Тема: СТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ.

СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ.

Цель:уметь выявлять различные структуры бактериальной клетки.

Освоить технику окраски сложными методами: Грама,

Гинса-Бурри, Нейссера, Циля-Нильсена, Ожешко.

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:

1. Основные отличия прокариотических и эукариотических клеток.

2. Структура и химический состав бактериальной клетки.

3. Постоянные и непостоянные структуры бактерий и методы их

выявления.

4. Особенности строения Грам ( + ) и Грам ( - ) бактерий.

5. Сложные методы окраски, сущность каждого метода.

6. Методы определения подвижности микробов.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Записать отличия прокариот и эукариот.

2. Изучить и записать технику окраски по методу Грама Приготовить мазок из смеси двух культур бактерий, окрасить методом Грама. Изучить под микроскопом. Определить форму микробов и их отношение к окраске по Граму. Зарисовать

3. Изучить и записать технику окраски микропрепаратов сложными методами: 1/Нейсера, 2/Циля-Нильсена, 3/Ожешко, 4/Бурри-Гинса.

Промикроскопировать и зарисовать готовые микропрепараты в

окраске этими методами.

4. Изучить и записать методы определения подвижности микробов. Провести темнопольную микроскопию мазка «раздавленная капля». Описать принцип микроскопии.

5. Уборка рабочего места.

6. Отчет преподавателю по протоколу.

Работа №1: Отличия прокариот и эукариот:

Признак	Прокариоты	Эукариоты
Генетический материал
Ядерная мембрана
Гистоны
Набор хромосом
Аппарат Гольджи, митохондрии, хлоропласты
Клеточная стенка
Размеры клеток
Тканевая дифференциация

Работа №2: Сложные методы окраски бактерий.Метод Грама.

Для выявления определенных структур бактерий применяют сложные методы окраски, в основе которых лежит учет химических особенностей этих структур и использование контрастных красителей.

Метод Грама позволяет выявить особенности строения клеточной стенки бактерий.

1. Генцианвиолет (бумажки по Синеву) смочить водой _____мин.

2. Раствор Люголя –_______ мин.

3. Этиловый спирт –________________

4. Промывание водой

5. Фуксин Пфейффера – ____ мин.

6. Промыть водой.

При этом методе окраски одни бактерии не обесцвечиваются спиртом и сохраняют окраску_____________ красителя, вторые обесцвечиваются спиртом и окрашиваются _____________ красителем.

В зависимости от строения клеточной стенки все микроорганизмы подразделяются на Грам (+) и Грам (-). Способность Грам (+) бактерий удерживать генцианвиолет в комплексе с йодом связана со свойством многослойного пептидогликана взаимодействовать с краской.

Особенности строения клеточной стенки Грам (+)и Грам (-) бактерий.

Признак	Грам (+)	Грам (-)
Толщина КС
Пептидогликан
% ПГ от КС
Тейхоевые кислоты
Липиды
Белки-порины

Грам (+) бактерии окрашиваются в _____________________цвет, потому, что__________________________________________________

____________________________________________________________.

Грам (-) бактерии окрашиваются в ____________________цвет,

потому, что __________________________________________________

____________________________________________________________.

Грам (+)_____________________

Грам (- )_____________________

Работа №3: Техника окраски другими сложными методами.

1/Метод Нейссера позволяет определить зерна волютина.

1. ацетат синьки Нейссера (кислый краситель)- ___ мин.

2. Люголь - _____ сек.

3. Промыть водой.

4. Везувин (щелочной краситель)- ____мин.

5. Промыть водой.

Зерна волютина, как щелочные образования, окрашиваются кислым красителем в_____________ цвет. Цитоплазма бактериальной клетки окрашивается щелочным красителем в_______________ цвет.