Тема: Возбудители бактериальных воздушно-капельных инфекций. Менингококки. Коринебактерии дифтерии, бордетеллы.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Освоить реакцию преципитации для выявления менингококкового антигена в ликворе.

3. Научиться распознавать менингококки в мазках из ликвора.

4. Научиться оценивать реакцию преципитации в геле для определения токсигенности возбудителя дифтерии.

5. Промикроскопировать демонстрационные препараты и правильно их зарисовать.

6. Научиться решать ситуационные задачи по теме занятия.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Менингококки, таксономия, свойства. Серогруппы менингококков. Резистентность.

2. Факторы патогенности менингококков. Патогенез и виды менингококковых инфекций. Иммунитет.

3. Материал для исследования, забор и транспортировка. Методы диагностики менингита, менингококцемии, бактерионосительства. Профилактика и лечение менингококковых инфекций.

4. Возбудители дифтерии: таксономия, свойства, резистентность.

5. Факторы патогенности коринебактерий дифтерии, характеристика токсина, механизм его действия. Генетический контроль образования токсина. Способы определения токсигенности коринебактерий дифтерии.

6. Патогенез и клинические формы дифтерии. Иммунитет. Методы его выявления.

7. Лабораторная диагностика, профилактика и лечение дифтерии.

8. Бордетеллы: таксономия, свойства, факторы патогенности, роль в патологии человека.

9. Лабораторная диагностика, профилактика и лечение коклюша.

10. Биопрепараты: менингококковая химическая вакцина; преципитирующая менингококковая сыворотка; АКДС; агглютинирующие коклюшная и паракоклюшная сыворотка; противодифтерийная антитоксическая сыворотка; дифтерийный анатоксин.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 168-170, 228-231, 248-253.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А. Павлович, 1993, стр. 107-109, 138-140, 150-154.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Постановка реакции кольцепреципитации для выявления менингококкового антигена в ликворе.

Ингредиенты: 1. Ликвор

2. Сыворотка преципитирующая (менингококковая)

3. Сыворотка преципитирующая (пневмококковая)

В пробирку № 1 внести пипеткой 1 мл сыворотки преципитирующей менингококковой, осторожно по стенке наслоить такое же количество ликвор. В пробирку №2 внести сыворотку преципитирующую пневмококковую и также наслоить ликвор. Полученный результат зарисовать в альбоме и сделать заключение о наличии специфического антигена в ликворе.

2. Оценка роста менингококков и бордетелл на питательных средах.

3. Микроскопия и зарисовка препаратов:

ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2

Coryтebacterium diphteriae Bordetella pertussis

окраска по Нейссеруокраска по Граму

ПРЕПАРАТ №3

Neisseria meningitidis в гное

окраска метиленовым синим_

4. ПЦР для выявления токсигенности возбудителя дифтерии.

ЗАНЯТИЕ №7

ТЕМА: Возбудители туберкулеза, лепры. Патогенные микоплазмы.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Научиться в мазках выявлять возбудителей туберкулеза.

3. Уметь оценить рост туберкулезных бактерий на среде Финна и в микрокультурах по Прайсу.

4. Научиться решать ситуационные задачи по теме занятия.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Микобактерии: таксономия. Возбудители туберкулеза, свойства, резистентность.

2. Факторы патогенности микобактерий туберкулеза, механизм их действия, патогенез туберкулеза, иммунитет.

3. Лабораторная диагностика туберкулеза. Дифференциация возбудителей туберкулеза, микобактериозов и кислоустойчивых сапрофитов.

4. Профилактика и лечение туберкулеза.

5. Микобактерии проказы: свойства, роль в патологии человека.

6. Лабораторная диагностика проказы, профилактика и лечение.

7. Микоплазмы: таксономия, свойства. Виды микоплазм – возбудителей респираторных инфекций.

8. Лабораторная диагностика микоплазменной пневмонии.

9. Биопрепараты: вакцина БЦЖ, туберкулин ППД.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 253-260, 297-300.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А. Павлович, 1993, стр. 154-158.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Постановка ИФА для серологической диагностики микоплазменной пневмонии: определение АТ класса IgМ к специфическим антигенам микоплазм.

Реагенты

1) Иммуносорбент – планшет полистироловый с адсорбированными антигенами микоплазм.

2) Исследуемые сыворотки.

3) Положительный контрольный образец сыворотки (К+), содержащий антитела к микоплазменным АГ.

4) Отрицательный контрольный образец сыворотки (К–), не содержащий антител к микоплазменным АГ.

5) Конъюгат – антитела против IgМ человека, меченые пероксидазой хрена.

6) Субстратный буферный раствор, содержащий пероксид водорода.

7) Раствор хромогена тетраметилбензидина (ТМБ).

8) Стоп-реагент – раствор 2M серной кислоты.

Проведение анализа

1) Внесение исследуемых и контрольных образцов.

В лунки планшета, например, А-1 и А-2, В-1 и В-2, С-1 и С-2 и т.д 1 внести по 100 мкл разведенных исследуемых сывороток в дублях. Предварительное разведение сывороток – 1/100.

Внесение контрольных образцов:

100 мкл (К–) в лунки А-11 и A-12;

100 мкл (К+) в лунки В-11 и В-12.

2) Инкубация 30 мин при 37°С в термостате.

3) По окончании инкубации содержимое лунок тщательно аспирировать в сосуд с дезинфицирующим раствором. Промыть планшет 5 раз.

4) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Инкубировать в течение 30 мин при температуре 37°С.

5) По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок и промыть планшет 5 раз.

6) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора хромогена тетраметилбензидина и инкубировать в темноте в течение 30 мин при температуре 18–25°С.

7) Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента.

8) Измерить оптическую плотность на многоканальном фотометре при 450 нм с фоновой длиной волны 620–650 нм.