Определение концентрации гемоглобина
В КРОВИ МЕТОДОМ САЛИ
Определение количества гемоглобина в крови производится колориметрическим методом Сали. Для этого имеется специальный прибор колориметр. Определить количество исследуемого вещества в колориметре можно в тех случаях, когда имеется параллельная зависимость между концентрацией данного вещества в растворе и интенсивностью окрашивания. Простейший тип колориметра – гемометр Сали, которым обычно пользуются для определения Нb в крови. Он состоит из трех пробирок одинакового диаметра. Одна из них пустая, а в других, запаянных с обоих концов, содержится стандартный раствор солянокислого гематина, соответствующий высшему пределу нормы Нb 166,7 г/л. Все три пробирки вставлены в небольшой штатив, задняя стенка которого сделана из стекла молочного цвета. К гемометру приложена пипетка ёмкостью 0,02 мл (или 20 мм3).
Цель: определить абсолютное и относительное содержание гемоглобина. Абсолютное содержание гемоглобина – количество гемоглобина в граммах в 1 л крови. В норме концентрация гемоглобина (абсолютное содержание) у мужчин – 130-160 г/л, у женщин – 120-140 г/л. Относительное содержание гемоглобина – это процентное содержание гемоглобина от высшего предела нормы (166,7 г/л) и составляет для мужчин – 80-90%, а для женщин – 70-80%.
Оснащение:гемометр Сали,кровь, капилляр на 0,02 мл, 0,1 n р-р НСl, пипетка, дистиллированная вода.
Ход работы:в градуированную пробирку наливают 0,1 нормальный раствор соляной кислоты до нижней кольцевой метки, а затем при помощи скарификатора делают укол в мякоть пальца левой руки. Первую каплю крови осторожно снимают ватой, а из последующих набирают в пипетку 0,02 мл крови, тщательно обтирают кончик пипетки снаружи и опускают кровь на дно пробирки так, чтобы верхний слои соляной кислоты остался прозрачным. Промывают пипетку соляной кислотой, не вынимая из раствора, чтобы сохранить определенный объем взятой крови. После этого осторожно встряхивают содержимое и наблюдают за изменением окраски в течение 5 минут. За это время полностью происходит образование солянокислого гематина. Небольшой пипеткой, приложенной к гемометру, набирают дистиллированную воду и добавляют в пробирку к исследуемой жидкости до тех пор, пока цвет раствора не сравняется с цветом стандартных пробирок. При этих условиях процент гематина, а, следовательно, гемоглобина будет одинаков в стандартной и исследуемой крови.
Результаты работы:
Вывод:
РАСЧЕТ ИНДЕКСОВ ЭРИТРОЦИТОВ.
Цветовой показатель характеризует соотношение между количеством гемоглобина крови и числом эритроцитов. Цветовой показатель позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином. Цветовой показатель здорового человека равен 0,85-1,05. Если цветовой показатель выше нормы – гиперхромия. Если ниже нормы – гипохромия.
| WBS | 109/л | 4-9 | лейкоциты |
| GRA | % | 47-72 | гранулоциты (сегментоядер.) |
| LYM(LYC) | 109/л % | 2-5,5 19-37 | лимфоциты |
| MON | 109/л % | 1,2-3,0 3-11 | моноциты |
| RBC | 1012/л 10/мм | 3,9-5,0 0,1-0,6 | эритроциты |
| HB | г/дл(g/dl) г/л | 11-16,0 110-160 | гемоглобин |
| HT, Нrt | % | 36-48 | гематокрит |
| MCV | мк(m3) | 75-95 | сред.V эритроцита |
| MCH | пиког(pg) | 24-34 | сред. содержание HB в эритроците |
| MCHC | г/дл(g/dl) | 30-38 | сред. концентр. НВ в эритроците |
| RDW | % | 11,5-14,5 | распределение эритроцитов по V (анизоцитоз) |
| PLT | 109/л | 150-400 | тромбоциты |
| MPV | мк (m3) | 7,4-10,4 | сред. V тромбоцита |
| PCT | % | 0,15-0,4 | тромбокрит |
| PDW | % | 10-20 | распределение тромбоцитов по V |
1. Цветной показатель (ЦП)или (Fi) фарб-индекс (Farb – цвет, index – показатель) относительное содержание гемоглобина в эритроцитах, рассчитывается по формулам:
ЦП = Hb / высшая норма Нb : Эр./норма Эр. Þ Hb/Эр. • норма Эр./ высшая норма Нb
или упрощенно ЦП = Нb •3/Эритроциты (три первые цифры)
В нормеЦП =0,8-1,0 (у новорожденных – 0,9-1,3; до 1 года – 0,75-0,8; после 1 года – как у взрослых).
2. Среднее содержание гемоглобина в эритроците– СГЭ (MCH, НbЕ):
СГЭ = [Нb]/Эр.
где [Нb] - абсолютное содержание гемоглобина
В норме 24-36 пг (10-12г), (у взрослых – 30 пг; у новорожденных – 33,3 пг; 5-6 мес. – 26,1пг)
3. Средняя концентрация гемоглобина в эритроците–КГЭ (MCHC, НbКЕ):
КГЭ = [Нb]/Нrt • 100%
где [Нb] - абсолютное содержание гемоглобина; Нrt - гематокрит
В норме 30-38%.
4. Средний объем эритроцита– ОЭ (MCV, DVЕ):
ОЭ= Нrt/Эр. • 10, где Нrt - гематокрит
В норме 75-95 мкм3 (m3)
5. Средний диаметр эритроцита (СДЭ)– равен 7,55+0,009мкм.
Примечание: G1 – «флаг» – говорит о возможном наличии юных и палочкоядерных форм лейкоцитов (рекомендуется «ручной» пересчет)
Результаты работы:
Вывод: