Работа №2: Устройство оптического микроскопа.

Иммерсионная система.

В микроскопе различают механическую и оптическую части.

Механическая:–1/_____________,2/______________, 3/______________,

4/________________, 5/_________________, 6/_____________________

Оптическая – 1/_______, 2/_______, 3/осветительная система, которая состоит из: а)_____________, б) ____________, в)__________________.

В зависимости от среды, которая находится между объективом и препаратом, различают «сухие» объективы малого и среднего увеличения и иммерсионные (увеличение х90- х100). Между фронтальной линзой такого объектива помещают иммерсионное масло (кедровое или синтетическое). Иммерсионное масло имеет показатель преломления как у стекла, что обеспечивает увеличение разрешающей способности объектива.

Большинство микроорганизмов изучают в световом микроскопе с окулярами х7 или х10 и объективом х90.

Техника иммерсионной микроскопии:

1. Зеркало ____________________.

2. Конденсор __________________.

3. Диафрагма конденсора ________________________

4. На предметный столик помещают микропрепарат, иммерсионное масло (да, нет).

5. Под контролем зрения сбоку опускают объектив почти до упора.

6. Глядя в окуляр, медленно поворачивают ______________на себя до появления изображения.

7 Четкость изображения устанавливают __________________.

Работа №3: Правила приготовления микропрепаратов. Приготовление микропрепаратов из чистой культуры.

Мазки из крови готовят с помощью второго стекла с отшлифованным краем. Каплю крови наносят у левого края стекла, перед каплей под углом помещают край отшлифованного стекла и продвигают его вперед вместе с каплей крови.

Мазки из мокроты и гноя – материал стерильной петлей наносят на середину предметного стекла, накрывают вторым предметным стеклом и с усилием раздвигают в стороны.

Мазки из гноя, взятого с помощью тампона – плоскостью тампона готовят штриховой мазок по середине стекла.

Мазки-отпечатки из органов – вырезанный кусочек органа поверхностью среза прижимают к стеклу.

Мазки из культуры бактерий, выращенной на плотной питательной среде, готовят с помощью бактериологической петли. Правило: бактериологическая петля стерилизуется до и после любой работы с ней и может находиться только в штативе или в руке.

Этапы приготовления мазка:

1. Предметное стекло обезжирить мылом.

2. Петлей взять каплю стерильного физиологического раствора

и нанести ее на середину предметного стекла.

3. Плоскостью стерильной петли осторожно снять культуру с агара в пробирке или чашке Петри и внести ее в каплю на стекле.

4. Круговыми движениями петли культуру растереть в капле, чтобы получился равномерный мазок диаметром около 2 см.

5. Мазок высушить над парами спиртовки.

6. Зафиксировать.

7. Окрасить и снова высушить.

8. Иммерсионная микроскопия.

Значение фиксации: а) ___________________________

б)_____________________, в)_________________________.

Методы фиксации:

1. Термическая –

а) в пламени спиртовки: 3 раза медленно провести мазок через пламя;

б) несколько капель спирта поджечь на стекле (при окраске по методу

Бурри-Гинса).

2. Химическая – мазок опустить в ацетон на ___ мин., или в 95% этанол на ____ мин., или в смесь Никифорова (1:1 спирт и эфир) – на ____ мин.

Простые методы окраски (принцип:____________________________) генцианвиолет, метиленовая синь, фуксин, и др. Для окрашивания фона в качестве краски используют черную тушь (метод Бурри).

Работа № 4: Приготовление мазков из культур с плотной питательной среды и окраска их простым методом.

1. Приготовить два мазка из различных культур бактерий.

2. Зафиксировать в пламени спиртовки.

3. Окрасить фуксином или генцианвиолетом (по Синеву) 3-5 мин.

4. Промыть и высушить.

5. Изучить под микроскопом с иммерсией.

6. Зарисовать.

При простом методе окраски выявляется только форма микроба.

По форме выделяют 4 группы бактерий:

1. Шаровидные – кокки: монококки, диплококки (пневмококки, нейсерии – менингококки, гонококки), тетракокки, стрептококки, сарцины, стафилококки.

2. Палочковидные: а) спорообразующие – бациллы, клостридии,

б) неспорооборазующие - кишечная палочка, дифтерийная палочка, туберкулезная палочка, вибрион холеры, палочка чумы.