1.___________________________________
2.____________________________________2.___________________________________
3.____________________________________3.___________________________________
4.____________________________________4.___________________________________
5.____________________________________5.___________________________________
6.____________________________________6.___________________________________
БАКТЕРИОФАГИ
Дополните
Бактериофаг-______________________________________________________________
Вирулентный бактериофаг-__________________________________________________
Умеренный бактериофаг-____________________________________________________
ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИОФАГОВ В МЕДИЦИНЕ
Фаготерапия-______________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Примеры:_________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Фагопрофилактика-_________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Примеры:__________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Фагодифференцировка-______________________________________________________
__________________________________________________________________________
ТЕМА:Нормальная микрофлора тела человека. Дисбактериоз.
Бактериологический метод диагностики. Техника взятия материала для бактериологического исследования инфекционных заболеваний.
Дополните
Нормальная микрофлора человека – это_____________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
ДИСБАКТЕРИОЗ
Дисбактериоз____________________________________________________________
________________________________________________________________________
Требования, предъявляемые к питательным средам.
1._________________________________________________________________________
2._________________________________________________________________________
3._________________________________________________________________________
4._________________________________________________________________________
5._________________________________________________________________________
6._________________________________________________________________________
5. Зарисуйте питательные среды с ростом микроорганизмов:
1.МПА
основа___________
2.МПБ
основа___________
3. Среда Эндо основа___________
дифференциальный фактор______
индикатор_____________________
4. Среда ЖСА основа___________
элективный фактор_____________
дифференциальный фактор_________
Заполните таблицу
Й день исследования.
Посев исследуемого материала № _________ на ___________________________________
_____________________________________________________________________________
Инкубация в термостате при _______ °C 18-24 часа.
Й день исследования.
1. Изучение морфологических, тинкториальных и культуральных свойств выросших микроорганизмов:
Изучаемые свойства | Тип колонки | ||
Культуральные: форма колонии | |||
Размер колонии | |||
Цвет колонии | |||
Характер края | |||
Характер поверхности | |||
Консистенция | |||
Морфологические: | |||
Окраска по Граму |
3. Откол колонии Грамм(-) палочек на скошенный МПА.
Инкубация в термостате при______ °C 18 – 24.
Й день исследования.
1. Визуальная и микроскопическая проверка чистоты выделенной фигуры.
Результат:______________________________
_______________________________________
2. Постановка биохимических тестов:
А) Каталаза
Б) Цитохромоксидаза
На основании морфологических, тинкториальных свойств и типа дыхания можно предположить, что выделенная культура относится к семейству Enterebakteriaceae.
В) Постановка биохимических тестов в «Панели биохимической дифференцировки энтеробактерий»
Инкубация в термостате при ______ °C 4 часа.
3. Посев для определения чувствительности выделенной культуры к антибиотикам методом стандартных дисков.
4. Учет биохимических свойств в ПБДЭ.
глю лак сах ара адо мал ман сор
Глю-глюкоза Адо-адонит «+» - желтый
Лак-лактоза Мал-мальтоза «-» - красный
Сах-сахароза Ман-маннит
Ара-арабиоза Сор-сорбит
5. Выдача предварительного ответа.
Из материала от больного выделена культура________________________________
Й день исследования.
1. Учет чувствительности к антибиотикам.
Антибиотик | Диаметр зоны отсутствия роста, мм | Характеристика штамма (У.УУ.Ч) |
2. Выдача окончательного ответа.
Из материала от больного выделена культура_______________________________
Чувствительная к ______________________________________________________
(конец протокола)
Сбор кала.
Цель:диагностическая
Показания: по назначению врача (диагностика инфекционных заболеваний, сопровождающихся диареей).
Противопоказания: нет
Приготовьте: 1. штатив;
2. стерильные пробирки со стерильной палочкой и консервантом;
3. сухие стерильные пробирки с пробкой;
4. стерильный шпатель (петлю, ложечку);
5. перчатки;
6. клеенку;
7. бланки направлений в лабораторию;
Подготовка пациента:1. Психологическая подготовка пациента
2. Объяснение смысла манипуляции пациенту
3. Инструктаж пациента
Последовательность действий:
1.Забор кала из горшка или судна.
1.1 Возьмите стерильную палочку, петлю или ложечку ( при жидком стуле) и проведите забор кала из судна в количестве 1-2 г, выбирая наиболее подозрительные места, но без крови.
1.2 Поместите материал в сухую стерильную пробирку (банку), закройте пробкой.
1.3 Выпишите направление в лабораторию.
1.4 Проследите за доставкой материала в лабораторию.
2.Забор кала из прямой кишки ( при отсутствии стула, при профосмотре декретированного контингента, при обследовании контактировавших с больными ОКИ и лиц, находящихся под диспансерным наблюдением):
2.1 Уложите пациента на бок, на клеенку с согнутыми в коленях ногами.
2.2 Наденьте перчатки, дополнительный халат.
2.3 Достаньте из пробирки стерильную палочку, смоченную в консерванте.
2.4 Разведите левой рукой ягодицы пациента.
2.5 Осторожно введите вращательным движением палочку в задний проход на глубину 7-10 см.
2.6 Извлеките палочку и поместите ее в стерильную пробирку с консервантом, не касаясь краев пробирки.
2.7 Снимите перчатки, обработайте их и клеенку 3% раствором хлорамина.
2.8 Выпишите направление в лабораторию.
2.9 Проследите за доставкой материала в бактериологическую.
Примечание: при взятии кала на бактериологическое исследование в вечернее и ночное время, пробирка с материалом в консерванте должна храниться в холодильнике.
Сбор мочи
Цель: диагностическая.
Показания: по назначению врача.
Противопоказания: нет
Приготовьте: 1. стерильный флакон с крышкой
2. бланки направлений в лабораторию
Подготовка пациента:1. Психологическая подготовка пациента.
2. Объяснение смысла манипуляции пациенту.
3. Инструктаж пациента.
4. Проведите пациенту гигиенический туалет
наружных половых органов ( при невозможности
провести процедуру самим пациентом).
Последовательность действий:
1. Попросите пациента собрать мочу в стерильную банку из средней порции мочи.
2. Поставьте банку с мочой в туалетную комнату.
3. Выпишите направление в бактериологическую лабораторию, проследите за доставкой мочи в лабораторию не позднее, чем через 1 час после её сбора.
Примечание: из-за опасности инфицирования мочевого пузыря забор мочи для бактериологического исследования проводят выше описанным способом, но иногда приходится прибегать к катетеризации мочевого пузыря.
Дополните.
Иммунитет – это__________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Дополните
Антигены________________________________________________________________
Свойства антигенов -_______________________________________________________
_________________________________________________________________________
Дополните
Антитела-_______________________________________________________________
_________________________________________________________________________
Заполните таблицы
Заполните таблицы
ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ЗАНЯТИЯ:
МЕСТО ПРОВЕДЕНИЯ ЗАНЯТИЯ:кабинет инфекционных
болезней и микробиологии
ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:
1. Изучить механизмы и методы постановки различных серологических реакций и их практическое применение.
2. Получить представление о принципах приготовления биопрепаратов и их практического использования.
3. Познакомиться с оценкой иммунного статуса организма, с врожденными и приобретенными иммунодефицитами и принципами иммунокоррекцией.
Основные вопросы, разбираемые на занятии | Требуемый уровень усвоения их студентами |
1. Взаимодействие антигена с антителом. Серологические реакции и их практическое применение. | Знать. |
2. Клиническая иммунология. Иммунный статус организма и методы оценки естественной резистентности, гуморального и клеточного иммунитета. | Иметь представление. |
3. Иммунодефициты, врожденные и приобретенные. Синдром приобретенного иммунодефицита. | |
4. Принципы и задачи иммунопрофилактики, иммунотерапии и иммунокоррекции заболеваний. | Иметь представление. |
5. Препараты для иммунопрофилактики (вакцины, анатоксины, сыворотки, иммуноглобулины). Получение, способы их применения, побочное действие. Иммунотерапевтические препараты. Способы введения в организм. | Знать. |
6. Правила работы с бактерийными препаратами. | Уметь. |
Отрабатываемые практические знания.
1. Взятие крови из вены для постановки Уметь.
серологической реакции и доставка её
в лабораторию.
2. Постановка реакции агглютинации на стекле Уметь.
реакции агглютинации для определения антител.
3. Учет результатов серологических реакций. Уметь.
ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ И ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ
Реакция типа АГ + АТ
Область применения:
Реакции АГ + АТ используются для определения вида микроорганизма по антигенным свойствам (идентификация) или для серодиагностики ( качественного и количественного определения антител в сыворотке крови), при этом неизвестный компонент определяют по известному (диагностическая сыворотка, диагностикум).
В серодиагностике бактериальных инфекций чаще применяют реакцию агглютинации (РА), реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА), реакцию связывания комплемента (РСК). При вирусных заболеваниях – РСК, реакцию нейтрализации (РН), реакцию торможения гемагглютина-ции (РТГА).
Возможно применение реакций типа АГ + АТ для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний, при этом часто используются реакции иммунофлюоресцепции (РИФ), иммуно-ферментный анализ (ИФА) и др.
Для идентификации микроорганизмов по антигенным свойствам (серотипирования) используют диагностические агглютинирующие сыворотки, получаемые путем гипериммунизации и перед употреблением определяют титр агглютинирующей сыворотки.
Титром агглютинирующей сыворотки называется ее максимальное разведение, в котором наблюдается агглютинация.
ДИАГНОСТИЕСКИЕ КРИТЕРИИ СЕРОДИАГНОСТИКИ
1. Диагностический титр – величина титра антител в сыворотке крови к конкретному возбудителю, превышение которой расценивается как диагностический признак.
2. Нарастание титра антител – не менее, чем 4-х кратное увеличение титра антител к данному возбудителю, наблюдающееся при исследовании парных сывороток (сывороток, взятых у больного с интервалом 7-10 дней). Более достоверный критерий серодиагностики.
Поскольку иммунный ответ при большинстве инфекций развивается с 5-7 дня, а максимум антител определяется лишь в период реконвалесценции, серодиагностика не пригодна для ранней диагностики и используется в целях ретроспективной диагностики.
1. Учтите реакции:
Реакция агглютинации (РА)
Принцип метода: Привзаимодействии антител и корпускулярных антигенов (микробные или другие клетки) в растворе электролита происходит склеивание (агглютинация) антигенов.
Реакция непрямой (нагрузочной) гемагглютинации (РНГА)
Принцип метода: Реакции, в которой происходит склеивание эритроцитов с нагруженными с ними антигенами (эритроцитарный диагностикум) или антителами «укрупнителями» для придания молекулярным антигенам корпус-кулярности.
РНГА используется очень широко, благодаря высокой чувствительности особенно на ранних стадиях заболевания.
«+» феномен РНГА – «зонтик»
«-» феномен РНГА – «пуговка»
Иммуно-ферментный анализ (ИФА)
Принцип метода: Антитела к искомому антигену фиксируют на носителе (в лунках полистироловой панели). Вносят исследуемый материал, добавляют антитела меченые ферментом, и хромогенный субстрат. Все этапы разделяются интенсивной промывкой лунок при соответствии АГ и АТ жидкость в лунке по завершении реакции меняет цвет, причем интенсивность окрашивания пропорционально количеству искомого компонента.
«+» феномен ИФА – появление окрашивания
«-» феномен ИФА – отсутствие окрашивание
Заполните таблицу
ИММУНОДЕФИЦИТЫ
Иммунодефицит - __________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________
СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
ВАКЦИНЫ
Живые | Убитые | Химические | Анатоксины | |
Содержат | ||||
Способ получения | ||||
Применяются для создания | ||||
Пример |
Дополните
Вакцины - _________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Аутовакцина_______________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Ассоциированная вакцина ___________________________________________________
__________________________________________________________________________
Сорбированная вакцина_____________________________________________________
__________________________________________________________________________
СЫВОРОТКИ
Сыворотка_________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Гамма-глобулин____________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Для экстренной специфической профилактики используют________________________
__________________________________________________________________________
Для заблаговременно специфической профилактики используют___________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Для вакцинотерапии используют______________________________________________
__________________________________________________________________________
АНАТОКСИНЫ
1. Дифтерийный очищенный адсорбированный (АД-анатоксин)
2. Дифтерийно-столбнячный очищенный адсорбированный (АДС-анатоксин)
3. Столбнячно-очищенный адсорбированный (АС-анатоксин)
4. Стафилококковый нативный и очищенный адсорбированный
ВАКЦИНЫ ЖИВЫЕ
1. Бруцеллезная профилактическая накожная сухая
2. БЦЖ для внутрикожного применения сухая
3. Гриппозная интраназальная для взрослых
4. Гриппозная интраназальная для детей
5. Гриппозная пероральная для профилактики
6. Кривая живая
7. Полиомиелитная Сэбина тип 1,11,111 пероральная (ШВС)
8. Против КУ-лихорадки сухая (М-44)
9. Против желтой лихорадки (ВЖЛ)
10. Оспинная сухая
11. Сибиреязвенная для людей сухая (СТИ)
12. Сыпнотифозная живая комбинированная сухая Е (ЖКСВ-Е)
13. Туляремийная накожная сухая
14. Чумная сухая (εV)
ВАКЦИНЫ УБИТЫЕ И ХИМИЧЕСКИЕ
1. Антифагин стафилококковый
2. Антирабическая сухая (МИВП)
3. Бруцеллезная лечебная
4. Брюшнотифозная спиртовая, обогащенная Ви-антигеном
5. Генококковая
6. Дизентерийная спиртовая Флекснера-Зонне сухая
7. Против клещевого энцефалита человека культурная инактивированная
8. Коклюшно-дифтерийно-столбнячная адсорбированная (АКДС)
9. Лептоспирозная
10. Стафилококковая
11. Тифо-паразотифозная-столбнячная (ТАВТе) химическая сорбированная
12. Холерная и Эль-Тор
БАКТЕРИОФАГИ
1. Брюшнотифозный поливалентный с кислоустойчивым покрытием сухой
2. Дизентерийный поливалентный с кислоустойчивым покрытием сухой
3. Дизентерийный жидкий
4. Коли жидкий
5. Коли-протейный жидкий
6. Протейный жидкий
7. Сальмонеллезный групп А, В, С, Д, Е жидкий
8. Стафилококковый жидкий
9. Стрептококковый жидкий
АЛЛЕРГЕНЫ
1. Дизентерин
2. Дифтерийный
3. Малеин
4. Орнитозный
5. Токсоплазмин
6. Антраксин
7. Бруцеллин
8. Тулярин (для внутрикожного и накожного применения)
9. Туберкулин альттуберкулин Коха (АТК), сухой очищенный туберкулин (PPD)
10. Дифтероида
11. Палочки дифтерийной нетоксигенной
12. Палочки ложнодифтерийной
13. Нейссериикатарралис
14. Палочки кишечной
15. Палочки синегнойной
16. Пневмококка групповой
17. Протея (мирабилис, моргании, реттгери)
18. Стафилококка (белого, гемолитического, золотистого)
19. Стафилококка очищенный
20. Стрептококка (гемолитического) очищенный
21. Энтерококка
КАЛЕНДАРЬ ПРИВИВОК
В один год:
противокоревая вакцина
В 1 год 6 мес. –вакцинация против паротита и первая ревакцинация АКДС или АДС (то есть через 1 год после 1 вакцинации АКДС)
На втором году:
Две прививки против полиомиелита с интервалом 1,5 месяца.
на третьем году:
Две прививки против полиомиелита с интервалом 1,5 месяца.
(старше 3-х лет – АКДС не делают, делают АДС без «К»)
в 6-7 лет (1 класс школы):
Вторая ревакцинация АДС; первая ревакцинация против кори; полиомиелитная вакцинация однократно.
В 11 лет:
АДС 0,5 мл внутримышечно однократно и в последующем 1 раз каждые 10 лет.
в 15-16 лет (9 класс школы):
Ревакцинация против полиомиелита однократно.
Интервалы между разными прививками 2 месяца.
РАБОЧАЯ ТЕТРАДЬ
(практические занятия по микробиологии)
для студентов медицинских техникумов
Студент_______________ Преподаватель_______________
Курс____ группа №_____
ПРАВИЛА РАБОТЫ В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ:
1.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
2.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
3.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
4.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
5.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Инструктаж по технике С правилами техники
безопасности провел______________ безопасности
ознакомлен_______________
ТЕМА: Устройство бактериологической лаборатории и правила работы с ней.