Определение группы крови (система АВ0)
Дальнейший текст этого раздела взят из «Пропедевтика внутренних болезней» [19] и «Внутренние болезни» [10].
Групповая принадлежность крови определяется по наличию реакции агглютинации при помощи реактивов, содержащих АТ к эритроцитарным агглютиногенам А и В. Реакцию проводят при комнатной температуре.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ СИСТЕМЫ AB0 С ПОМОЩЬЮ СТАНДАРТНЫХ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИЗИРУЮЩИХ СЫВОРОТОК
Оснащение
Стандартные наборы сывороток системы АВ0 двух серий. Планшет (тарелка) с луночками для определения группы крови с соответствующей маркировкой.
Стандартные сыворотки содержат только агглютинины соответствующих групп крови. Так, сыворотка 0(I) группы содержит агглютинины a и b, А(II) группы — b, B(III) группы — a, AB(IV) группы — агглютининов не содержит. Стандартные сыворотки имеют стандартную окраску: сыворотка 0(I) группы не окрашена, А(II) группы — синяя, B(III) группы — розовая.
Техника
1. Стандартные сыворотки наносят в лунки планшета под соответствующими обозначениями таким образом, чтобы получилось два ряда по три капли (0,1 мл) в следующем порядке: 0(I), А(II), В(III).
2. Рядом с каждой каплей сыворотки наносят по маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови. Сыворотку и кровь в каждой паре капель перемешивают уголком предметного стекла. При этом каждую пару капель перемешивают новым уголком стекла.
3. За ходом реакции наблюдают в течение 5 мин, слегка покачивая пластинку. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, в капли, где видна агглютинация, добавляют по капле изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение до истечения 5 мин.
4. Если агглютинация наступает, реакцию считают положительной, если не наступает — отрицательной. Различные сочетания положительных и отрицательных результатов позволяют судить о групповой принадлежности исследуемой крови (табл. 24‑9).
Таблица 24–9. Определение группы крови системы AB0 с помощью стандартных изогемагглютинизирующих сывороток
| Группа крови | Стандартные сыворотки | ||
| 0(I) | А(II) | В(III) | |
| 0(I) | – | – | – |
| А(II) | + | + | – |
| В(III) | + | – | + |
| AB(IV) | + | + | + |
Примечание. + — наличие агглютинации, — — отсутствие агглютинации.
· Отсутствие агглютинации во всех 3 лунках указывает на то, что исследуемая кровь группы 0(I).
· Агглютинация в первой и второй лунках и отсутствие агглютинации в третье луночке указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе А(II).
· Агглютинация в первой и третьей луночках и отсутствие агглютинации во второй луночке указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе В(III).
· Наличие агглютинации во всех трёх луночках указывает на то, что исследуемая кровь четвёртой группы. В этом случае для исключения наличия неспецифической агглютинации проводят контрольное исследование со стандартной сывороткой группа AB(IV), не содержащей групповые агглютинины (a и b), цвет — жёлтый.
При наличии агглютинации во всех каплях крови, в том числе и группы AB(IV), групповую принадлежность по системе АВ0 определить невозможно. В таких случаях кровь необходимо направить на станцию переливания крови для серологического исследования.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВ0 С ПОМОЩЬЮ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АТ
Для определения групповой принадлежности крови применяют также стандартные реагенты — моноклональные АТ (цоликлоны анти-А и анти-В).
Цоликлоны анти-А и анти-В выпускают в лиофилизированной форме в ампулах по 50 доз. Кроме АТ, реагент содержит краситель (розовый — для цоликлонов анти-А, синий — для цоликлонов анти-В). После растворения цоликлоны переносят в прилагаемые к набору флаконы.
Определение групп крови цоликлонами анти-А и анти-В имеет ряд преимуществ по сравнению с определением изогемагглютинирующими сыворотками: обеспечиваются более высокие качество агглютинации, достоверность и надёжность результатов, исключается возможность панагглютинации, заметно упрощается процедура определения и сокращаются сроки реакции (наступает уже в первые 1–2 с).
Техника
На планшет наносят по одной капле (0,1 мл) цоликлонов анти-А и анти-В. Рядом с этими каплями наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови. Стандартные реагенты и капли крови смешивают и наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин (табл. 24‑10).
Таблица 24–10. Определение группы крови системы AB0 с помощью моноклональных АТ
| Группа крови | Моноклональные АТ | |
| Цоликлон анти-А | Цоликлон анти-B | |
| 0(I) | – | – |
| А(II) | + | – |
| В(III) | – | + |
| AB(IV) | + | + |
Примечание. + — наличие агглютинации, — — отсутствие агглютинации.
· Отсутствии агглютинации и с цоликлоном анти-А и с цоликлоном анти-В указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе 0(I).
· Наличие агглютинации с цоликлоном анти-А, и отсутствие с цоликлоном анти-В указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе А(II).
· Наличие агглютинации с цоликлоном анти-В, и отсутствие с цоликлоном анти-А указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе В(III).
· Наличие агглютинации в обеих луночках (как с цоликлоном анти-А, так и с цоликлоном анти-В) указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе АВ(IV).
При подозрении на спонтанную агглютинацию у больных с группой крови AB(IV) проводят контрольное исследование, где вместо цоликлонов анти-А и анти-В используют изотонический раствор хлорида натрия. Реакция агглютинации должна быть отрицательной.
Лейкоциты
Лейкоциты — ядерные клетки шаровидной формы (см. рис 24–1 и 24–2). В цитоплазме лейкоцитов находятся гранулы. В зависимости от типа гранул, лейкоциты подразделяют на гранулоциты (зернистые) и агранулоциты (незернистые).
· Гранулоциты (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы) содержат специфические (вторичные) и азурофильные (лизосомы) гранулы.
· Агранулоциты (моноциты, лимфоциты) содержат только азурофильные гранулы.
· Ядро. Гранулоциты имеют дольчатое ядро разнообразной формы, отсюда их коллективное название — полиморфноядерные лейкоциты. Лимфоциты и моноциты имеют недольчатое ядро, это — мононуклеарные лейкоциты.
· Подвижность. Лейкоциты используют кровоток как средство пассивного транспорта. Лейкоциты имеют сократительные белки (актин, миозин) и способны к активному перемещению, что позволяет им выходить из кровеносных сосудов, проникая между эндотелиальными клетками (диапедез) и разрушая секретируемыми ими ферментами базальную мембрану эндотелия. Направленную миграцию лейкоцитов (хемокинез, хемотаксис) контролируют различные вещества (в том числе хемоаттрактанты).
· Функции. Лейкоциты участвуют в защитных реакциях, уничтожая микроорганизмы, захватывая инородные частицы и продукты распада тканей, осуществляя реакции гуморального и клеточного иммунитета.
Число лейкоцитов в крови. В 1 л крови взрослого здорового человека содержится 3,8–9,8´109 лейкоцитов. Изменяющаяся потребность в отдельных типах лейкоцитов отражается в увеличении (лейкоцитоз) или уменьшении (лейкопения) количества лейкоцитов в единице объёма циркулирующей крови. Например, при острых бактериальных инфекциях в крови увеличивается число нейтрофилов (нейтрофильный лейкоцитоз). При вирусных и хронических инфекциях происходит увеличение числа лимфоцитов (лимфоцитоз), при паразитарных инфекциях наблюдается эозинофилия.