Фагоцитоз. контактный киллинг
Изучение активности клеточных механизмов врожденного иммунитета
Вопросы для подготовки
1. Врожденный иммунитет, определение, эффекторы, механизмы и функции.
2. Патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (PAMP) и патоген-распознающие рецепторы (PRR), определение понятия, примеры. Классификация PRR.
3. Toll-like рецепторы, история открытия и классификация. Трансдукция сигнала.
4. Хемотаксис. Роль молекул адгезии и хемокинов в миграции лейкоцитов из кровяного русла в очаг воспаления. Воспаление как защитная реакция организма, стадии.
5. Фагоцитоз, определение понятия, роль фагоцитоза в иммунной защите.
6. Общая характеристика фагоцитирующих клеток их функциональные отличия. Распознавание клетками объектов фагоцитоза. Опсонизация и рецепторы фагоцитов.
7. Общая характеристика стадий фагоцитоза. Механизмы завершенного и незавершенного фагоцитоза.
8. Участие цитоскелета в поглощении фагоцитируемых объектов.
9. Бактерицидные системы фагоцитов.
10. NK-клетки, рецепторы и функции.
11. Механизм контактного киллинга.
12. Заполнить таблицу «Роль показателей естественной резистентности в антимикробной защите организма человека»:
| Фактор | Роль в антимикробной защите | Факторы естественной резистентности (для внесения в незаполненный столбец таблицы) |
| Секреция цитокинов, регулирующих клеточные и гуморальные механизмы защиты | Нейтрофилы Естественные киллеры (NK-клетки) Белки системы комплемента Белки острой фазы воспаления (БОФ) Лизоцим Дефенсины Макрофаги Дендритные клетки Тромбоцитарный катионный белок (ТКБ) | |
| Фагоцитоз внеклеточных патогенов | ||
| Лизис клеточной стенки преимущественно грам+ бактерий | ||
| Опсонины (факторы, усиливающие фагоцитоз) | ||
| Уничтожение клеток, инфицированных микроорганизмами, опухолевых клеток | ||
| Лизис преимущественно грам- бактерий и усиление цитолиза инфицированных, опухолевых клеток | ||
| Универсальные антимикробным факторы (широкий спектр антимикробного действия) |
9. Заполнить таблицу «Неспецифическое распознавание патогенов»:
| PAMP* | PRR* | PAMP | PRR |
| Пептидогликан | Порины, белки клеточной стенки, белки ресничек | ||
| Тейхоевые и липотейхоевые кислоты | |||
| Несиалированные полисахариды | Белки вирусных капсидов | ||
| Липополисахариды | Гликопротеины суперкапсидов | ||
| Липоарабиноманнаны, миколовые кислоты | Неметилированные СрG-ДНК | ||
| Флаггеллин | Двунитевые РНК |
* PAMP – патоген-ассоциированные молекулярные паттерны и PRR – патоген-распознающие рецепторы
Практическая работа
З а д а н и е №1
Определить фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови (фагоцитарный показатель – ФП и фагоцитарное число – ФЧ). Оформить протокол в виде рисунка. Сделать заключение.
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
В центрифужную пробирку с 0,25 мл 2 %-ного цитрата натрия вносят 0,5 мл исследуемой цельной капиллярной или венозной крови, взятой натощак, добавляют 0,25 мл 2 млрд взвеси суточной микробной культуры (S. aureus 209Р или Е. coli Гусев), предварительно подогретой до 37 ºС. Лейкоцитарно-микробную смесь инкубируют при 37°С в течение 40 мин при постоянном перемешивании. Из полученной взвеси готовят 2 тонких мазка, высушивают при комнатной температуре, фиксируют в смеси Никифорова 5-10 мин и окрашивают по Романовскому-Гимзе.
Готовые окрашенные мазки микроскопируют с иммерсией. В разных полях зрения находят не менее 25 лейкоцитов и считают количество микробов, поглощенное каждым лейкоцитом. Для характеристики фагоцитарной активности крови подсчитывают ФП и ФЧ.
ФП – это процент активно фагоцитирующих лейкоцитов в расчете на 100 лейкоцитов.
ФЧ – среднее количество микробов, поглощенных одним фагоцитом (для этого общее число поглощенных микробов делят на количество подсчитанных клеток – 25).
Для лейкоцитов крови здоровых людей ФП колеблется от 40 до 80%, ФЧ – от 4 до 10.
З а д а н и е №2
Изучить незавершенный фагоцитоз гонококка. Микроскопировать с иммерсией и объективом ´90 фиксированный препарат, приготовленный из гнойного отделяемого больного гонореей, окраска по Граму. Оформить протокол в виде рисунка с обозначениями. Ответить на вопросы:
1. Какой метод исследования применен?
2. В чем причина незавершенного фагоцитоза гонококков?
Занятие №3
Система комплемента. Антимикробные пептиды и белки